【技术实现步骤摘要】
本专利技术是关于苹果多酚氧化酶的提取和测定方法,属于天然药物领域。
技术介绍
酶促褐变是果蔬加工过程中普遍存在的一种现象。酶促反应的发生不仅影响产品 的外观品质,同时营养成分及风味也会发生很大的变化,使产品质量下降,影响到产品的销 售和企业经济效益。尤其是发生在肉质颜色较浅的水果、蔬菜上的酶促褐变更为显著。在 热带鲜果中,酶促褐变导致的直接经济损失达50%。 酶促褐变反应非常迅速,甚至在极短的时间内便可发生。酶促褐变产生的原因主 要是当果蔬受到机械损伤或处于不良环境,如受冻、受热时,尤其是在加工过程中,果蔬内 的多酚类物质在多酚氧化酶的催化作用下氧化而呈现褐色。这些多酚类物质包括邻苯二酚 (儿茶酚)、绿原酸、咖啡酸、没食子酸等,它们在完整的细胞中作为呼吸传递物质,在酚_醌 之间保持着动态平衡。当新鲜的果蔬组织被损伤,氧大量侵入,酶原被激活,邻苯二酚类 物质经酶的催化作用氧化为邻苯醌类化合物,该化合物进一步聚合形成复杂聚合物黑素 (melanin)。 酶促褐变反应的发生必须具备三个条件多酚类物质、多酚氧化酶和氧。决定酶 促褐变率的最重要的因素即为组织中活性多酚氧化酶和酚类化合物的浓度、可利用的氧含 量、pH值和温度等。 多酚氧化酶(Polyphenol Oxidase,简称PP0)的系统命名是邻二酚氧-氧化还原 酶,广泛分布于自然界。多酚氧化酶是一种含铜的酶,必需以氧为受氢体,是一种末端氧化 酶。人们普遍认为多酚氧化酶是两种酶的复合体(1)酚羟化酶,又叫甲酚酶(cresolase)。 催化一元酚羟基化反应,生成相应的邻一二羟基化合物。(2)多元酚氧化酶,又 ...
【技术保护点】
苹果多酚氧化酶的提取及测定方法,其特征在于包括以下步骤: (1)多酚氧化酶(简称PPO)的提取 苹果洗净后在低温下保温,再去皮去核后取其果肉,立即加入冷丙酮,用高速组织捣碎机匀浆2min,而后用布氏漏斗抽滤滤饼用前一次1/2量的冷冻丙酮再次提取抽滤,得到的白色物质冷冻真空干燥,即得PPO丙酮粉。 称取丙酮粉,溶于的预冷磷酸盐缓冲溶液中,用磁力搅拌器搅拌离心,上清液过滤,即得苹果PPO粗酶液。 (2)多酚氧化酶测定方法 在1ml磷酸氢二钾-柠檬酸缓冲液中,用1ml0.1mol/L邻苯二酚为底物,加1ml酶提取液,反应3min后,在分光光度仪扫描并观察吸收峰情况。测定时以水为空白,以热失活的粗酶液代替粗酶液在同样条件下测定为对照。 (3)PPO活性的测定 取磷酸盐缓冲溶液1ml于1cm比色皿中,加人0.1mol/L邻苯二酚溶液1ml。混匀后在400mm处比色,从酶液加入后开始记时,每15s记录一次OD随时间的变化值,以最初直线段的斜率(ΔOD/t)表求酶活力,一个酶活力单位(U)定义为:在测定条件下,每分钟引起吸光度改变0.001所需的酶量。
【技术特征摘要】
苹果多酚氧化酶的提取及测定方法,其特征在于包括以下步骤(1)多酚氧化酶(简称PPO)的提取苹果洗净后在低温下保温,再去皮去核后取其果肉,立即加入冷丙酮,用高速组织捣碎机匀浆2min,而后用布氏漏斗抽滤滤饼用前一次1/2量的冷冻丙酮再次提取抽滤,得到的白色物质冷冻真空干燥,即得PPO丙酮粉。称取丙酮粉,溶于的预冷磷酸盐缓冲溶液中,用磁力搅拌器搅拌离心,上清液过滤,即得苹果PPO粗酶液。(2)多酚氧化酶测定方法在1ml磷酸氢二钾-柠檬酸缓冲液中,用1ml0.1mol/L邻苯二酚为底物,加1ml酶提取液,反应3min后,在分光光度仪扫描并观察吸收峰情况。测定时以水为空白,以热失活的粗酶液代替粗酶液在同样条件下测定为对照。(3)PPO活性的测定取磷酸盐缓冲溶液1ml于1cm比色皿中,加人0.1mol/L邻苯二酚溶液1ml。混匀后在400mm处比色,从酶液加入后开始记时,每15s记录一次OD随时间的变化值...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈群,吴菁,
申请(专利权)人:湖州来色生物基因工程有限公司,吴菁,
类型:发明
国别省市:33[中国|浙江]
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