一种微生物发酵组合物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种微生物发酵组合物，所述的组合物选用药食两用真菌姬松茸、香菇、金针菇和大补元气的人参，经提取、酶解后，添加微量元素硒、锌、钼，利用益生菌发酵、转化制得。本发明专利技术发酵组合物经过体外抑制HepGII细胞（肝癌细胞）、Hela细胞（宫颈癌细胞）实验表明，经过益生菌发酵发酵组合物对肿瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用。发酵组合物与未发酵组合物相比，对实验用肿瘤细胞抑制效果明显增强，差异显著。且发酵组合物对试验用肿瘤细胞的抑制效果，随作用浓度增加而增强。

Microbial fermentation composition and its application

The invention discloses a microbial fermentation composition, the composition of the edible fungus, mushroom and letinous edodes, nourishing Qi ginseng, after extraction, enzymolysis, adding trace elements such as selenium, zinc, molybdenum, by probiotic fermentation and conversion system. The fermentation composition of the present invention inhibits HepGII cells (hepatoma cells) and Hela cells (cervical cancer cells) in vitro, and the results show that the composition of probiotics fermentation fermentation has obvious inhibitory effect on the proliferation of tumor cells. The inhibitory effect of the fermentation composition on the tumor cells in the experimental group was significantly higher than that in the non fermented group, with significant difference. The inhibitory effect of the fermentation composition on the tumor cells was enhanced with the increase of the concentration.

【技术实现步骤摘要】
一种微生物发酵组合物及其应用
本专利技术涉及微生物发酵组合物及其应用，尤其涉及一种抗癌的经酶解及微生物发酵、转化的组合物及其应用。
技术介绍
现代人由于生活、工作压力紧张，运动量减少，导致身体处于亚健康状态，身体免疫力低下，经常疲劳、感冒、胃肠功能失调，由于机体长期处于免疫力低下状态，癌症的发病几率就会增加。人参(PanaxginsengC．A．Meyer)为五加科多年生草本植物人参的根，素有“百草之王”的美称，是我国传统名贵中药。在中国、朝鲜、日本乃至亚洲国家被广泛用于滋补保健和医疗。现代药理学研究表明人参具有免疫调节、抗癌、抗脑缺血、治疗糖尿病、预防动脉粥样硬化和抗炎等药理学活性。药用真菌是指能治疗疾病、具有药用价值的一类真菌，即其菌丝体、子实体、菌核或孢子中能产生氨基酸、蛋白质、维生素、多糖、苷类、生物碱等多种物质，对人体有保健作用或对疾病有预防、抑制或治疗作用的真菌。其中一些种类不仅具有对人体有保健作用，还可以食用，为药食两用真菌。我国药食两用真菌资源丰富，据不完全统计，全球范围内已经记载的此类真菌大约大约2500种，中国已报道的近1000种。药食两用真菌抗肿瘤活性的研究主要集中在对多糖的研究。多糖和蛋白质、核酸、脂类构成生命四大物质，以前人们对多糖活性认识不足，认为多糖只是营养物质。60年代后，人们发现多糖具有多种作用：它能控制细胞分裂、调节细胞生长和衰老、可作为免疫促进剂，对肿瘤、心血管疾病和肝炎具有治疗作用，从而引起人们的重视。多糖的抗肿瘤活性主要为含有β-(1-3)或β-(1-4)主链，侧链为β-(1-6)的葡聚糖。研究表明，药食两用真菌多糖抗肿瘤作用是通过宿主中介作用，它能激活T淋巴细胞，提高机体细胞免疫功能。例如，云芝多糖能激活B细胞，香菇多糖能恢复免疫功能下降的T淋巴细胞，裂褶多糖是利用宿主网状内皮细胞，提高宿主非特异防御功能。这些多糖对免疫功能异常的机体起作用。体外试验表明，多糖对细胞本身无直接细胞毒作用。
技术实现思路
为了解决机体免疫力低下、集体机能下降的问题，本专利技术提供了一种具有提高免疫力、抗癌作用的微生物发酵组合物。本专利技术所述的微生物发酵组合物选用药食两用真菌姬松茸、香菇、金针菇和大补元气的人参，经提取、酶解后，添加微量元素硒、锌、钼，利用益生菌发酵、转化制得；所述药食两用真菌的重量g/体积mL百分比为：姬松茸1—3%、香菇2-4%、金针菇1-4%；所述人参的重量g/体积mL百分比为：1-3%；所述微量元素含量为：亚硒酸钠30-200µg/100mL、硫酸锌•7H2O20-85mg/100mL、钼酸钠•2H2O50-150µg/100mL；所述的益生菌为双歧杆菌和乳杆菌；所述的微生物发酵组合物的制备方法如下：A.发酵底物的提取：将干燥的人参、姬松茸、香菇、金针菇粉碎，过65~80目筛，加入物料重量的30倍饮用水浸泡1小时，加热煮沸1.5小时，温度降至90℃时，调整pH值在5.5-7.0之间，加入高温淀粉酶，加入量为20酶活力单位×物料重量/酶活力，维持温度在80-90℃之间，并搅拌均匀，料液与碘液不再变蓝时结束淀粉酶酶解，将料液温度降至50℃，调整料液pH值为5.0-6.0，加入果胶裂解酶，加入量体积比为料液体积的0.1%，维持温度45-50℃，酶解2小时，结束酶解，煮沸10分钟，灭酶、滤过，取上清液，减压浓缩至姬松茸、香菇、金针菇和人参达到所述浓度，得到发酵底物提取液；B.配料、灭菌：将发酵底物提取液中加入亚硒酸钠、硫酸锌、钼酸钠，加入0.5%葡萄糖，磷酸二氢钾100mg/100mL、磷酸氢二钾•3H2O100mg/100mL，调整料液pH，高压蒸汽灭菌后，即得到继后用于微生物发酵的发酵底物；C.接种、发酵：将预培养好的双歧杆菌属其中的两株培养液无菌操作接入到步骤B得到的无菌的发酵底物中，38±1℃、兼性厌氧培养2~6小时后，再次接种预培养的至少一种乳杆菌菌液，继续发酵；当发酵液pH值降至4.1时，将温度降至25℃，并再维持24小时，结束发酵；D.灭活：将发酵完成的发酵液70℃灭活，或者115℃灭活，得到所述的微生物发酵组合物。本专利技术中，优选的，所述药食两用真菌的重量g/体积mL百分比为：姬松茸2%、香菇2%、金针菇1%；所述人参的重量g/体积mL百分比为：2%。本专利技术中，优选的，所述微量元素及其含量为：亚硒酸钠70µg/100mL、硫酸锌•7H2O50mg/100mL、钼酸钠•2H2O70µg/100mL。优选的，制备方法步骤A中，酶解过程中的工艺参数为：将pH值调整为6.0，加入高温淀粉酶，维持温度在85℃，并搅拌均匀；将料液pH值调整为6.0，加入果胶裂解酶，维持温度45℃，酶解2小时，结束酶解。优选的，制备方法步骤B中，所述的调整料液pH值为7.0±0.1，所述高压蒸汽灭菌的温度为121℃、时间为30分钟。优选的，制备方法步骤C中所述的双歧杆菌属是指两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌、婴儿双歧杆，每株菌接种量体积比均为0.6%，培养时间为6小时；所述的乳杆菌为嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏杆菌或植物乳杆菌，每株菌接种量体积比为0.5%，发酵温度为38±1℃。优选的，制备方法步骤D中所述的灭活温度为115℃,时间为10分钟。优选的，制备方法步骤B中所述的发酵底物提取液中还加有重量mg/体积mL比为3.0%的蔗糖、30mg/100mL的三氯蔗糖以及5.0mg/100mL的硫酸亚铁•7H2O。优选的，制备方法步骤C中在发酵结束后，还在无菌条件下，加入事先115℃、40分钟灭菌的低聚木糖浆，加入量为重量mg/体积mL比1.5%。本专利技术的另一个目的是提供所述的微生物发酵组合物在制备提高机体免疫力、预防和治疗肿瘤的药物或者保健品中的应用。人参的主要活性成分为人参皂苷，现已分离并确定结构的单体皂苷成分有50余种。人参皂苷是由苷元和糖相连而成的糖苷类化合物，属于三萜类皂苷。人参皂苷按照苷元的结构不同分为3类：二醇型人参皂苷(PPD)、三醇型人参皂苷(PPT)和齐墩果酸型人参皂苷。PPD和PPT型人参皂苷都属于达玛烷型四环三萜类化合物，在人参皂苷中占大多数，目前认为其是人参的主要活性成分之一。PPD型皂苷如人参皂苷Rbl、Rd、Rh2等，及PPT型皂苷如人参皂苷Re、Rgl、Rg2等，其中人参皂苷Rb1、Rd、Re等含量较高，而人参皂苷Rg3、CompoundK、Rh2等含量极少，在人工栽培的人参中基本不存在，为稀有人参皂苷。口服人参皂苷或人参提取物后，人参皂苷在酸性胃液环境下水解生成脱糖基代谢产物，在肠道中，亦可由肠道菌群所表达的糖苷水解酶(如β-葡萄糖苷酶，a-鼠李糖苷酶，木糖苷酶等)脱糖基，生成次级代谢产物或苷元，通过跨膜转运等方式吸收进入体循环，进而发挥药效。各种人参皂苷间的差别主要在于苷元，糖基的数目、种类以及糖苷键的位置间的差异。中药皂苷类成分的胃肠道代谢处置，已经被证实是影响其吸收进而发挥药效的重要节点；而肠道菌群所表达的糖苷水解酶系统则是该节点中介导皂苷类成分肠道代谢的关键因素。金针菇形美、味鲜，因其具有多种药效作用而被广泛用于药膳，是世界上著名的食药两用菌和观赏菌。研究发现在金针菇中存在着丰富的抗肿瘤活性成份，包括多糖、火菇素、构菌素、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种微生物发酵组合物，其特征在于，将药食两用真菌姬松茸、香菇、金针菇和人参经提取、酶解后，添加微量元素硒、锌、钼，利用益生菌发酵、转化制得；所述的药食两用真菌的重量g/体积ml百分比为：姬松茸1—3%、香菇2‑4%、金针菇1‑4%；所述人参的重量g/体积ml百分比为：1‑3%；所述微量元素含量为：亚硒酸钠30‑200µg/100mL、硫酸锌•7H2O 20‑85mg/100mL、钼酸钠•2H2O 50‑150µg/100mL；所述的益生菌为双歧杆菌和乳杆菌；所述的微生物发酵组合物的制备方法如下：A.发酵底物的提取：将干燥的人参、姬松茸、香菇、金针菇粉碎，过65~80目筛，加入物料重量的30倍饮用水浸泡1小时，加热煮沸1.5小时，温度降至90℃时，调整pH值在5.5‑7.0之间，加入高温淀粉酶，加入量为20酶活力单位×物料重量/酶活力，维持温度在80‑90℃之间，并搅拌均匀，料液与碘液不再变蓝时结束淀粉酶酶解，将料液温度降至50℃，调整料液pH值为5.0‑6.0，加入果胶裂解酶，加入量体积比为料液体积的0.1%，维持温度45‑50℃，酶解2小时，结束酶解，煮沸10分钟，灭酶、滤过，取上清液，减压浓缩至姬松茸、香菇、金针菇和人参达到所述浓度，得到发酵底物提取液；B.配料、灭菌：将发酵底物提取液中加入亚硒酸钠、硫酸锌、钼酸钠，加入0.5%葡萄糖，磷酸二氢钾100mg/100mL、磷酸氢二钾•3H2O 100mg/100mL，调整料液pH，高压蒸汽灭菌后，即得到继后用于微生物发酵的发酵底物；C.接种、发酵：将预培养好的双歧杆菌属其中的两株培养液无菌操作接入到步骤B得到的无菌的发酵底物中，38±1℃、兼性厌氧培养2~6小时后，再次接种预培养的至少一种乳杆菌菌液，继续发酵；当发酵液pH值降至4.1时，将温度降至25℃，并再维持24小时，结束发酵；D.灭活：将发酵完成的发酵液70℃灭活，或者115℃灭活，得到所述的微生物发酵组合物。...

【技术特征摘要】
1.一种微生物发酵组合物，其特征在于，将药食两用真菌姬松茸、香菇、金针菇和人参经提取、酶解后，添加微量元素硒、锌、钼，利用益生菌发酵、转化制得；所述的药食两用真菌的重量g/体积ml百分比为：姬松茸1—3%、香菇2-4%、金针菇1-4%；所述人参的重量g/体积ml百分比为：1-3%；所述微量元素含量为：亚硒酸钠30-200µg/100mL、硫酸锌•7H2O20-85mg/100mL、钼酸钠•2H2O50-150µg/100mL；所述的益生菌为双歧杆菌和乳杆菌；所述的微生物发酵组合物的制备方法如下：A.发酵底物的提取：将干燥的人参、姬松茸、香菇、金针菇粉碎，过65~80目筛，加入物料重量的30倍饮用水浸泡1小时，加热煮沸1.5小时，温度降至90℃时，调整pH值在5.5-7.0之间，加入高温淀粉酶，加入量为20酶活力单位×物料重量/酶活力，维持温度在80-90℃之间，并搅拌均匀，料液与碘液不再变蓝时结束淀粉酶酶解，将料液温度降至50℃，调整料液pH值为5.0-6.0，加入果胶裂解酶，加入量体积比为料液体积的0.1%，维持温度45-50℃，酶解2小时，结束酶解，煮沸10分钟，灭酶、滤过，取上清液，减压浓缩至姬松茸、香菇、金针菇和人参达到所述浓度，得到发酵底物提取液；B.配料、灭菌：将发酵底物提取液中加入亚硒酸钠、硫酸锌、钼酸钠，加入0.5%葡萄糖，磷酸二氢钾100mg/100mL、磷酸氢二钾•3H2O100mg/100mL，调整料液pH，高压蒸汽灭菌后，即得到继后用于微生物发酵的发酵底物；C.接种、发酵：将预培养好的双歧杆菌属其中的两株培养液无菌操作接入到步骤B得到的无菌的发酵底物中，38±1℃、兼性厌氧培养2~6小时后，再次接种预培养的至少一种乳杆菌菌液，继续发酵；当发酵液pH值降至4.1时，将温度降至25℃，并再维持24小时，结束发酵；D.灭活：将发酵完成的发酵液70℃灭活，或者115℃灭活，得到所述的微生物发酵组合物。2.根据权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴炳新，孙筱林，陆继臣，褚新红，吕美，
申请(专利权)人：三株福尔制药有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37