磁微粒增强免疫比浊检测盒及其应用制造技术

本发明专利技术提出的磁微粒增强免疫比浊检测盒，与胶乳增强免疫比浊试剂相比：胶乳微粒需要高速离心进行分离，而磁微粒能通过磁场快速分离，缩短制备时间，降低试剂制造成本。同时，磁微粒由于具有超顺磁性，磁场存在时能迅速聚集，磁场撤离后，磁微粒能快速分散，对磁微粒上抗体活性的影响较小。检测盒与化学发光免疫检测试剂相比：可应用于全自动生化分析仪，不需特定检测仪器，操作简单，检测速度快，稳定性好。同时，没有使用发光检测体系，试剂成本更低。

【技术实现步骤摘要】
磁微粒增强免疫比浊检测盒及其应用
本专利技术涉及到生物检测领域，特别是涉及到一种磁微粒增强免疫比浊检测盒及其应用。
技术介绍
现有的采用免疫比浊检测试剂检测血清的方法，一般使用胶乳增强技术，将抗体连接到胶乳微粒上，样本中的抗原与抗体发生免疫反应结合后，胶乳微粒亦产生聚集，放大了免疫反应的信号，从而达到增强体系检测信号的目的，在全自动生化分析仪上完成样本的检测。而采用化学发光免疫检测试剂检测血清的方法，则采用磁微粒增强技术，将抗体连接到磁微粒上，样本中的抗原与抗体发生免疫反应结合后，利用磁微粒超顺磁性，将结合物分离下来，除去未结合杂质，加入化学发光检测物质(如酶标记抗体和酶催化的化学发光底物或发光物质直接标记的抗体)，通过检测发光强度达到检测的目的，需在化学发光分析仪上完成样本的检测。然而现有的这两种检测血清的方法都有其缺点。例如使用胶乳增强免疫比浊试剂检测血清的方法，由于采用小粒径的胶乳微粒分离需高速冷冻离心机，分离时间长(30min-60min)，导致制造成本高。同时，由于离心时间长，离心后胶乳微粒需通过超声或均质机才能达到均匀分散的目的，过程中可能会破坏胶乳微粒上抗体的活性。而采用化学发光免疫检测试剂检测血清的方法，则需特定检测仪器，发光检测体系价格高，试剂成本高。
技术实现思路
本专利技术的主要目的为提供一种磁微粒增强免疫比浊检测盒及其应用，能以较低的成本检测血清浓度，同时提高血清的检测效率。本专利技术提出了一种磁微粒增强免疫比浊检测盒，包括R1试剂、R2试剂和校准品；所述R1试剂包括第一缓冲液、增强剂、第一稳定剂和第一防腐剂；所述R2试剂包括第二缓冲液，包括磁微粒-抗体复合物、第二稳定剂和第二防腐剂。优选地，所述第一缓冲液包括PBS缓冲液、Tris缓冲液、MOPSO缓冲液、Good’s缓冲液、HEPES缓冲液中的一种或几种。优选地，所述第一缓冲液包括0.02M的PBS缓冲液，其pH为7.4。优选地，所述第一增强剂包括PEG-300、PEG-2000、PEG-4000、PEG-6000和PEG-8000中的一种或几种。优选地，所述第一增强剂包括5％的PEG-6000。优选地，所述第一稳定剂或第二稳定剂包括蛋白质、非离子表面活性剂中的一种或几种。优选地，所述第一稳定剂包括0.5％BSA、0.1M甘氨酸，0.5％的曲拉通-100；所述第二稳定剂包括0.5％BSA，0.1M甘氨酸。优选地，所述第一防腐剂或第二防腐剂包括叠氮钠、Proclin300、抗生素中的一种或几种，所述抗生素包括四环素、庆大霉素、甲氧青霉素。优选地，所述第一防腐剂包括0.1％的Proclin300；所述第二防腐剂包括0.05％的Proclin300。优选地，所述磁微粒-抗体复合物中的磁微粒的粒径为50nm-300nm。优选地，所述校准样包括稀释液和重组蛋白，稀释液添加有稳定剂和防腐剂。本专利技术还提出了R2试剂的制备方法，包括以下步骤：将磁微粒放在磁力架上，吸附磁微粒，去掉保存液，用一定浓度缓冲液重悬磁微粒，使其均匀分散；将EDC和Sulfo-NHS平衡至室温，配成指定浓度的溶液，按一定比例加入到重悬后的磁微粒中，震荡活化，获得活化的磁微粒；将所述活化的磁微粒与抗体偶联，获得磁微粒-抗体复合物；向所述磁微粒-抗体复合物中加入一定体积的封闭液，震荡混匀，在指定温度下反应指定时间；反应后的磁微粒-抗体复合物经磁场分离后，去掉上层清液，用保存缓冲液清洗；用保存缓冲液重悬清洗后的磁微粒-抗体复合物，得到R2试剂。优选地，所述活化的磁微粒大小为50nm-300nm。优选地，所述活化的磁微粒大小为100nm。优选地，所述MES缓冲液浓度为0.02M-0.2M，pH为5.0-6.5。优选地，所述MES缓冲液浓度为0.05M，pH为6.0。优选地，加入的EDC和Sulfo-NHS与磁微粒的质量比为1:50至1:1。优选地，加入的EDC和Sulfo-NHS与磁微粒的质量比为1:20。优选地，所述将所述活化的磁微粒与抗体偶联，获得磁微粒-抗体复合物的步骤，包括：用偶联缓冲液重悬所述活化的磁微粒，使其均匀分散；向所述偶联缓冲液中加入一定比例的抗体溶液，震荡混匀，放入指定温度保温箱中反应指定时间；磁场分离，去掉上层清液，得到磁微粒-抗体复合物。优选地，所述偶联缓冲液包括Good’s缓冲液、PBS缓冲液、MOPSO缓冲液、HEPES缓冲液中的一种或多种。优选地，所述偶联缓冲液包括0.02M，pH为7.4的PBS缓冲液。优选地，所述抗体溶液与磁微粒的质量比为1:100至1:1。优选地，所述抗体溶液与磁微粒的质量比为1:10。优选地，所述封闭液包括BSA、脱脂奶粉或酪蛋白。优选地，所述封闭液包括3％的BSA。本专利技术还提及了上述任意一项的磁微粒增强免疫比浊检测盒在测定β2-MG(β2-微球蛋白)方面的应用。本专利技术提出的磁微粒增强免疫比浊检测盒，与胶乳增强免疫比浊试剂相比：胶乳微粒需要高速离心进行分离，而磁微粒能通过磁场快速分离，缩短制备时间，降低试剂制造成本。同时，磁微粒由于具有超顺磁性，磁场存在时能迅速聚集，磁场撤离后，磁微粒能快速分散，对磁微粒上抗体活性的影响较小。检测盒与化学发光免疫检测试剂相比：可应用于全自动生化分析仪，不需特定检测仪器，操作简单，检测速度快，稳定性好。同时，没有使用发光检测体系，试剂成本更低。附图说明图1为本专利技术磁微粒增强免疫比浊检测盒一实施例的校准品校准曲线；图2为本专利技术磁微粒增强免疫比浊检测盒一实施例的检测结果与胶乳增强免疫比浊试剂检测结果的比较。本专利技术目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。具体实施方式应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术实施例提出一种磁微粒增强免疫比浊检测盒，包括R1试剂、R2试剂和校准品；所述R1试剂包括第一缓冲液、增强剂、第一稳定剂和第一防腐剂；所述R2试剂包括第二缓冲液，包括磁微粒-抗体复合物、第二稳定剂和第二防腐剂。本实施例中，检测盒使用的校准品，用含有稳定剂和防腐剂稀释液溶解重组蛋白制得。R1试剂中，第一缓冲液可为PBS缓冲液(磷酸缓冲盐溶液，phosphatebuffersaline)、Tris缓冲液(三羟甲基氨基甲烷，2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol)、MOPSO缓冲液(3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸，3-(N-Morpholino)-2-hydroxypropanesulfonicacid)、Good’s缓冲液、HEPES缓冲液(4-羟乙基哌嗪乙磺酸，分子式:C8H18N2O4S)的一种或几种。优选0.02M，pH7.4的PBS缓冲液。其中，Good’s缓冲液是常用于生物研究的氨基乙烷和氨基丙烷磺酸，Good’s缓冲液具有如下特性：高水溶性；低细胞膜通透性；稳定的酸碱离解常数；低金属螯合能力；高化学稳定性；在紫外和可见光区中的低吸收光谱。第一增强剂为PEG-300、PEG-2000、PEG-4000、PEG-6000和PEG-8000中的一种或几种，优选5％的PEG-6000。聚乙二醇又名α-氢-ω-羟基(氧-1,2-乙二基)的聚合物、聚氧化乙烯(PEO-LS)，是平均分子量在高于200本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种磁微粒增强免疫比浊检测盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂和校准品；所述R1试剂包括第一缓冲液、增强剂、第一稳定剂和第一防腐剂；所述R2试剂包括第二缓冲液，包括磁微粒‑抗体复合物、第二稳定剂和第二防腐剂。

【技术特征摘要】
1.一种磁微粒增强免疫比浊检测盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂和校准品；所述R1试剂包括第一缓冲液、增强剂、第一稳定剂和第一防腐剂；所述R2试剂包括第二缓冲液，包括磁微粒-抗体复合物、第二稳定剂和第二防腐剂。2.根据权利要求1所述的磁微粒增强免疫比浊检测盒，其特征在于，所述第一缓冲液包括PBS缓冲液、Tris缓冲液、MOPSO缓冲液、Good’s缓冲液、HEPES缓冲液中的一种或几种，所述PBS缓冲液的浓度为0.02M，pH为7.4。3.根据权利要求1所述的磁微粒增强免疫比浊检测盒，其特征在于，所述第一增强剂包括PEG-300、PEG-2000、PEG-4000、PEG-6000和PEG-8000中的一种或几种，所述PEG-6000的添加量为5％。4.根据权利要求1所述的磁微粒增强免疫比浊检测盒，其特征在于，所述第一稳定剂包括蛋白质、非离子表面活性剂中的一种或几种；所述第二稳定剂包括0.5％BSA，0.1M甘氨酸；所述第一防腐剂或第二防腐剂包括叠氮钠、Proclin300、抗生素中的一种或几种。5.根据权利要求1所述的磁微粒增强免疫比浊检测盒，其特征在于，所述磁微粒-抗体复合物中...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪紫晶，于琴，丁军发，
申请(专利权)人：深圳蓝韵生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44