一种脑膜炎球菌抗原组合及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种新的脑膜炎球菌的抗原组合及其应用。具体地，所述的抗原组合包括：由fHbp V1变异型蛋白、fHbp V2变异型蛋白、和NHBA蛋白。实验证明，采用本发明专利技术抗原组合制备的疫苗能够具有明显的协同效应，且表现出良好的广谱抗脑膜炎球菌能力。

A meningococcal antigen combination and its application

The present invention provides a new antigen combination of Neisseria meningitidis and its application. Specifically, the combination of antigens by fHbp include: V1 mutant protein, fHbp protein, V2 mutation and NHBA protein. The results showed that the vaccine prepared with the antigen combination of this method had obvious synergistic effect, and showed good broad-spectrum anti meningococcal ability.

【技术实现步骤摘要】
一种脑膜炎球菌抗原组合及其应用本申请是申请日为2014年6月24日、申请号为201410290161.9、专利技术名称为“一种脑膜炎球菌抗原组合及其应用”的专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术涉及疫苗领域，尤其涉及脑膜炎球菌重组蛋白疫苗组分及其组合。
技术介绍
细菌性脑膜炎严重地威胁人类的健康，全球每年死亡病例估计有17万例，而奈瑟脑膜炎球菌是引起细菌性脑膜炎的三种主要病原微生物之一，也是唯一引起流行性脑膜炎(流脑)的致病菌。全球流脑的平均发病率为1-10/10万，病死率10％左右，20％以上患者会留下永久的中枢神经系统损伤。根据荚膜多糖化学结构的不同，脑膜炎球菌可分为13个血清群，主要的致病菌群是A、B、C、Y和W135群，可引起95％以上的病例。其他如29E、X等血清群也可致病，但病例数较少，最近在非洲发生小规模的X群流脑流行，中国也发现X群病例。在欧洲、美洲和大洋洲等地区，由B群菌株引起的脑膜炎超过1/3，在应用C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的国家，由B群菌株引起的病例超过了2/3，甚至达到90％(LucidarmeJ，等.JClinMicrobiol.2009,47(11):3577-3585.)。在中国，通常认为A群和C群是最主要的致病群。但是近年来，从病人和健康人中分离的脑膜炎球菌菌株中，B群为主要致病群的菌株约占1/3。对于A、C、W135和Y群来说，用荚膜多糖及荚膜多糖-蛋白结合物制成的多糖疫苗和多糖结合疫苗可以预防。而B群多糖结构与人体组织成分有同源性，不能制成疫苗。目前，只有几种外膜囊泡(OMV)疫苗在局部地区使用，这种疫苗的主要成分是I类外膜蛋白PorA。该蛋白是脑膜炎球菌亚型分类依据，具有高度变异性，因此OMV疫苗仅能用于预防与PorA同亚型的菌株。随着基因组学、蛋白组学、逆向疫苗学等的发展，一系列位于细菌表面、能诱导杀菌抗体的疫苗候选蛋白被筛选鉴定出来，主要包括：I类外膜蛋白PorA、奈瑟菌黏附素(NadA)、H因子结合蛋白(fHbp，其它名称GNA1870、LP2086、ORF2086、NMB1870、fHBP，具有变异型V1、V2和V3)、肝素结合蛋白(NHBA，其它名称GNA2132)、奈瑟菌表面蛋白A(NspA)等。由于脑膜炎球菌表面蛋白存在多样性和变异性，往往多抗原的组合才能达到较好、较广的保护效果，试验证据表明，多抗原的组合能发挥互补和协同作用。2013年1月，Novartis公司开发的一种B群脑膜炎球菌疫苗被欧盟批准上市，其成分为重组的GNA1870-fHbp(变异型V1)融合蛋白、NadA-3、NHBA-GNA2131融合蛋白，以及从NZ98/254菌株制备的OMV(主要成分为PorA1.4)。然而，多抗原疫苗中的各种抗原之间是否存在效价的互相影响以及是否会造成副作用的增大却是疫苗制备过程中潜在的风险。因此，基于脑膜炎球菌表面蛋白的多样性和变异性，如何选择合适的蛋白成为研制B群脑膜炎球菌疫苗，乃至通用型脑膜炎球菌疫苗的挑战。故本领域迫切需要开发一种有效且具有一定覆盖面的B群疫苗。
技术实现思路
本专利技术提供了一种独特的适用于B群脑膜炎的组合疫苗，其能诱导针对多种脑膜炎球菌的杀菌抗体。本专利技术的第一方面，提供了一种抗原组合，所述的抗原组合包括：H因子结合蛋白变异型1(factorHbindingprotein,variant1,fHbpV1变异型蛋白)、H因子结合蛋白变异型2(factorHbindingprotein,variant2,fHbpV2变异型蛋白)、和肝素结合蛋白(NeisserialHeparinBindingAntigen,NHBA蛋白)。在另一优选例中，所述的组合还包括将fHbpV1变异型蛋白、fHbpV2变异型蛋白或NHBA蛋白的氨基酸序列分别经过一个或几个氨基酸的取代、删除或添加而形成的衍生蛋白的组合，且所述的衍生蛋白的组合具有激活机体对脑膜炎球菌B群产生免疫应答活性的功能。在另一优选例中，所述的fHbpV1变异型蛋白、fHbpV2变异型蛋白、和NHBA蛋白分别包括野生型和突变型。在另一优选例中，所述的fHbpV1变异型蛋白(如SEQIDNO.:1-3)第6-113位氨基酸序列的同源性≥95％。在另一优选例中，所述的fHbpV2变异型蛋白(如SEQIDNO.:4-6)第6-145位氨基酸序列的同源性≥95％。在另一优选例中，所述的NHBA蛋白(如SEQIDNO.:7-9)第27-87位氨基酸序列的同源性≥85％。在另一优选例中，所述的抗原组合中，fHbpV1变异型蛋白的序列如SEQIDNO.:1-3所示；和/或所述fHbpV2变异型蛋白的序列如SEQIDNO.:4-6所示；和/或所述NHBA蛋白的序列如SEQIDNO.:7-9所示。在另一优选例中，所述抗原组合中的蛋白均来自脑膜炎奈瑟球菌(Neisseriameningitidis)。本专利技术第二方面，提供了一种分离的多核苷酸组合，所述的多核苷酸组合中的多核苷酸分别编码本专利技术第一方面所述抗原组合中的抗原。在另一优选例中，所述的多核苷酸组合中的多核苷酸序列如SEQIDNO.:10-18所示，分别编码SEQIDNO.:1-9的蛋白。本专利技术第三方面，提供了一种载体，所述的载体含有本专利技术第二方面所述的多核苷酸组合中的多核苷酸。在另一优选例中，所述的载体为表达载体。在另一优选例中，所述的载体中可含有一个或多个本专利技术第二方面所述多核苷酸组合中的多核苷酸。本专利技术第四方面，提供了一种宿主细胞，所述的宿主细胞含有本专利技术第三方面所述的载体，或所述的宿主细胞的染色体整合有本专利技术第二方面所述的多核苷酸组合。本专利技术第五方面，提供了一种获得本专利技术第一方面所述抗原组合的方法，培养本专利技术第四方面所述的宿主细胞，从而获得本专利技术第一方面所述的抗原组合。本专利技术第六方面，提供了一种本专利技术第一方面所述抗原组合的用途，用于制备预防脑膜炎球菌性脑膜炎的疫苗组合物。在另一优选例中，所述的疫苗组合物包括本专利技术第一方面所述的抗原组合，以及疫苗学上可接受的载体。在另一优选例中，所述的抗原组合还可用于作为载体蛋白用于制备多糖-蛋白结合疫苗。在另一优选例中，所述多糖可以来自奈瑟脑膜炎球菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、伤寒沙门菌、A群链球菌、B群链球菌；多糖可以来自于荚膜多糖、脂多糖、脂寡糖。本专利技术第七方面，提供了一种疫苗组合物，所述的疫苗组合物包括本专利技术第一方面所述的抗原组合，和疫苗学上可接受的载体。在另一优选例中，所述的疫苗学上可接受的载体包括铝佐剂、MF59、弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、CpG佐剂、卡介菌核糖核酸、单磷酰脂A。在另一优选例中，所述的疫苗组合物还可以用于制备联合疫苗。在另一优选例中，所述的联合疫苗还包括A群、C群、Y群或W135群疫苗，Hib结合疫苗、肺炎球菌结合疫苗、百日咳白喉破伤风疫苗、伤寒Vi多糖结合疫苗、副伤寒多糖结合疫苗，组成多价脑膜炎球菌疫苗和/或联合疫苗。在另一优选例中，所述的疫苗组合物还可以包含NadA、NspA、FetA。在另一优选例中，所述的疫苗组合物，fHbpV1变异型蛋白、fHbpV2变异型蛋白、NHBA蛋白之间的比例为1：(0.5-2)：(0.5-2)，优选为1:1:1(按有效成分的重量计)本专利技术第八方面，提供本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种疫苗组合物，其特征在于，所述的疫苗组合物包括：一种抗原组合所述的抗原组合包括：H因子结合蛋白变异型1(factor H binding protein,variant 1,fHbp V1变异型蛋白)、H因子结合蛋白变异型2(factor H binding protein,variant 2,fHbp V2变异型蛋白)、和肝素结合蛋白(Neisserial Heparin Binding Antigen,NHBA蛋白)；和，疫苗学上可接受的载体，其中，所述的疫苗学上可接受的载体包括铝佐剂、MF59、弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、CpG佐剂、卡介菌核糖核酸、或单磷酰脂A。

【技术特征摘要】
1.一种疫苗组合物，其特征在于，所述的疫苗组合物包括：一种抗原组合所述的抗原组合包括：H因子结合蛋白变异型1(factorHbindingprotein,variant1,fHbpV1变异型蛋白)、H因子结合蛋白变异型2(factorHbindingprotein,variant2,fHbpV2变异型蛋白)、和肝素结合蛋白(NeisserialHeparinBindingAntigen,NHBA蛋白)；和，疫苗学上可接受的载体，其中，所述的疫苗学上可接受的载体包括铝佐剂、MF59、弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、CpG佐剂、卡介菌核糖核酸、或单磷酰脂A。2.如权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述的抗原组合中，fHbpV1变异型蛋白的序列如SEQIDNO.:1-3所示；和/或所述fHbpV2变异型蛋白的序列如SEQIDNO.:4-6所示；和/或所述NHBA蛋白的序列如SEQIDNO.:7-9所示。3.如权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述抗原组合中的蛋白均来自脑膜炎奈瑟球菌(Neisseriameningitidis)。4.如权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述的抗原组合由SEQIDNO.1所示的fHbpV1变异型蛋白、SEQIDNO.4所示的fHbpV2变...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱为，吴根鹏，袁萍，黄帼英，王晓，毕慧，荣家康，
申请(专利权)人：上海生物制品研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：上海,31