本发明专利技术提供以高亲和性特异性结合于靶抗原(例如人类抗原，例如人类PDGFRβ)的结合多肽(例如抗体或其片段)。本发明专利技术亦提供结合多肽的文库、药物组合物，以及编码结合多肽的核酸、重组表达载体及用于制造这样的结合多肽的宿主细胞。本发明专利技术亦涵盖使用本发明专利技术的结合多肽以诊断及治疗疾病的方法。
【技术实现步骤摘要】
PDGF受体β结合多肽本申请主张2011年12月5日申请的美国临时申请61/566,778以及2012年3月14日申请的美国临时申请61/610,905的优先权，所述临时申请均以全文引用的方式并入本文中。
本专利技术涉及PDGF受体β结合多肽。
技术介绍
血小板源性生长因子(PDGF)是间叶活动来源的细胞中的强力分裂原及化学引诱物且涉及许多疾病的病理学。PDGF以二硫化物连接的二聚物存在，所述二聚物是由两条可组合形成三种独特PDGF同种型AA、BB或AB的同源链A或B组成。PDGF的所有同种型均通过结合至细胞表面PDGF受体(PDGFR)来介导其促有丝分裂效果。PDGF受体属于酪氨酸激酶家族且由两种受体同种型α及β组成。α及β同种型可通过其独特配体结合特异性加以区分。PDGFβ受体可仅结合至B链(同种型BB及AB)，而PDGFα受体可结合至PDGF的所有同种型。PDGF与细胞表面PDGFR的结合引起受体二聚化及反式自体磷酸化，进而又引起细胞内信号传导事件，所述事件尤其引起细胞增殖及细胞迁移。因此，阻断PDGF结合和/或受体二聚化的PDGFR拮抗剂可用以治疗或预防与PDGFR活化相关的疾病。因此，在本领域中需要可用以治疗与PDGFR活化相关的疾病的新颖PDGFR拮抗剂。
技术实现思路
本专利技术提供以高亲和性特异性结合于靶抗原(例如人类抗原，例如人类PDGF)的结合多肽(例如抗体或其片段)。在一优选实施方案中，本专利技术提供以高亲和性结合于PDGFRβ(例如人类PDGFRβ)且拮抗PDGFRβ活化的结合多肽。这样的结合多肽尤其适用于治疗PDGFRβ相关疾病或病症(例如年龄相关的黄斑变性(AMD))。本专利技术亦提供结合多肽的文库、药物组合物，以及编码结合多肽的核酸、重组表达载体及用于制造这样的结合多肽的宿主细胞。本专利技术亦涵盖使用本专利技术的结合多肽来检测PDGFRβ及调节PDGFRβ活性的方法。因此，在一方面，本专利技术提供经分离结合多肽，其包含VH域，其中作为分离域，VH域以小于100pM的Kd结合于抗原。在另一方面，本专利技术提供特异性结合于PDGFRβ的经分离结合多肽，其包含如SEQIDNO:1中所示的CDR3序列。在某些实施方案中，结合多肽包含VH域，所述VH域包含SEQIDNO:1所示的HCDR3氨基酸序列。VH域可进一步包括包含选自SEQIDNO:2-32的氨基酸序列的HCDR2和/或包含选自SEQIDNO:33-62的氨基酸序列的HCDR1。在某些实施方案中，多肽包含VH域，所述VH域包含与选自SEQIDNO:318-368的VH域氨基酸序列享有至少80％(例如80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)氨基酸同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，多肽包含VH域，所述VH域包含选自SEQIDNO:318-368的氨基酸序列。在某些实施方案中，结合多肽包含VL域。VH域可进一步包括包含选自SEQIDNO:63-147的氨基酸序列的LCDR3、包含选自SEQIDNO:148-232的氨基酸序列的LCDR2和/或包含选自SEQIDNO:233-317的氨基酸序列的LCDR1。在某些实施方案中，多肽包含VL域，所述VL域包含与选自SEQIDNO:369-453的VL域氨基酸序列享有至少80％(例如80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)氨基酸同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，多肽包含VL域，所述VL域包含选自SEQIDNO:369-453的氨基酸序列。在其它方面，本专利技术提供结合多肽，其与包含SEQIDNo:318所示的VH域氨基酸序列的结合多肽结合于PDGFRβ上的相同表位。在一优选实施方案中，结合多肽包含与选自SEQIDNO:318-368的VH域氨基酸序列享有至少80％氨基酸同一性(例如80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)的VH域氨基酸序列。在另一方面，本专利技术提供结合多肽，其与包含如SEQIDNo:318所示的VH域氨基酸序列的结合多肽竞争结合于PDGFRβ。在一优选实施方案中，结合多肽包含与选自SEQIDNO:318-368的VH域氨基酸序列享有至少80％氨基酸同一性的VH域氨基酸序列。在某些实施方案中，本专利技术的结合多肽抑制PDGFRβ活性。在一实施方案中，PDGFRβ活性通过拮抗PDGF与PDGFRβ的结合来抑制。在另一实施方案中，PDGFRβ活性通过拮抗PDGFRβ二聚化来抑制。在某些实施方案中，本专利技术的结合多肽以小于100pM的Kd和/或以小于10-3s-1的解离速率结合于PDGFRβ。在某些实施方案中，本专利技术的结合多肽特异性结合于小鼠及人类PDGFRβ。在某些实施方案中，本专利技术的结合多肽以小于5nM的IC50拮抗PDGF与PDGFRβ的结合、以小于4nM的IC50抑制PDGFRβ的配体诱导性酪氨酸磷酸化、以小于6nM的IC50抑制视网膜周细胞迁移，和/或具有至少68℃的熔融温度(Tm)。在另一方面，本专利技术提供编码本专利技术的结合多肽的经分离核酸。在另一方面，本专利技术提供包含编码本专利技术的结合多肽的经分离核酸的重组表达载体。在另一方面，本专利技术提供表达本专利技术的结合多肽的宿主细胞。在另一方面，本专利技术提供制造特异性结合于人类PDGFRβ的结合多肽的方法，其包括将能够表达本专利技术的结合多肽的宿主细胞在使得所述宿主细胞产生结合多肽的条件下进行培养。在另一方面，本专利技术提供药物组合物，其包含本专利技术的结合多肽及一种或更多种药学上可接受的载体(carrier)。在另一方面，本专利技术提供用于治疗疾病或病症PDGFRβ相关疾病或病症(例如年龄相关的黄斑变性(AMD)或癌症)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用本专利技术的药物组合物。在另一方面，本专利技术提供不成对VH域的多样文库，其中文库各成员结合于人类PDGFRβ。在一优选实施方案中，文库各成员包含SEQIDNO:1所示的CDR3氨基酸序列及在于FR1-FR3区域的多样性。在一优选实施方案中，文库为核酸展示文库(例如DNA展示文库)。在另一方面，本专利技术提供稳定VH/VL对的多样文库，其中文库各成员结合于人类PDGFRβ。在一优选实施方案中，文库各成员包含VH域，所述VH域包含SEQIDNO:1所示的CDR3氨基酸序列。在一优选实施方案中，VL域为人类VL域。在一优选实施方案中，文库为核酸展示文库(例如DNA展示文库)。附图说明图1为用于所公开方法的示范性VH域核酸展示文库构建的示意图。图2描绘量测XB1511VH域、未经选择的XB1511CDR3/构架改组DNA展示文库(R0)及XB1511CDR3/构架改组DNA展示文库池在四轮选择(R4)后与人类或小鼠PDGFRβ的结合的体外结合分析结果。图3描绘量测XB1511及构架改组衍生物XB2202及XB2708与人类PDGFRβ的结合动力学的表面等离子体共振结合研究的结果。图4描绘量本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种特异性结合于PDGFRβ的经分离结合多肽，其包含SEQ ID NO:1所示的CDR3序列。
【技术特征摘要】
2011.12.05 US 61/566,778;2012.03.14 US 61/610,9051.一种特异性结合于PDGFRβ的经分离结合多肽，其包含SEQIDNO:1所示的CDR3序列。2.根据权利要求1所述的结合多肽，其包含VH域，所述VH域包含SEQIDNO:1所示的CDR3氨基酸序列。3.根据权利要求2所述的结合多肽，其中所述VH域进一步包含CDR2，所述CDR2包含选自SEQIDNO:2-32的氨基酸序列。4.根据权利要求3所述的结合多肽，其中所述VH域进一步包含CDR1，所述CDR1包含选自SEQIDNO:33-62的氨基酸序列。5.根据权利要求4所述的结合多肽，其包含与选自SEQIDNO:318-368的VH域氨基酸序列享有至少80％氨基酸序列同一性的VH域氨基酸序列。6.根据权利要求4所述的结合多肽，其中所述VH域包含选自SEQIDNO:318-368的氨基酸序列。7.根据前述权利要求中任一项所述的结合多肽，其包含VL域，所述VL域包含CDR3，所述CDR3包含选自SEQIDNO:63-147的氨基酸序列。8.根据权利要求6所述的结合多肽，其中所述VL域进一步包含CDR2，所述CDR2包含选自SEQIDNO:148-232的氨基酸序列。9.根据权利要求6所述的结合多肽，其中所述VL域进一步包含CDR1，所述CDR1包含选自SEQIDNO:233-317的氨基酸序列。10.根据权利要求7所述的结合多肽，其包含与选自SEQIDNO:369-453的VL域氨基酸序列享有至少80％氨基酸序列同一性的VL域氨基酸序列。11.根据权利要求7所述的结合多肽，其中所述VL域包含选自SEQIDNO:369-453的氨基酸序列。12.一种结合多肽，其与包含SEQIDNo.318所示的VH域氨基酸序列的结合多肽结合于PDGFRβ上的相同表位。13.一种结合多肽，其与包含SEQIDNo.318所示的VH域氨基酸序列的结合多肽竞争结合于PDGFRβ。14.根据权利要求12或13所述的结合多肽，其包含VH域氨基酸序列，所述VH域氨基酸序列与选自SEQIDNO:318-368的VH域氨基酸序列享有至少80％氨基酸序列同一性。15.根据前述权利要求中任一项所述的结合多肽，其抑制PDGFRβ的活性。16.根据权利要求15所述的结合多肽，其中PDGFRβ的活性通过拮抗PDGF与PDGFRβ的结合来抑制。17.根据权利要求15所述的结合多肽，其中PDGFRβ的活性通过拮抗PDGFRβ二聚化...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈岩，R·W·瓦格纳，C·帕兹马尼，
申请(专利权)人：X博迪生物科学公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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