【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫和分子生物学，具体涉及一种ccr8抗体或其抗原结合片段及其应用。
技术介绍
1、近年来新兴的肿瘤免疫疗法取得了极大进展，免疫检查点抑制剂(immunecheckpoint inhibitors,icis)极大扭转了肿瘤治疗中依赖手术和放化疗的局面。以程序性死亡受体pd-1/pd-l1为代表的免疫检查点作为新兴治疗靶点在肿瘤免疫治疗中应用广泛，pd-1/pd-l1抑制剂可打破免疫抑制状态抑制肿瘤进展，在肿瘤治疗中愈发重要。但ici在部分实体瘤中响应率较低如在非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma，nsclc)治疗中pd-1/pd-l1抑制剂响应率为27-39％，在头颈部鳞状细胞癌(head and necksquamous cell carcinoma,hnsc)中pd-1抑制剂响应率为20-30％。肿瘤微环境(tumormicroenvironment,tme)中复杂的免疫抑制分子及细胞对肿瘤治疗中ici响应率具有较大影响，因此通过改善肿瘤微环境的免疫抑制条件，对提高ici治疗响应率具有重要意义。
2、tme中浸润的treg细胞是免疫抑制的重要因素。treg细胞通过表达分化簇25(cluster ofdifferentiation 25，cd25)、cd39、2型白介素1受体(interleukin 1receptortype ii，il-1r2)等分子拮抗白介素2(interleukin 2，il-2)、il-1和胞外三磷酸腺苷(extracellular ade
3、ccr8是一种七次跨膜蛋白，是一种包含355个氨基酸的g蛋白偶联受体，属于趋化因子受体家族，限制性高表达于肿瘤浸润性treg细胞中，而在外周treg细胞中有限表达。ccr8配体包括多种c-c基序趋化因子配体(c-c motifchemokine ligand，ccl)如：ccl1、ccl4、ccl5、ccl8、ccl16、ccl17、ccl18等，可介导t淋巴细胞在体内的迁移。kegg数据库(编号k04183)显示趋化因子结合ccr8后，可激活jak-stat和mapk信号通路引起细胞因子释放，细胞生长分化和细胞迁移。多项研究表明ccr8特异性高表达于肿瘤浸润的treg细胞表面，是一种理想的抗肿瘤靶点。
4、本专利技术旨在开发一种新的靶向ccr8的特异性抗体，通过抗体介导的adcc活性可以将肿瘤浸润性treg细胞靶向清除，提高肿瘤免疫治疗的有效性和安全性。
技术实现思路
1、本专利技术通过杂交瘤技术，筛选ccr8抗体或其抗原结合片段，经验证合成的ccr8抗体或其抗原结合片段特异性结合人ccr8，人源化后进一步提高了结合活性，所述的ccr8抗体或其抗原结合片段能诱导对靶细胞相当的adcc活性，可以用于与表达ccr8相关的疾病的靶向治疗。具体的：
2、本专利技术的第一方面，提供了一种ccr8抗体或其抗原结合片段，所述的ccr8抗体或其抗原结合片段包含重链可变区的vhcdr1-3和/或轻链可变区的vlcdr1-3，其中，
3、vhcdr1的氨基酸序列包含如gftfntn(seq id no：1)或tnamn(seq id no：2)任一所示氨基酸序列，或，包含与gftfntn(seq id no：1)或tnamn(seq id no：2)任一所示氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99％以上同源性的氨基酸序列；
4、优选的，vhcdr1的长度为1-30个氨基酸，优选为5-10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个氨基酸。
5、vhcdr2的氨基酸序列包含如rtksnnya(seq id no：4)所示氨基酸序列，或，包含与rtksnnya(seq id no：4)所示氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99％以上同源性的氨基酸序列；
6、优选的，vhcdr2的长度为1-30个氨基酸，优选为8-19个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个氨基酸。
7、vhcdr3的氨基酸序列包含如ggvgitamnamdy(seq id no：5)所示氨基酸序列，或，包含与ggvgitamnamdy(seq id no：5)所示氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99％以上同源性的氨基酸序列；
8、优选的，vhcdr3的长度为1-30个氨基酸，优选为5-15个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个氨基酸。
9、vlcdr1的氨基酸序列包含如ksllhsngity(seq id no：6)所示氨基酸序列，或，包含与ksllhsngity(seq id no：6)所示氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99％以上同源性的氨基酸序列；
10、优选的，vlcdr1的长度为1-30个氨基酸，优选为11-16个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个氨基酸。
11、vlcdr2的氨基酸序列包含如rls所示氨基酸序列，或，包含与rls所示氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99％以上同源性的氨基酸序列；
1本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种CCR8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的CCR8抗体或其抗原结合片段包含重链可变区的VHCDR1-3和/或轻链可变区的VLCDR1-3，其中，
2.根据权利要求1所述的CCR8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的VHCDR1的氨基酸序列包含如GFTFNTNAMN(SEQ ID NO：8)所示氨基酸序列，或，包含与GFTFNTNAMN(SEQID NO：8)所示氨基酸序列具有90％以上同源性的氨基酸序列；
3.根据权利要求1或2所述的CCR8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的CCR8抗体或其抗原结合片段包含FR区，优选包含重链可变区的VHFR1-4和/或轻链可变区的VLFR1-4；
4.根据权利要求3所述的CCR8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的VHFR1-4的氨基酸序列包含如SEQ ID NO：31-34所示氨基酸序列，或，包含与SEQ ID NO：31-34所示氨基酸序列具有90％以上同源性的氨基酸序列。
5.根据权利要求3或4所述的CCR8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的VLFR1-4的
6.根据权利要求3-5任一所述的CCR8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的重链可变区中从N端到C端依次包括VHFR1、VHCDR1、VHFR2、VHCDR2、VHFR3、VHCDR3、VHFR4。
7.根据权利要求3-6任一所述的CCR8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的轻链可变区中从N端到C端依次包括VLFR1、VLCDR1、VLFR2、VLCDR2、VLFR3、VLCDR3、VLFR4。
8.根据权利要求1-7任一所述的CCR8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的重链可变区的氨基酸序列包含如SEQ ID NO：12或13所示氨基酸序列，或，包含与SEQ ID NO：12或13所示氨基酸序列具有90％以上同源性的氨基酸序列。
9.根据权利要求1-8任一所述的CCR8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的轻链可变区的氨基酸序列包含如SEQ ID NO：14或15所示氨基酸序列，或，包含与SEQ ID NO：14或15所示氨基酸序列具有90％以上同源性的氨基酸序列。
10.根据权利要求1-9任一所述的CCR8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的CCR8抗体或其抗原结合片段的重链可变区和轻链可变区选自下列组中的任一种：
11.根据权利要求1-10任一所述的CCR8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的CCR8抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区和/或轻链恒定区，优选的，所述的重链恒定区和/或轻链恒定区来源于人或非人动物。
12.根据权利要求11所述的CCR8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的重链恒定区来源于IgG、IgD、IgA、IgM或IgE中任一种重链的恒定区。
13.根据权利要求11或12所述的CCR8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的轻链恒定区来源于λ型轻链或κ型轻链中任一种轻链的恒定区。
14.根据权利要求11-13任一所述的CCR8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的重链恒定区来源于IgG重链，所述的轻链恒定区来源于κ轻链；
15.根据权利要求1-14任一所述的CCR8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的CCR8抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，所述的重链的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：28所示氨基酸序列，或，包含与SEQ ID NO：28所示氨基酸序列具有90％以上同源性的氨基酸序列；所述的轻链的氨基酸序列包含如SEQ ID NO：29所示氨基酸序列，或，包含与SEQ IDNO：29所示氨基酸序列具有90％以上同源性的氨基酸序列。
16.根据权利要求1-15任一所述的CCR8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的CCR8抗体或其抗原结合片段包括Fab、Fd、Fab’、Fab’-SH、Fv、scFv、F(ab’)2、单域抗体、双抗体(dAb)、全长抗体或线性抗体。
17.根据权利要求1-16任一所述的CCR8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的CCR8抗体或其抗原结合片段特异性结合人或非人动物的CCR8蛋白，
18.一种权利要求1-17任一所述的CCR8抗体或其抗原结合片段的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括：
19.一种嵌合抗原受体或TCR，其特征在于，所述的嵌...
【技术特征摘要】
1.一种ccr8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的ccr8抗体或其抗原结合片段包含重链可变区的vhcdr1-3和/或轻链可变区的vlcdr1-3，其中，
2.根据权利要求1所述的ccr8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的vhcdr1的氨基酸序列包含如gftfntnamn(seq id no：8)所示氨基酸序列，或，包含与gftfntnamn(seqid no：8)所示氨基酸序列具有90％以上同源性的氨基酸序列；
3.根据权利要求1或2所述的ccr8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的ccr8抗体或其抗原结合片段包含fr区，优选包含重链可变区的vhfr1-4和/或轻链可变区的vlfr1-4；
4.根据权利要求3所述的ccr8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的vhfr1-4的氨基酸序列包含如seq id no：31-34所示氨基酸序列，或，包含与seq id no：31-34所示氨基酸序列具有90％以上同源性的氨基酸序列。
5.根据权利要求3或4所述的ccr8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的vlfr1-4的氨基酸序列包含如seq id no：35-38所示氨基酸序列，或，包含与seq id no：35-38所示氨基酸序列具有90％以上同源性的氨基酸序列。
6.根据权利要求3-5任一所述的ccr8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的重链可变区中从n端到c端依次包括vhfr1、vhcdr1、vhfr2、vhcdr2、vhfr3、vhcdr3、vhfr4。
7.根据权利要求3-6任一所述的ccr8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的轻链可变区中从n端到c端依次包括vlfr1、vlcdr1、vlfr2、vlcdr2、vlfr3、vlcdr3、vlfr4。
8.根据权利要求1-7任一所述的ccr8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的重链可变区的氨基酸序列包含如seq id no：12或13所示氨基酸序列，或，包含与seq id no：12或13所示氨基酸序列具有90％以上同源性的氨基酸序列。
9.根据权利要求1-8任一所述的ccr8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的轻链可变区的氨基酸序列包含如seq id no：14或15所示氨基酸序列，或，包含与seq id no：14或15所示氨基酸序列具有90％以上同源性的氨基酸序列。
10.根据权利要求1-9任一所述的ccr8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的ccr8抗体或其抗原结合片段的重链可变区和轻链可变区选自下列组中的任一种：
11.根据权利要求1-10任一所述的ccr8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的ccr8抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区和/或轻链恒定区，优选的，所述的重链恒定区和/或轻链恒定区来源于人或非人动物。
12.根据权利要求11所述的ccr8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的重链恒定区来源于igg、igd、iga、igm或ige中任一种重链的恒定区。
13.根据权利要求11或12所述的ccr8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的轻链恒定区来源于λ型轻链或κ型轻链中任一种轻链的恒定区。
14.根据权利要求11-13任一所述的ccr8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的重链恒定区来源于igg重链，所述的轻链恒定区来源于κ轻链；
15.根据权利要求1-14任一所述的ccr8抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的ccr8抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，所述的重链的氨基酸序列包括如seq id no：28所示氨基酸序列，或，包含与seq id no：28所示氨...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁红远，张坤明，瞿爱东，吴丽娜，邱建华，
申请(专利权)人：上海生物制品研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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