本发明专利技术涉及基因工程领域，具体涉及一种热稳定性提高的脂肪酶TTL突变体TTL‑Gly60Glu/Ser61Asn及其基因和应用，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。突变体TTL‑Gly60Glu/Ser61Asn在80℃水浴5min后剩余酶活为25.1％，提高至亲本脂肪酶的1.37倍。
A thermostable lipase TTL mutant TTL-Gly60Glu/Ser61Asn and its gene and Application
The present invention relates to the field of gene engineering, in particular to improve the thermal stability of a lipase TTL mutant TTL Gly60Glu/Ser61Asn gene and application thereof, the amino acid sequence is shown as SEQ ID NO.4. The mutant TTL Gly60Glu/Ser61Asn at 80 DEG C water bath 5min residual activity was 25.1%, 1.37 times increase to parent lipase.
【技术实现步骤摘要】
一种热稳定性提高的脂肪酶TTL突变体TTL-Gly60Glu/Ser61Asn及其基因和应用
本专利技术涉及基因工程领域，具体涉及一种热稳定性提高的脂肪酶TTL突变体TTL-Gly60Glu/Ser61Asn及其基因和应用。
技术介绍
脂肪酶(EC3.1.1.3)全称三酰基甘油酰水解酶，属于α/β折叠酶家族，是一种丝氨酸水解酶。脂肪酶不仅可以在油水界面上催化天然底物油脂水解，释放更少酯键的甘油酯或甘油及脂肪酸，而且在非水相体系中脂肪酶还可催化酸解、转酯和酯合成等反应。工业饲料用脂肪酶主要来源于微生物，微生物分泌的脂肪酶具有较广的作用pH值和作用温度。随着酶催化技术的不断推广，酶制剂的应用条件也越来越严格，如高温、强酸强碱等特殊条件。脂肪酶作为一种重要的酶种被广泛地应用到食品加工、饲料、洗涤、医药等领域。油脂加工和饲料制粒等工艺通常需在较高温度下进行，热稳定性差的脂肪酶在上述工艺中易失活变性，因此开发高热稳定性脂肪酶一直是学术和产业界努力的目标。为了得到更优的酶制剂，一方面可以从自然界筛选合适的酶基因，另一个途经就是将现有产业化的酶蛋白通过分子生物学技术进行改造，以适应不同产业的需求。现今改造酶蛋白的策略主要有两个，其一是非理性设计，通过随机突变改造酶的基因，再根据特定的改造目的，筛选出更符合其作用条件的酶蛋白。此策略优点是无须深入研究酶的结构和作用机理，但需要极大的工作量去完成筛选，效率偏低。有文献报道科学家从突尼斯南部火山地区分离得到一株嗜热裸足菌，其分泌脂肪酶具有较好的耐热性，70℃处理1h后剩余50％酶活。毕赤酵母培养条件简单、易于工业化生产且高效分泌表达外源蛋白，已成功表达多个外源源脂肪酶。本专利技术利用毕赤酵母高效分泌表达嗜热裸足菌来源的脂肪酶，并以嗜热裸足菌脂肪酶基于为模板，通过定点突变技术获得热稳定性显著提高的脂肪酶突变体。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供热稳定性提高的脂肪酶TTL突变体TTL-Gly60Glu/Ser61Asn。本专利技术的再一目的是提供上述突变体的编码基因。本专利技术的再一目的是提供上述热稳定性提高的脂肪酶TTL突变体TTL-Gly60Glu/Ser61Asn的应用。野生脂肪酶的核苷酸序列SEQIDNO.1TCTCCAGTCAGACGTGAGGTTTCTCAGGACTTGTTCGACCAGTTTAATTTGTTCGCTCAGTACTCTGCTGCTGCCTACTGTGCCAAGAATAACGATGCCCCAGCTGGTGCTAACGTTACCTGTAGAGGTTCCATCTGCCCAGAGGTTGAGAAGGCTGACGCCACCTTCTTGTACTCTTTCGAGGACTCTGGAGTTGGTGACGTTACCGGTTTCTTGGCTTTGGACAACACCAACAGATTGATCGTCTTGTCTTTCCGTGGTTCCCGTTCCCTTGAGAATTGGATCGGTAACATTAATTTGGATTTGAAGGGTATCGACGACATCTGCTCTGGTTGCAAGGGACACGATGGTTTCACCTCCTCTTGGAGATCCGTTGCCAACACCTTGACCCAACAGGTTCAGAACGCCGTTAGAGAGCATCCAGACTACCGTGTCGTCTTCACTGGTCACTCTTTGGGTGGTGCTTTGGCTACCGTTGCTGGTGCCTCTTTGAGAGGTAACGGTTACGACATCGACGTTTTCTCCTACGGTGCTCCTCGTGTTGGTAACAGAGCCTTCGCTGTCTTCTTGACCGCTCAGACCGGTGGTACCTTGTACAGAATCACCCATACCAACGATATCGTCCCACGTTTGCCACCAAGAGAGCTTGGATACTCCCACTCTTCCCCAGAGTACTGGATCACCTCCGGTACTTTGGTTCCAGTTACCAAGAACGATATTGTTAAGGTTGAGGGAATTGACTCCACCGACGGTAACAACCAGCCAAATACCCCAGACATTGCTGCCCACTTGTGGTACTTCGGTTTGATTGGTACTTGTTTGTAA野生脂肪酶的氨基酸序列SEQIDNO.2SPVRREVSQDLFDQFNLFAQYSAAAYCAKNNDAPAGANVTCRGSICPEVEKADATFLYSFEDSGVGDVTGFLALDNTNRLIVLSFRGSRSLENWIGNINLDLKGIDDICSGCKGHDGFTSSWRSVANTLTQQVQNAVREHPDYRVVFTGHSLGGALATVAGASLRGNGYDIDVFSYGAPRVGNRAFAEFLTAQTGGTLYRITHTNDIVPRLPPRELGYSHSSPEYWITSGTLVPVTKNDIVKVEGIDSTDGNNQPNTPDIAAHLWYFGLIGTCL脂肪酶TTL突变体TTL-Gly60Glu/Ser61Asn基因的核苷酸序列SEQIDNO.3TCTCCAGTCAGACGTGAGGTTTCTCAGGACTTGTTCGACCAGTTTAATTTGTTCGCTCAGTACTCTGCTGCTGCCTACTGTGCCAAGAATAACGATGCCCCAGCTGGTGCTAACGTTACCTGTAGAGAAAATATCTGCCCAGAGGTTGAGAAGGCTGACGCCACCTTCTTGTACTCTTTCGAGGACTCTGGAGTTGGTGACGTTACCGGTTTCTTGGCTTTGGACAACACCAACAGATTGATCGTCTTGTCTTTCCGTGGTTCCCGTTCCCTTGAGAATTGGATCGGTAACATTAATTTGGATTTGAAGGGTATCGACGACATCTGCTCTGGTTGCAAGGGACACGATGGTTTCACCTCCTCTTGGAGATCCGTTGCCAACACCTTGACCCAACAGGTTCAGAACGCCGTTAGAGAGCATCCAGACTACCGTGTCGTCTTCACTGGTCACTCTTTGGGTGGTGCTTTGGCTACCGTTGCTGGTGCCTCTTTGAGAGGTAACGGTTACGACATCGACGTTTTCTCCTACGGTGCTCCTCGTGTTGGTAACAGAGCCTTCGCTGTCTTCTTGACCGCTCAGACCGGTGGTACCTTGTACAGAATCACCCATACCAACGATATCGTCCCACGTTTGCCACCAAGAGAGCTTGGATACTCCCACTCTTCCCCAGAGTACTGGATCACCTCCGGTACTTTGGTTCCAGTTACCAAGAACGATATTGTTAAGGTTGAGGGAATTGACTCCACCGACGGTAACAACCAGCCAAATACCCCAGACATTGCTGCCCACTTGTGGTACTTCGGTTTGATTGGTACTTGTTTGTAA脂肪酶TTL突变体TTL-Gly60Glu/Ser61Asn的氨基酸序列SEQIDNO.4SPVRREVSQDLFDQFNLFAQYSAAAYCAKNND本文档来自技高网...
【技术保护点】
热稳定性提高的脂肪酶TTL突变体TTL‑Gly60Glu/Ser61Asn，其特征在于，所述脂肪酶TTL突变体TTL‑Gly60Glu/Ser61Asn的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
【技术特征摘要】
1.热稳定性提高的脂肪酶TTL突变体TTL-Gly60Glu/Ser61Asn，其特征在于，所述脂肪酶TTL突变体TTL-Gly60Glu/Ser61Asn的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示。2.热稳定性提高的脂肪酶TTL突变体基因，其特征在于，编码权利要求1所述的热稳定性提高的脂肪酶TTL突变体TTL-G...
【专利技术属性】
技术研发人员：周银华，杨玲，刘丹妮，李天碧，夏雨，李阳源，
申请(专利权)人：广东溢多利生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44
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