一种基于生物素化抗原或抗体-无机盐杂化纳米花的酶联免疫吸附测定方法技术

本发明专利技术公开了一种基于生物素化抗原或抗体‑无机盐杂化纳米花的酶联免疫吸附测定方法。属于免疫学检测领域。该方法利用链霉亲和素和生物素的快速高效特异性作用，将生物素化抗原或抗体‑无机盐杂化纳米花快速偶联到链霉亲和素修饰的酶标板上，解决了传统ELISA抗体包被需过夜反应的问题；其次，由于生物素化抗原或抗体‑无机盐杂化纳米花具有较高的稳定性，使其在常温条件下放置下仍有较好的活性；最后，所合成的生物素化抗原或抗体‑无机盐杂化纳米花具有三维层状结构，对后续抗体或抗原的捕获更为高效，有利于提高检测灵敏度。本发明专利技术提供的方法只需要提供生物素化的不同抗原或抗体，就能实现不同抗体或抗原的检测，具有高适用性。

【技术实现步骤摘要】
一种基于生物素化抗原或抗体-无机盐杂化纳米花的酶联免疫吸附测定方法
本专利技术涉及一种免疫学检测方法，尤其涉及一种基于生物素化抗原或抗体-无机盐杂化纳米花的酶联免疫吸附测定方法。
技术介绍
酶联免疫吸附实验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA),指将可溶性的抗原或抗体吸附到固相载体上，利用抗原-抗体结合专一性，进行免疫反应的定性和定量检测方法。自从Engvall和Perlmann于1971年专利技术以来该方法得到了迅猛的发展，已广泛应用于各种抗原抗体的检测。夹心ELISA方法是目前最为常用的抗原和抗体的检测手段，该方法具有操作简单、快速、灵敏等优点。其基本原理是，检测抗体时，把相应的抗原分子包被在聚苯乙烯固相载体上，加入被检测样品，孵育，洗涤，加入酶标抗抗体，再孵育、洗涤，然后加入酶底物显色，在酶标仪上读取数据，根据底物显色反应的强弱来判断被检样品中抗体的含量；检测抗原时，把针对该抗原的抗体分子包被在固相载体上，加入被检样品，孵育，洗涤，再加入被检抗原的另一种抗体(二抗)，孵育，洗涤，加入酶标抗二抗的抗体，再孵育、洗涤，最后加入酶底物显色，读数本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于生物素化抗原或抗体‑无机盐杂化纳米花的酶联免疫吸附测定方法，其特征在于，将生物素化的抗原或抗体，与硫酸铜溶液一起加入到pH值为6.8~7.4的磷酸缓冲溶液中，得到生物素化的抗原或抗体‑无机盐杂化纳米花复合物，与链霉亲和素修饰的酶标板在37℃孵育，将孵育有生物素化抗原或抗体‑无机盐杂化纳米花的酶标板用于待测样品的酶联免疫吸附测定。

【技术特征摘要】
1.一种基于生物素化抗原或抗体-无机盐杂化纳米花的酶联免疫吸附测定方法，其特征在于，将生物素化的抗原或抗体，与硫酸铜溶液一起加入到pH值为6.8~7.4的磷酸缓冲溶液中，得到生物素化的抗原或抗体-无机盐杂化纳米花复合物，与链霉亲和素修饰的酶标板在37℃孵育，将孵育有生物素化抗原或抗体-无机盐杂化纳米花的酶标板用于待测样品的酶联免疫吸附测定。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：（a）将磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，氯化钠溶解于去离子水中，调节混合溶液的pH值至6.8~7.4，得到磷酸缓冲溶液，再加入硫酸铜溶液和生物素修饰的抗原或抗体，摇匀后室温放置18h，得到生物素化抗原或抗体-无机盐杂化纳米花复合物；（b）将所得生物素化抗原或抗体-无机盐杂化纳米花复合物离心得沉淀，用水洗涤2~4次，得洗涤后的生物素化抗原或抗体-无机盐杂化纳米花复合物；（c）将洗涤后的生物素化抗原或抗体-无机盐杂化纳米花复合物均匀分散在PBST缓冲溶液中,置于链霉亲和素修饰的孔板中，37℃孵育30~120min后，用洗液洗涤五次，再加入2%BSA溶液，于37℃封闭45min,得包被有生物素化抗原或抗体-无机盐杂化纳米花的酶标板，置于4℃保存备用；所述的洗液为PBST缓冲溶液，其中磷酸盐缓冲溶液浓度为10mM,NaCl...

【专利技术属性】
技术研发人员：何治柯，刘宇澄，吉邢虎，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42