一种克伦特罗的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法技术

本发明专利技术公开了一种克伦特罗的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。该试剂盒包括：吖啶酯标记物、偶联有抗原或抗体的磁微粒、克伦特罗校准品、化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。本发明专利技术试剂盒以磁分离化学发光技术为检测手段，同时结合吖啶酯标记技术。本发明专利技术建立的直接化学发光法灵敏度高、特异性强、准确快速，检测时间短，检测结果具有更高的准确性与重复性，该试剂盒可适用于各种发光检测仪器。

A magnetic particle chemiluminescence detection kit for clenbuterol and its preparation method

The invention discloses a magnetic particle chemiluminescence detection kit for clenbuterol and a preparation method thereof. The kit includes: acridine ester marker, magnetic particles coupled with antigen or antibody, clenbuterol calibrator, chemiluminescence pre excitation liquid A, chemiluminescence excitation liquid B and cleaning solution. The kit uses magnetic separation chemiluminescence technique as detection means, and combines with acridine ester labeling technology. The direct chemiluminescence method established by the invention has high sensitivity, strong specificity, accurate and fast, short detection time, high accuracy and repeatability of the detection result, and the kit can be applied to various luminous detection instruments.

【技术实现步骤摘要】
一种克伦特罗的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法
本专利技术属于食品安全检测领域，具体是一种克伦特罗的免疫磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。
技术介绍
克伦特罗（ractopamine，RAC），学名盐酸克伦特罗，又名克喘素、氨啸素、氨必妥、氨双氯喘通，其分子式为C12H18Cl2N2O，其结构为：在中国，通常所说的“瘦肉精”指的就是克伦特罗。克伦特罗是一种强效选择性β2受体激动剂，在家畜和人体内吸收好，而且与其它β-兴奋剂相比，它的生物利用度高，20世纪80年代初，美国一家公司开始将其添加到饲料中，增加瘦肉率，但如果作为饲料添加剂，使用剂量是人用药剂量的10倍以上，才能达到提高瘦肉率的效果。它用量大、使用的时间长、代谢慢，所以在屠宰前到上市，在猪体内的残留量都很大。这个残留量通过食物进入人体，就使人体渐渐地中毒，积蓄中毒。如果一次摄入量过大，就会产生异常生理反应的中毒现象，因此而被禁用。有研究指出，过量摄入克伦特罗，人体会出现不同程度的中毒反应，其症状与动物中毒症状相似，表现为肌肉震颤、四肢麻痹、心动过速、心律失常、腹痛、肌肉疼痛、恶心眩晕等症状，重者可引发染色体畸变、恶性肿瘤甚至死亡。因此中国禁止使用包括克伦特罗在内的任何“瘦肉精”。中国农业部1997年发文禁止瘦肉精在饲料和畜牧生产中使用。2002年2月，农业部会同卫生部和国家药品监督管理局联合出台了《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药品目录》，将“瘦肉精”列为禁用药品，并将“瘦肉精”列入年度例行监测计划。2001年12月27日、2002年2月9日、4月9日，农业部分别下发文件禁止食品动物使用β激动剂类药物作为饲料添加剂（农业部176号、193号公告、1519号条例）。因此，动物源性食品中克伦特罗残留检测，对保证食品安全起着非常重要的作用。到目前为止，用于检测动物源性食品中克伦特罗残留的方法主要有：高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱-质谱联用（GC-MS）、液相色谱-质谱联用（LC-MS）、胶体金免疫层析法（Colloidalgoldimmunochromatography）、酶联免疫法（ELISA）、酶促化学发光等。但是，高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用、液相色谱-质谱联用法中仪器设备昂贵，样品前处理复杂，费时费力又不易普及，检测成本高。胶体金免疫层析法的主要缺点是操作繁琐，流程较多，更易出现误差，灵敏度低。酶联免疫法虽然检测价格低廉、快速，但灵敏度也不够，只适用于微量物质的检测和鉴定，CN101290315A（2008年10月）公开了一种克伦特罗的酶联免疫检测方法和试剂盒及其制备方法，该试剂盒将克伦特罗抗原包被于固相载体上，加入待测样品，再加入克伦特罗双功能基因工程抗体，反应后加入底物液进行显色，测定百分吸光度从而推算样品中克伦特罗的浓度，该方法的主要缺点是灵敏度低。CN103728450A（2014年4月）公开了一种检测盐酸克伦特罗化学发光检测试剂盒，该试剂盒采用聚苯乙烯化学发光板包被克伦特罗与牛血清蛋白偶合制成的人工抗原，辣根过氧化物酶标记羊抗兔的盐酸克伦特罗多克隆抗体，采用辣根过氧化物酶主要缺点为：鲁米诺在没有辣根过氧化物酶存在情况下，也会被H2O2氧化自身发光，本底相对较高，影响信噪比，反应动力学复杂，影响因素多，结果不够稳定，要得到灵敏度高且平台期长的底物不容易。CN203929780U（2014年11月）公开了一种克伦特罗的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，该试剂盒采用磁性微球偶联克伦特罗抗原，碱性磷酸酶标记克伦特罗抗体，采用碱性磷酸酶的主要缺点为：底物达到平台期的时间长，底物成本高，导致检测成本高。因此，建立一种有效、快速、简单、灵敏、抗干扰性高的检测克伦特罗的方法具有十分重要的意义。本专利技术采用方法为直接化学发光法，采用吖啶酯作为化学发光标记物具有明显优势，主要表现在：反应不需要催化剂，只要碱性环境即可进行，反应迅速，可以完全捕捉反应产生的光子，背景发光低，信噪比高，干扰因素少，试剂稳定性好，体系简单，激发液成本低，吖啶酯易与蛋白质联结，且联结后光子产率不减少。本专利技术建立的磁微粒化学发光法灵敏度高、特异性强、准确快速、检测时间短、检测结果具有更高的准确性与重复性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种灵敏度更高、反应时间短、操作简单、抗干扰性高的克伦特罗的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种克伦特罗的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法，本专利技术所提供的磁微粒化学发光方法检测克伦特罗的试剂盒，可以采取克伦特罗单克隆抗体偶联磁微粒，吖啶酯标记克伦特罗抗原，也可以采取克伦特罗抗原偶联磁微粒，吖啶酯标记克伦特罗单克隆抗体。试剂盒还包括克伦特罗校准品、上述吖啶酯作用的化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。所述的磁微粒可直接与抗体或抗原偶联，也可将磁微粒与链霉亲和素偶联，同时采用生物素标记抗体或抗原。所述磁微粒的表面修饰基团为羧基、氨基、对甲苯磺酰基或链霉亲和素-生物素。所述的化学发光标记物为吖啶酯，如NSP-DMAE-NHS、NSP-SA-NHS等。所述的吖啶酯标记的是克伦特罗抗原，或克伦特罗单克隆抗体。所述的校准品是用含有0.5-5.0%BSA和0.1-0.5%PC300的Tris-HCl缓冲液为基质，加入克伦特罗纯品配置而成，校准品形态为液态。所述的克伦特罗校准品溶液浓度分别为：0μg/L、0.01μg/L、0.06μg/L、0.36μg/L、2.16μg/L、21.6μg/L。所述的化学发光预激发液A为H2O2和HNO3的混合液，其中H2O2的质量分数为0.05-5%，HNO3的浓度为0.05-2.5mol/L。所述的化学发光激发液B为TritonX-100和NaOH的混合液，其中TritonX-100的浓度为0.05-2.0mol/L，NaOH的浓度为0.05-1.0mol/L。所述的清洗液为：pH7.0-9.0、浓度为5.0-50.0mmol/L的Tris-HCl溶液，其中含浓度为0.05-0.50mol/L的NaCl及0.01-0.25%Tween-20。本专利技术的原理是将抗体-抗原反应的高度特异性与吖啶酯发光的高度灵敏性结合起来，利用吖啶酯捕捉反应产生的光子以检测产物浓度。本专利技术的优点在于采用竞争法联合磁微粒化学发光技术，测定食品中的克伦特罗含量。吖啶酯作为标记物的直接化学发光具有明显优势，主要表现在：反应不需要催化剂，只要碱性环境即可进行，反应迅速，可以完全捕捉反应产生的光子，背景发光低，信噪比高，干扰因素少，试剂稳定性好，体系简单，激发液成本低，吖啶酯易与蛋白质联结，且联结后光子产率不减少。具体实施方式本专利技术提供一种克伦特罗的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法，为使本专利技术的目的、技术方案及效果更加明确、清楚，以下对本专利技术进一步详细说明。本专利技术提供一种克伦特罗的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法，其中，本专利技术所提供的磁微粒化学发光方法检测克伦特罗的试剂盒，可以采取克伦特罗单克隆抗体偶联磁微粒，吖啶酯标记克伦特罗抗原，也可以采取克伦特罗抗原偶联磁微粒，吖啶酯标记克伦特罗单克隆抗体。试剂盒还包括克伦特罗校准品、上述吖啶酯作用的化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种克伦特罗的磁微粒化学发光检测试剂盒及其组成，其特征在于：包括偶联有克伦特罗单克隆抗体的磁微粒混悬液、校准品、吖啶酯标记的克伦特罗抗原、化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。

【技术特征摘要】
1.一种克伦特罗的磁微粒化学发光检测试剂盒及其组成，其特征在于：包括偶联有克伦特罗单克隆抗体的磁微粒混悬液、校准品、吖啶酯标记的克伦特罗抗原、化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。2.根据权利要求1所述的一种克伦特罗的磁微粒化学发光检测试剂盒及其组成，其特征在于：所述的磁微粒可直接与克伦特罗单克隆抗体偶联，或将磁微粒与链霉亲和素偶联，同时采用生物素标记克伦特罗单克隆抗体。3.根据权利要求1所述的一种克伦特罗的磁微粒化学发光检测试剂盒及其组成，其特征在于：所述的化学发光标记物为吖啶酯，如NSP-DMAE-NHS、NSP-SA-NHS等。4.根据权利要求1所述的一种克伦特罗的磁微粒化学发光检测试剂盒及其组成，其特征在于：所述的吖啶酯标记的是克伦特罗抗原。5.根据权利要求1所述的一种克伦特罗的磁微粒化学发光检测试剂盒及其组成，其特征在于：所述的校准品是以含有0.5-5.0%BSA和0.1-0.5%PC300的Tris-HCl缓冲液为基质，加入克伦特罗纯品配置而成的系列浓度...

【专利技术属性】
技术研发人员：常燕，胡雪婷，曹晶，刘丽青，杜爱铭，徐兵，
申请(专利权)人：太原瑞盛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山西,14