一种肾癌预后评估生物标志物及其检测试剂和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种肾癌预后评估生物标志物及其检测试剂和应用。本发明专利技术提供了lncRNA‑ReCAL在制备指示肾癌预后的检测试剂或试剂盒中的应用。进一步地，本发明专利技术提供了血清中lncRNA‑ReCAL检测的试剂盒，通过对肾癌患者血清的检测，发现在血清中能够检测到lncRNA‑ReCAL，并且血清中lncRNA‑ReCAL含量高的肾癌患者预后更差。本发明专利技术为肾癌血清学预后评估提供了新的临床手段，具有重要的临床意义和推广应用前景。

Biomarkers and their detection reagents and applications for the prognosis assessment of renal cancer

The present invention discloses a biomarker for evaluating the prognosis of renal cancer and its detection reagent and application. The present invention provides a lncRNA ReCAL in the preparation of indicating prognosis application kit or in the kit. Further, the invention provides a kit for serum lncRNA ReCAL detection, through the detection of the serum of patients with renal cell carcinoma, lncRNA ReCAL can be detected in blood serum, and the prognosis of patients with RCC lncRNA high serum ReCAL content is worse. The invention provides a new clinical means for the prognosis evaluation of renal cell carcinoma. It has important clinical significance and the prospect of popularization and application.

【技术实现步骤摘要】
一种肾癌预后评估生物标志物及其检测试剂和应用
本专利技术涉及医学生物检测
，具体涉及一种肾癌预后评估生物标志物及其检测试剂和应用。
技术介绍
肾癌是一种高度异质性的肿瘤，即使临床分期相同的患者，预后也存在显著差异。早期肾癌患者根治术后，20-30％的病人最终会出现复发转移，进展期肾癌患者5年生存率不到30％。如果能够对早期肾癌患者进行准确、有效地预后评估，将可以辅助临床实践选择、指导患者复查周期，实现对肿瘤进展早发现、早治疗。因此，筛选鉴定新的、有效的肾癌预后分子标志物，特别是早期肾癌，具有重要的临床意义。长链非编码RNA(longnon-codingRNA,lncRNA)是长度大于200个核苷酸的非编码RNA，其表达具有明显的组织和细胞特异性，作用方式多样，可以从表观遗传、转录、翻译等多个水平对基因表达进行调控。lncRNA能够广泛地参与细胞分化、个体发育等生命过程，其异常表达与包括肿瘤在内的多种人类重大疾病密切相关。lncRNA是近年来肿瘤研究的热点，其具有高度的器官特异性，因此lncRNAs有望成为肾癌患者预后判定的生物学标志物，为肿瘤标志物研究开辟了一个全新的突破口，为肾癌预后评估提供新方向。lncRNA作为肾癌预后标志物的价值至今尚未见大样本多中心研究报道。血清学标志物的筛选鉴定和在疾病诊断、预后判定、疗效评估中的应用一直是医学领域的研究热点。非编码RNA作为血清学标志物的研究取得了很大进展，例如已有多种microRNA被发现可以用于疾病的诊断、预后及疗效评估。但是，lncRNA在血清学标志物中的应用研究还非常少。lncRNA作为肾癌血清学预后标志物的价值至今尚未见文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种长链非编码RNAReCAL(lncRNA-ReCAL)的新用途。本专利技术的另一个目的在于提供一种检测血清中lncRNA-ReCAL的试剂盒。在前期的研究中，本专利技术人利用国际上三组不同种族的大规模肾透明细胞癌转录组测序数据(AmericacohortfromTCGAproject,n＝530(参见文献CancerGenomeAtlasResearchNetwork.Comprehensivemolecularcharacterizationofclearcellrenalcellcarcinoma[J].Nature,2013,499(7456):43)；JapancohortfromEGAS00001000509,n＝100(参见文献SatoY,YoshizatoT,ShiraishiY,etal.Integratedmolecularanalysisofclear-cellrenalcellcarcinoma[J].Naturegenetics,2013,45(8):860-867)；EuropecohortfromICGCproject,n＝91(参见文献SceloG,RiazalhosseiniY,GregerL,etal.VariationingenomiclandscapeofclearcellrenalcellcarcinomaacrossEurope[J].Naturecommunications,2014,5:5135))，结合临床预后信息，通过单因素Cox回归分析筛选出与肾癌预后具有显著相关性的lncRNAs，最终筛选出一条在三个肾癌队列中均与患者总体生存率具有显著相关性的lncRNA(ENSG00000238113)，由于该lncRNA尚未报道，我们将其命名为RenalCancerAssociatedLncRNA(ReCAL)。进一步地，本专利技术人利用长期随访的、来自三个独立队列(ChanghaiCohort(n＝1326),长征队列(n＝353),南京队列(n＝229))的1908例肾癌患者，对lncRNA-ReCAL作为肾癌预后标志物的效能进行了验证。以上结果提示lncRNA-ReCAL可以作为肾癌预后评估判断的生物学标志物。为评估lncRNA-ReCAL的预后分层价值，我们根据美国梅奥医院(MayoClinic)制订的SSIGN危险评分系统，依据肿瘤分期(stage)、大小(size)、分级(grade)和坏死(necrosis)情况(参见文献ZigeunerR,HuttererG,ChromeckiT,etal.ExternalvalidationoftheMayoClinicstage,size,grade,andnecrosis(SSIGN)scoreforclear-cellrenalcellcarcinomainasingleEuropeancentreapplyingroutinepathology[J].Europeanurology,2010,57(1):102-111)，将每个队列分为3个亚组，即SSIGN0-3(低风险组)、SSIGN4-7(中风险组)、SSIGN>8(高风险组)，对每个亚组进行Kaplan-Meier曲线分析，发现在低风险组，lncRNA-ReCAL表达对肾癌预后的区分能力最显著。以上结果提示lncRNA-ReCAL表达在低风险肾癌患者中的预测价值更大，提示lncRNA-ReCAL可以作为早期肾癌的预后标志物，具有重要临床意义。进一步地，本专利技术人建立了人血清中lncRNA-ReCAL的检测方法和提供了血清中lncRNA-ReCAL检测的试剂盒，通过对肾癌病人术前血清的检测，我们首先发现在血清中能够检测到lncRNA-ReCAL，并且术前血清中的lncRNA-ReCAL含量高的肾癌患者预后更差，提示lncRNA-ReCAL可以作为肾癌血清学预后标志物。因此，我们认为，lncRNA-ReCAL具备作为肾癌预后评估血清学标志物的可能性。本专利技术的目的可通过以下技术方案实现：lncRNA-ReCAL在制备评估肾癌预后的检测试剂或试剂盒中的应用，其特征在于其在用Ensemble数据库中的登录号为ENSG00000238113。所述的lncRNA-ReCAL优选在制备评估肾癌预后的血清学检测试剂或试剂盒中的应用。检测所述的lncRNA-ReCAL的引物、探针或基因芯片。引物优选自P1、P2、P3、P4中的任意一对，优选P1；其中，P1由SEQIDNO.1所示的上游引物和SEQIDNO.2所示的下游引物组成；P2由SEQIDNO.3所示的上游引物和SEQIDNO.4所示的下游引物组成；P3由SEQIDNO.5所示的上游引物和SEQIDNO.6所示的下游引物组成；P4由SEQIDNO.7所示的上游引物和SEQIDNO.8所示的下游引物组成。所述的引物、探针或基因芯片在制备评估肾癌预后的检测试剂或试剂盒中的应用，优选在制备评估肾癌预后的血清学检测试剂或试剂盒中的应用，进一步优选在制备评估早期肾癌预后的血清学检测试剂或试剂盒中的应用。一种评估肾癌预后的试剂盒，该试剂盒用于检测生物样本中lncRNA-ReCAL。该试剂盒优选通过逆转录、实时定量PCR技术检测生物样品中lncRNA-ReCAL的表达量。该试剂盒优选包括：上述的对lncRNA-ReCAL具有检测特异性的探针、基因芯片，或PCR引物；进一步优选引物P1、P2、P3、P本文档来自技高网...

【技术保护点】
lncRNA‑ReCAL在制备评估肾癌预后的检测试剂或试剂盒中的应用，其特征在于其在用Ensemble数据库中的登录号为ENSG00000238113。

【技术特征摘要】
1.lncRNA-ReCAL在制备评估肾癌预后的检测试剂或试剂盒中的应用，其特征在于其在用Ensemble数据库中的登录号为ENSG00000238113。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于权利要求1所述的lncRNA-ReCAL在制备评估肾癌预后的血清学检测试剂或试剂盒中的应用。3.检测权利要求1中所述的lncRNA-ReCAL的引物、探针或基因芯片。4.根据权利要求3所述的引物、探针或基因芯片，其特征在于引物选自P1、P2、P3、P4中的任意一对；其中，P1由SEQIDNO.1所示的上游引物和SEQIDNO.2所示的下游引物组成；P2由SEQIDNO.3所示的上游引物和SEQIDNO.4所示的下游引物组成；P3由SEQIDNO.5所示的上游引物和SEQIDNO.6所示的下游引物组成；P4由SEQIDNO.7所示的上游引物和SEQIDNO.8所示的下游引物组成。5.根据权利要求4所述的引物、探针或基因芯片，其特征在于引物选自P1。6.权利要求3-5中任一项所述的引...

【专利技术属性】
技术研发人员：曲乐，陈程，何昊玮，
申请(专利权)人：中国人民解放军南京军区南京总医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32