The invention relates to a method for preparing an activator of growth hormone receptor, which is characterized by comprising the following steps: preparation containing 10% volume fraction of inactivated fetal bovine serum, penicillin streptomycin 100IU/mI. 100IU/mL RP - MI 1640 CHO ~ GHR638 cell culture medium, culture conditions of 37 DEG C and 5% volume fraction of the carbon dioxide; the invention of growth hormone receptor of the preparation method of the activator, the activation of the intracellular signaling pathway protein JAK2, STAT5, ERKl / 2, showed a growth hormone like activity, the further exploration provides a new direction of growth hormone analogs.
【技术实现步骤摘要】
一种生长激素受体激活剂的制备方法
本专利技术涉及一种生长激素受体激活剂的制备方法。
技术介绍
生长激素(Growthhormone，GH)是由垂体分泌的多肽，经循环系统运送至靶器官上发挥相应的生物效应，由191个氨基酸组成.研究表明，GH对动物的生长发育有着极其重要的作用，同时在免疫、生殖、代谢等方面亦有许多重要生理功能，是动物机体最重要的内分泌激素之一。GH生理作用的发挥主要通过生长激素受体(Growthhormonereceptor，GHR)介导。GHR属于典型的I类生长因子受体，由620个氨基酸组成，包括胞外域、跨膜域和胞内域。GH与相应靶细胞的GHR相结合发挥其生理作用，产生相应的生长因子和免疫调节因子，如胰岛素样生长因子(in-sulin-likegrowthfactors-1，IGFl)、白介素-6(inter-leukin-6，IL6)、白介素-2(interleukin-2，IL2)等，胞内信号转导路径主要包括janus激酶(januskianse，JAK)-信号传导及转录激活因子(Signaltransduc-ersandactivatorsof...
【技术保护点】
一种生长激素受体激活剂的制备方法，其特征在于包括以下制备步骤：（1）用含体积分数10％灭活胎牛血清、青霉素100IU/mI.链霉素100IU/mL的RP—MI一1640培养基培养CHO～GHR638细胞，培养条件37℃、体积分数5％二氧化碳；（2）选取6周龄雌性鼠6只，首免以100毫克GHBP与等体积弗氏完全佐剂乳化后免疫BALB/c鼠，免疫剂量为50毫克/只，并以14d为问隔进行加强免疫，剂量与首免相同，不同的是与弗氏不完全佐剂乳化，每次加强免疫后3d采尾静脉血测效价，直至效价达到1：20000以上时，取鼠脾脏细胞与SP2/O融合；（3）将融合后的细胞分散于96孔细胞培养...
【技术特征摘要】
1.一种生长激素受体激活剂的制备方法，其特征在于包括以下制备步骤：（1）用含体积分数10％灭活胎牛血清、青霉素100IU/mI.链霉素100IU/mL的RP—MI一1640培养基培养CHO～GHR638细胞，培养条件37℃、体积分数5％二氧化碳；（2）选取6周龄雌性鼠6只，首免以100毫克GHBP与等体积弗氏完全佐剂乳化后免疫BALB/c鼠，免疫剂量为50毫克/只，并以14d为问隔进行加强免疫，剂量与首免相同，不同的是与弗氏不完全佐剂乳化，每次加强免疫后3d采尾静脉血测效价，直至效价达到1：20000以上时，取鼠脾脏细胞与SP2/O融合；（3）将融合后的细胞分散于96孔细胞培养板中，经含有HAT的培养基筛选培养10d后，利用间接ELISA筛选阳性克隆，将阳性克隆转移到20孔培养板，扩大培养；（4）取ELISA检测阳性孔上清液500肚L与CHO—GHR638(细胞密度为1x104mI.-1)4℃...
【专利技术属性】
技术研发人员：张俊，
申请(专利权)人：陕西易阳科技有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61
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