一种不含胚芽的甜瓜种子全基因组DNA的提取方法技术
A method for the extraction of whole genome DNA of melon seeds without germ
The invention relates to the field of biological technology, in particular to a method for extracting whole genome DNA of melon seeds without germ. An extraction method of excluding germ Muskmelon Seeds provided by the invention of genomic DNA, using tissue grinding instrument of Muskmelon Seeds containing germ grinding, extracted by CTAB method, to solve the traditional method with liquid nitrogen freezing and grinding is time-consuming and the cost is high, and the stability of DNA extraction is better high purity and concentration.
【技术实现步骤摘要】
一种不含胚芽的甜瓜种子全基因组DNA的提取方法
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种不含胚芽的甜瓜种子全基因组DNA的提取方法。
技术介绍
甜瓜(CucumismeloL.)为葫芦科甜瓜属一年生草本植物，是世界范围内广泛种植且多样性较高的重要园艺作物，联合国粮农组织的数据显示，2011年世界范围内的甜瓜产量为两千七百万吨，是重要的农业经济作物,已进入世界十大重要水果之列。我国已有3000多年的甜瓜栽培历史，是世界上最早栽培甜瓜的国家之一，也是目前世界上甜瓜栽培面积最大、产量最高的国家。我国的栽培甜瓜主要分为厚皮甜瓜和薄皮甜瓜两大类，是世界上甜瓜栽培面积最大、产量最高的国家。由于其色、香、味兼具，同时又含有人类营养所必需的各种成分：碳水化合物、蛋白质、脂肪、钙、磷、铁、胡萝卜素、VC、VB、VB2、Vpp等，尤其是VC含量超过牛奶等动物食品的十几倍。甜瓜的果肉味甘、寒、滑，具有止渴、除烦热、利小便之功效；其瓜蒂可以入药，名苦丁香。甜瓜用途广泛，除了可以直接食用外还可以加工成瓜干、瓜脯、瓜酱等。世界范围内，其地位甚至要高于西瓜。目前，甜瓜DNA提取主要在甜瓜种子培...
【技术保护点】
一种不含胚芽的甜瓜种子全基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：a.取不含胚芽的甜瓜种子，剪碎，研磨，研磨结束后加入CTAB提取缓冲液并进行水浴；b.加入等体积的苯酚‑氯仿‑异戊醇混合液，混匀，离心；c.吸上清，上清中加入Rnase A孵育；d.加入氯仿‑异戊醇溶液，混匀，离心；e.吸上清，上清中加入异丙醇，混匀，于‑20～‑30℃放置30～60min，离心，弃上清；f.加乙醇溶液清洗，离心，弃上清，吹干；g.加入TE缓冲液溶解DNA，保存。
【技术特征摘要】
1.一种不含胚芽的甜瓜种子全基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：a.取不含胚芽的甜瓜种子，剪碎，研磨，研磨结束后加入CTAB提取缓冲液并进行水浴；b.加入等体积的苯酚-氯仿-异戊醇混合液，混匀，离心；c.吸上清，上清中加入RnaseA孵育；d.加入氯仿-异戊醇溶液，混匀，离心；e.吸上清，上清中加入异丙醇，混匀，于-20～-30℃放置30～60min，离心，弃上清；f.加乙醇溶液清洗，离心，弃上清，吹干；g.加入TE缓冲液溶解DNA，保存。2.根据权利要求1所述的一种不含胚芽的甜瓜种子全基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤a为：取不含胚芽的半粒甜瓜种子，并剪碎于2.0ml离心管中，加入直径为5.0mm的不锈钢球，将离心管放置于组织研磨器中进行研磨，设置研磨时间180～300s，研磨结束后，加入800μL2～5％CTAB提取缓冲液，将离心管于65～70℃水浴30～40min，水浴过程中不断温和翻转离心管，使其充分混匀。3.根据权利要求1所述的一种不含胚芽的甜瓜种子全基因组DNA的提取方法，其特征在于，步骤b中所述离心的参数为10000～12000rpm，离心时间为10～15min；所述苯酚-氯仿-异戊醇混合液中各组份的体积比为25:24:1。4.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨光华，杨小锋，柯用春，王学林，
申请(专利权)人：三亚市南繁科学技术研究院，
类型：发明
国别省市：海南,46
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