The invention discloses a detection method of chicken infectious laryngotracheitis vaccine in A, B, J of avian leukosis virus subgroup, the DMEM on the commercialization of infectious laryngotracheitis vaccine was diluted and inoculated with DF cells 1, 37 C after 1h into DMEM culture containing 1%FBS 7 day; supernatants were collected for avian leukosis virus p27 group specific antigen ALV detection of ALV p27; p27 positive samples were collected from cell cultures and cDNA, were identified with the use of A and subgroup specific primers B and J of avian leukosis virus subgroup, the corresponding positive hole cells was detected by IFA with subgroup specific monoclonal antibody. This method can make live virus proliferate in cells, make up for the deficiency of direct PCR detection, and is effective, accurate, reliable and so on, which is of great significance for the prevention and control of avian leukosis.
【技术实现步骤摘要】
鸡传染性喉气管炎活疫苗中A、B、J亚群禽白血病病毒的检测方法
本专利技术属于禽白血病病毒检测领域,尤其涉及一种鸡传染性喉气管炎活疫苗中A、B、J亚群禽白血病病毒的检测方法。
技术介绍
禽白血病病毒(avianleukosisvirus,ALV)属于反转录病毒科,d反转录病毒属,可引起禽类的良性、恶性可传播肿瘤性疾病。ALV分为A-K共11个亚群,其中A、B、C、D、E、J、K这7个亚群可自然感染鸡,A、B、J亚群在临床易分离到,K亚群为近期发现的新亚群。ALV引起的临床感染和亚临床症状给世界养禽业造成了巨大的经济损失。在鸡群中,由ALV感染造成的死亡率有1%-2%,偶尔可达到20%甚至更高。除此之外,ALV还能造成亚临床感染,造成产蛋率下降,影响机体免疫抑制,降低疫苗免疫的成功率,严重影响生产性能。ALV既可以通过种蛋垂直传播,也可以通过接触水平传播。此外,使用污染了ALV的活疫苗也可能会造成病毒的传播。尽管目前部分大型种禽公司开展了对ALV的净化工作并取得成效,但临床生产中仍时有禽白血病的发生,而且表现各异,因此活疫苗中外源性禽白血病病毒的检测对于禽白血病的净化和防控具有极其重要的意义。市售商品化活疫苗中A、B、J亚群禽白血病病毒的检测方法主要是采用直接PCR的方法,但是直接PCR检测可能因为病毒含量少而出现漏检的情况;另外,也可能出现直接PCR扩增出的目的片段是基因片段而不是完整的活病毒的情况。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种有效、准确、可靠的鸡传染性喉气管炎活疫苗中A、B、J亚群禽白血病病毒的检测方法。为解决上述技术问题,本专利技术采 ...
【技术保护点】
一种鸡传染性喉气管炎活疫苗中A、B、J亚群禽白血病病毒的检测方法,其特征在于:采用DMEM对商品化鸡传染性喉气管炎活疫苗进行稀释,然后接种DF‑1细胞,37℃作用1h后换成含1%FBS的DMEM进行培养7天;收集细胞培养上清进行禽白血病病毒p27群特异性抗原ALV‑p27检测;对ALV‑p27阳性样品收集细胞培养物并抽取cDNA,用亚群特异性引物进行A、B、J亚群禽白血病病毒的鉴定,其对应阳性孔细胞,用亚群特异性单抗进行IFA检测。
【技术特征摘要】
1.一种鸡传染性喉气管炎活疫苗中A、B、J亚群禽白血病病毒的检测方法,其特征在于:采用DMEM对商品化鸡传染性喉气管炎活疫苗进行稀释,然后接种DF-1细胞,37℃作用1h后换成含1%FBS的DMEM进行培养7天;收集细胞培养上清进行禽白血病病毒p27群特异性抗原ALV-p27检测;对ALV-p27阳性样品收集细胞培养物并抽取cDNA,用亚群特异性引物进行A、B、J亚群禽白血病病毒的鉴定,其对应阳性孔细胞,用亚群特异性单抗进行IFA检测。2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于按以下步骤操作进行:(1)无菌条件下将2mLDMEM加入商品化鸡传染性喉气管炎活疫苗中,使其溶解;(2)将溶解的疫苗使用DMEM进行倍比稀释,稀释比例分别为1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64,采用各稀释比例的疫苗稀释液作用于单层DF-1细胞1h,随后换成含1%FBS的DMEM维持培养至7天后,通...
【专利技术属性】
技术研发人员:林璐璐,王培坤,韦平,毕玉彧,杨永立,李海娟,磨美兰,韦天超,黄腾,
申请(专利权)人:广西大学,
类型:发明
国别省市:广西,45
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