miR-133b在前列腺癌骨转移诊断、预测、治疗中的应用制造技术

本发明专利技术公开了miR‑133b在前列腺癌骨转移诊断、预测、治疗中的应用。本发明专利技术研究发现miR‑133b在前列腺癌中低表达，在前列腺癌骨转移中表达量更低，且进一步研究发现，miR‑133b低表达与前列腺癌骨转移相关，并预示着更短的无骨转移生存时间，此外，过表达miR‑133b能在体外抑制前列腺癌迁移和侵袭，在体内抑制前列腺癌骨转移，并且miR‑133b模拟物同样能在体内抑制前列腺癌骨转移，以上结果表明，miR‑133b可应用于制备前列腺癌骨转移诊断试剂、预测试剂及抑制骨转移药物中。

Application of miR 133b in bone metastasis of prostate cancer diagnosis, prediction and treatment of

The invention discloses a miR 133b in bone metastasis of prostate cancer diagnosis, prediction and treatment application. The present study found that miR low expression of 133b in prostate cancer, the expression is lower in prostate cancer bone metastasis, and the further study found that miR 133b low expression of metastasis associated with prostate cancer bone, and indicates that no shorter survival time, bone metastasis in addition, overexpression of miR 133b can inhibit migration and invasion of prostate cancer cells in vitro and in vivo inhibition of bone metastasis of prostate cancer, and the miR analogue of 133b can also inhibit prostate cancer bone metastasis in vivo, the above results show that miR 133b can be used in the preparation of bone metastasis of prostate cancer diagnosis reagent, pre test agent and inhibition of bone metastasis in medicine.

【技术实现步骤摘要】
miR-133b在前列腺癌骨转移诊断、预测、治疗中的应用
本专利技术属于分子生物学领域，更具体地涉及miR-133b在前列腺癌骨转移诊断、预测、治疗中的应用。
技术介绍
前列腺癌(ProstateCancer,PCa)是男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一。癌症转移会大大增加前列腺癌患者的死亡率，骨是癌症转移的第二最常见部位，在我国超过80％的前列腺癌患者在确诊时已经发生骨转移，而骨转移是导致前列腺癌患者死亡的重要原因，因此，对骨转移的早期诊断，是临床诊疗和预后的关键。此外，对于中晚期前列腺癌患者，手术治疗的效果差，大多数采用药物治疗。根据不同的病情可以采用化学药物治疗、外放射治疗、放射性核素内放射治疗以及各种疗法的综合应用等。然而，放化疗药物不仅作用于肿瘤，还可以作用于肿瘤周围健康的组织，因而在杀伤肿瘤的同时，也给机体带来了很大的副作用，最终影响对肿瘤的治疗效果。因此，本领域迫切需要开发早期判断前列腺癌骨转移的特异性标志物及前列腺癌骨转移的靶向药物。miRNA是具有18～24个核苷酸的非编码RNA，其结合信使RNA的3’未翻译区域中的互补性位点且抑制它们的翻译。单一miRNA能够靶向若干mRNA且调控细胞通路和细胞命运。已有研究表明，一些miRNA会促进肿瘤细胞转移，如脑癌中的miR-10b、结肠直肠癌中的miR-21、前列腺癌中的miR-184。也有发现抑制前列腺癌骨转移的一些miRNA，如miR-143、miR-145和miR-203。目前尚没有miR-133b与前列腺癌骨转移之间的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供miR-133b在制备前列腺癌骨转移诊断试剂、预测试剂、抑制骨转移药物中的应用。本专利技术所采取的技术方案是：miR-133b在制备前列腺癌骨转移诊断和/或预测试剂盒中的应用。作为上述应用的优选，所述试剂含有能定量检测miR-133b和/或其编码基因的试剂。作为上述应用的优选，所述试剂含有miR-133b的特异性引物、探针及芯片中的一种或多种。作为上述应用的优选，所述miR-133b选自pri-miRNA、pre-miRNA、成熟miRNA、dsmiRNA及其片段或变体中的一种或几种。诊断和/或预测前列腺癌骨转移的试剂盒，含有能定量检测miR-133b和/或其编码基因的试剂。miR-133b在制备抑制前列腺癌骨转移的药物中的应用。作为上述应用的优选，所述药物含有以下物质中的一种或多种：1)能促进miR-133b表达的物质；2)能增强miR-133b活性的物质；3)能增长miR-133b有效作用时间的物质；4)能增强miR-133b稳定性的物质；5)模拟miR-133b结构的物质。作为上述应用的优选，所述药物含有以下物质中的一种或多种：1)miR-133b分子；2)miR-133b修饰物；3)miR-133b模拟物；4)编码miR-133b的DNA；5)表达miR-133b的载体或病毒。作为上述应用的优选，所述miR-133b选自pri-miRNA、pre-miRNA、成熟miRNA、dsmiRNA及其片段或变体中的一种或几种。抑制前列腺癌骨转移的药物，所述药物含有以下物质中的一种或多种：1)能促进miR-133b表达的物质；2)能增强miR-133b活性的物质；3)能增长miR-133b有效作用时间的物质；4)能增强miR-133b稳定性的物质；5)模拟miR-133b结构的物质。本专利技术的有益效果是：本专利技术研究发现miR-133b在前列腺癌中低表达，在前列腺癌骨转移中表达量更低，且进一步研究发现，miR-133b低表达与前列腺癌骨转移相关，并预示着更短的无骨转移生存时间，此外，过表达miR-133b能在体外抑制前列腺癌迁移和侵袭，在体内抑制前列腺癌骨转移，并且miR-133b模拟物同样能在体内抑制前列腺癌骨转移，以上结果表明，miR-133b可应用于制备前列腺癌骨转移诊断试剂、预测试剂及抑制骨转移药物中。附图说明图1：临床样品及细胞系中miR-133b的表达情况；其中，图A为前列腺癌组织(206例)和良性前列腺组织(48例)中miR-133b的表达情况，图B为20对配对的前列腺癌组织和癌旁组织中miR-133b的表达情况，图C为前列腺癌骨转移和无骨转移组织中miR-133b的表达情况；图D为良性前列腺细胞及前列腺癌细胞中miR-133b的表达情况；图中，癌症/良性表示前列腺癌组织中miR-133b的表达量/良性前列腺组织中miR-133b的表达量；癌症/癌旁表示前列腺癌组织中miR-133b的表达量/癌旁组织中miR-133b的表达量；图2：前列腺癌总生存时间和无骨转移生存时间与miR-133b表达量的关系；其中，图A为前列腺癌总生存时间与miR-133b表达量的关系，图B为无骨转移生存时间与miR-133b表达量的关系，图中，L为miR-133b低表达组，H为miR-133b高表达组；图3：构建的表达载体转染到前列腺癌细胞系中miR-133b的表达情况；图4：miR-133b过表达在体外抑制前列腺癌迁移和侵袭结果；图5：miR-133b过表达在体内抑制前列腺癌骨转移结果；其中，图A为BLI成像示意图，图B为骨X射线图，图C为骨HE染色图，图D为X射线检测骨转移评分结果；图E为BLI信号结果图；图F为无骨转移生存曲线，图G为总生存曲线，图中，vector表示对照组，miR-133b表示miR-133b组；图6：miR-133模拟物能抑制前列腺癌骨转移结果。其中，图A为BLI成像示意图，图B为骨X射线图，图C为骨HE染色图，图D为X射线检测骨转移评分结果；图E为BLI信号结果图；图F为总生存曲线，图中，vector表示对照组，agomiR-133b表示miR-133b模拟物组。具体实施方式现结合具体实验例进一步阐述本专利技术，但并不局限于此。下述实验例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，具体条件未注明的，按常规操作或厂家所建议的条件，下述实验例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。本专利技术的人前列腺癌细胞系22RV1、PC-3、VCaP、DU145、LNCaP和正常的人前列腺上皮细胞RWPE-1由中科院上海细胞库提供；人前列腺癌细胞C4-2B购自MD安德森癌症中心；以上细胞系培养方法按本领域常规操作；202例前列腺癌组织(包括20例配对的前列腺癌组织及癌旁组织)、48例良性前列腺组织由广东省医学分子诊断协同创新发展中心临床生物样品库(江门市中心医院)提供，以上临床标本均来自手术过程或穿刺活检，经临床病理学确诊。实验例1、miR-133b在前列腺癌组织中低表达，在骨转移前列腺癌组织中进一步低表达方法：RNA提取、逆转录和实时定量RT-PCR检测miR-133b：根据RNA提取试剂(Qiagen公司)说明书提取所有组织和细胞的总RNA，按照RevertAidFirstStrandcDNASynthesisKit(ThermoFisher公司)说明书进行逆转录，利用iQSYBRGreen试剂和CFX96实时定量PCR系统(BIO-RAD公司)，选用2-ddCt相对定量法进行荧光定量检测，以U6为内参，求算miR-133b的相对表达量，miR-133b和U6的引本文档来自技高网...

【技术保护点】
miR‑133b在制备前列腺癌骨转移诊断和/或预测试剂盒中的应用。

【技术特征摘要】
1.miR-133b在制备前列腺癌骨转移诊断和/或预测试剂盒中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，所述试剂含有能定量检测miR-133b和/或其编码基因的试剂。3.根据权利要求1所述的应用，所述试剂含有miR-133b的特异性引物、探针及芯片中的一种或多种。4.根据权利要求1所述的应用，所述miR-133b选自pri-miRNA、pre-miRNA、成熟miRNA、dsmiRNA及其片段或变体中的一种或几种。5.诊断和/或预测前列腺癌骨转移的试剂盒，含有能定量检测miR-133b和/或其编码基因的试剂。6.miR-133b在制备抑制前列腺癌骨转移的药物中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，所述药物含有以下物质中的一种或多种：1)能促进miR-133b表达的物质；2)能增强miR-133b活性的物质；3)能增长miR-133...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄帅，唐欲博，瓦庆德，彭新生，郭远清，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第二医院，
类型：发明
国别省市：广东,44