用于制备反式-4-羟基-L-脯氨酸的DNA分子和方法技术

本发明专利技术公开了用于制备反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸的DNA分子和方法。本发明专利技术公开的DNA分子，为将L‑脯氨酸‑4‑羟化酶编码基因(P4H基因)的密码子进行优化后的序列P4Hm进行二次优化而得到的DNA分子(P4HGP基因)，其序列为序列表中序列1；用于制备反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸的方法，包括：将含有P4HGP基因并表达P4H的重组微生物置入含有L‑脯氨酸的初始物质的体系中进行反应，得到反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸。实验证明，与P4Hm基因相比，利用P4HGP基因得到的反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸产量提高了19.7％，表明可以利用P4HGP基因生产反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸。

DNA molecules and methods for the preparation of trans -4- hydroxy -L- proline

The invention discloses a preparation method for DNA molecules and trans L 4 hydroxy proline. The invention discloses a DNA molecule, as L 4 gene encoding proline hydroxylase (P4H gene) sequences of P4Hm codon optimized for the two time optimal and get DNA molecular (P4HGP gene), the sequence of sequence 1 in the sequence table; a method for preparation of trans 4 hydroxy proline L includes: containing P4HGP gene and expression of recombinant microorganism reaction material initial insertion of P4H containing L proline in the system, get the trans 4 L hydroxy proline. Experiments show that compared with the P4Hm gene, using P4HGP gene trans L 4 hydroxy proline production increased by 19.7%, showed that the P4HGP gene can be utilized to produce trans 4 L hydroxy proline.

【技术实现步骤摘要】
用于制备反式-4-羟基-L-脯氨酸的DNA分子和方法
本专利技术涉及生物
中用于制备反式-4-羟基-L-脯氨酸的DNA分子和方法。
技术介绍
反式-4-羟基-L-脯氨酸(trans-4-Hydroxy-L-proline，Hyp)是广泛存在于动物胶和骨胶原中的亚氨基酸，分子式如式1。反式-4-羟基-L-脯氨酸可以作为胶原蛋白合成的增强剂而用于化妆品和医药产品。也可以作为许多组织(如皮肤、骨骼和消化道)的补充营养物而用于食品行业。此外，反式-4-羟基-L-脯氨酸带有手性分子，是合成药物时有用的手性元件。其有用的衍生品包括MK-1220(被认为是一个高活性的丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂)；聚胺-4-L-THOP(被用作非降解性丙烯酸骨结合剂)；N-乙酰THOP(奥沙西罗)，可以抑制炎症和减少肿胀，是有用的治疗骨关节炎等影响结缔组织疾病，奥沙西罗已经被确立为一种无毒副作用的治疗关节疾病的药物。目前，国内生产反式-4-羟基-L-脯氨酸的主要方法是生物提取法，利用动物蛋白来源如明胶、猪皮为原料，经酸、碱水解后提取反式-4-羟基-L-脯氨酸，该方法纯化步骤长，成本高，且废弃物污染严重。随着脯氨本文档来自技高网...

【技术保护点】
DNA分子，其特征在于：所述DNA分子为将L‑脯氨酸‑4‑羟化酶编码基因的密码子进行优化得到的DNA分子。

【技术特征摘要】
1.DNA分子，其特征在于：所述DNA分子为将L-脯氨酸-4-羟化酶编码基因的密码子进行优化得到的DNA分子。2.根据权利要求1或2所述的DNA分子，其特征在于：所述DNA分子的序列为序列表中序列1。3.含有权利要求1或2所述DNA分子的生物材料，为下述B1)至B9)中的任一种：B1)含有权利要求1或2所述DNA分子的表达盒；B2)含有权利要求1或2所述DNA分子的重组载体；B3)含有B1)所述表达盒的重组载体；B4)含有权利要求1或2所述DNA分子的重组微生物；B5)含有B1)所述表达盒的重组微生物；B6)含有B2)所述重组载体的重组微生物；B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；B8)含有权利要求1或2所述DNA分子的重组细胞系；B9)含有B1)所述表达盒的重组细胞系。4.根据权利要求3所述的生物材料，其特征在于：所述重组载体为向pYB1s载体的多克隆位点插入权利要求1或2所述DNA分子得到的重组载体；所述pYB1s载体为将载体pACYCDuet-1的含有复制子和链霉素抗性基因的DNA片段与pBAD/HisB载体的含有pBAD启动子、酶切位点和终止子的DNA片段进行拼接得到的载体；所述重组微生物为将含有权利要求1或2所述DNA分子的重组载体导入大肠杆菌得到的重组微生物。5.反式-4-羟基-L-脯氨酸的制备方法，包括：将权利要求3或4中任一所述重组微生物置入含有制备反式-4...

【专利技术属性】
技术研发人员：林白雪，刘伟丰，傅震洲，陶勇，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11