聚乙二醇修饰的重组人胰岛素及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种聚乙二醇修饰的重组人胰岛素及其制备方法，其结构式如式(I)所示，m为单甲氧基monomethoxy的缩写，R是去除n个氨基的重组人胰岛素亚基，n是1‑200的整数。本发明专利技术的化合物成分均一、生物活性高、降血糖持续作用时间延长。

【技术实现步骤摘要】
聚乙二醇修饰的重组人胰岛素及其制备方法
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种聚乙二醇修饰重组人胰岛素的方法。技术背景胰岛素是人体内唯一降低血糖的激素，对于糖尿病的治疗特别是抑制并发症至关重要。但目前胰岛素的使用面临注射次数频繁，低血糖风险，患者体重增加等诸多问题。为减少频繁地注射胰岛素给糖尿病患者带来诸多的不便和痛苦，同时降低低血糖事件，特别是夜间低血糖事件，临床需要降糖有效时间更长且药物代谢更平稳的长效胰岛素类似物。
技术实现思路
鉴于上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种聚乙二醇修饰重组人胰岛素的方法，解决了目标产物分离困难的问题。本专利技术的技术方案为：将重组人胰岛素溶液加入装有填料的容器中，搅拌，使蛋白质分子均匀吸附在填料上，过滤得到该填料并加入到含活性聚乙二醇的溶液中，搅拌，使活性聚乙二醇与重组人胰岛素形成共价键，然后将填料装柱、用缓冲液梯度洗脱分离，并收集聚乙二醇修饰的重组人胰岛素组分。上文所述的重组人胰岛素的浓度为10～25毫克/毫升，优选为10～15毫克/毫升；所述的填料为层析柱填料，为疏水柱填料、离子层析柱填料或亲和层析柱填料之一，优选为疏水柱填料；所述的活性聚乙二醇的分子量在5000～50000之间，优选为分子量在5000～30000之间；所述的缓冲液为pH为2.0～8.0的醋酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液和枸橼酸缓冲液之一，优选为醋酸盐缓冲液；所述的重组人胰岛素为重组人胰岛素DesB30。下面通过实施例对本专利技术作进一步的描述，这些描述并不是对本
技术实现思路
作进一步的限定。本领域的技术人员应理解，对本专利技术的技术特征所作的等同替换，或相应的改进，仍属于本专利技术的保护范围之内。具体实施例方式实施例1以100毫摩尔pH为6.0的醋酸钠溶液为缓冲液A；将氯化钠加入到A中使得氯化钠浓度为1摩尔/升，以此为缓冲液B；向A中加入活性聚乙二醇10000(mPEG-NHS)，用于配制活性聚乙二醇溶液。所添加的活性聚乙二醇的摩尔量是重组人胰岛素DesB30摩尔量的4倍。再用缓冲液A平衡柱填料HyperDFS3次，过滤，加入30毫升浓度为5毫克/毫升的重组人胰岛素DesB30，搅拌3小时，过滤，干燥。将干燥的柱填料加入50毫升活性聚乙二醇溶液中，搅拌，反应3小时，将填料装入层析柱中。再用缓冲液A淋洗，以除去未反应的活性聚乙二醇及其他杂质。最后，用0～100％的梯度添加缓冲液B，得到聚乙二醇修饰的重组人胰岛素DesB30。实施例2以200毫摩尔pH为7.0的磷酸盐溶液为缓冲液C；将氯化钠加入到A中使得氯化钠浓度为1摩尔/升，以此为缓冲液D；向A中加入活性聚乙二醇10000(mPEG-NHS)，用于配制活性聚乙二醇溶液。所添加的活性聚乙二醇的摩尔量是干扰素摩尔量的5倍。再用缓冲液C平衡柱填料HyperDFS3次，过滤，加入50毫升浓度为5毫克/毫升的γ-干扰素，搅拌3小时，过滤，干燥。将干燥的柱填料加入50毫升活性聚乙二醇溶液中，搅拌，反应3小时，将填料装入层析柱中。再用缓冲液C淋洗，以除去未反应的活性聚乙二醇及其他杂质。最后，用0～100％的梯度添加缓冲液D，得到聚乙二醇修饰的重组人胰岛素DesB30。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种聚乙二醇修饰重组人胰岛素的方法，将重组人胰岛素溶液加入装有填料的容器中，搅拌，使蛋白质分子均匀吸附在填料上，过滤得到该填料并加入到含活性聚乙二醇的溶液中，搅拌，使活性聚乙二醇与重组人胰岛素形成共价键，然后将填料装柱、用缓冲液梯度洗脱分离，并收集聚乙二醇修饰的重组人胰岛素组分。

【技术特征摘要】
1.一种聚乙二醇修饰重组人胰岛素的方法，将重组人胰岛素溶液加入装有填料的容器中，搅拌，使蛋白质分子均匀吸附在填料上，过滤得到该填料并加入到含活性聚乙二醇的溶液中，搅拌，使活性聚乙二醇与重组人胰岛素形成共价键，然后将填料装柱、用缓冲液梯度洗脱分离，并收集聚乙二醇修饰的重组人胰岛素组分。2.根据权利要求1的方法，所述的重组人胰岛素的浓度为10～25...

【专利技术属性】
技术研发人员：成佳，邓泽平，李书耘，陈芳军，
申请(专利权)人：湖南华腾制药有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43