家蝇酚氧化酶原激活酶1基因及其重组蛋白与应用制造技术
【技术实现步骤摘要】
家蝇酚氧化酶原激活酶1基因及其重组蛋白与应用
本专利技术涉及一种家蝇酚氧化酶原激活酶1（mdPAP1）基因及其表达的重组蛋白与应用，属于基因工程
技术介绍
家蝇同其他昆虫一样，缺乏获得性免疫，对入侵病原的防御完全依靠先天免疫。昆虫的先天免疫包括细胞免疫和体液免疫两部分。酚氧化酶原激活系统(prophenoloxidase-activatedsystem，proPO系统）是昆虫重要的体液免疫成分，该系统的激活是一个丝氨酸蛋白酶级联反应：上游的丝氨酸蛋白酶水解下游酶的酶原，活化的酶再去激活下一个酶的酶原，最终由酚氧化酶原激活酶（proPO-activatingenzyme，PAP）直接把酚氧化酶原（prophenoloxidase，proPO）激活为酚氧化酶（phenoloxidases，PO），从而对病原入侵做出最快速的免疫应答，不仅影响昆虫的黑色素合成，还影响其发育与寿命，并与昆虫抗菌肽的产生有关，在昆虫的病原识别与防御中起重要作用。获得家蝇酚氧化酶原激活酶1（mdPAP1）基因及其重组蛋白，对查明家蝇proPO系统的激活机制及家蝇proPO系统激活在病...
【技术保护点】
一种家蝇酚氧化酶原激活酶1基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
【技术特征摘要】
1.一种家蝇酚氧化酶原激活酶1基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.根据权利要求1所述的家蝇酚氧化酶原激活酶1基因，其特征在于，其编码的重组蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。3.一种权利要求1或2所述的家蝇酚氧化酶原激活酶1基因的克隆方法，其特征在于，（1）总RNA的提取：常规方法提取家蝇总RNA；（2）cDNA第一链合成：利用SmartF、OligoanchorR作为反转录的引物，先配成12μL体系:总RNA5μg10μL，SmartF100μM1μL，OligoanchorR100μM1μL；混合均匀，瞬时离心；70℃水浴5min，冰浴2min，向以上体系中继续加入其他组分：5×First－SrandReactionBuffer4μL，RNaseinhibitor20u/mL1μL，dNTPMix10mM2μL；轻轻混匀，瞬时离心；37℃水浴5min；加200U/mL1μL反转录酶SupermoⅢM-MLV，至终体积20μL；轻轻混匀，瞬时离心，50℃水浴60min；70℃水浴5min，冰浴2min，终止第一链cDNA合成；（3）PCR反应：依据家蝇转录组测序获得的Unigene序列设计特异引物3’端扩增-F与3’anchorR；25μLPCR反应液配制方案：灭菌水18.4μL，10×TaqBuffer2.5μL，dNTPMix2.5mM2.0μL，3’anchorR10μM0.5μL，3’端扩增-F10μM0.5μL，Taq5U/μL0.1μL，cDNA模板1.0μL；混匀以上PCR反应液，置于PCR仪上，PCR反应条件：94℃2min...
【专利技术属性】
技术研发人员：李殿香，栾园园，王蕾，吕桐锐，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：山东,37
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。