一种化学提取‑热能分析法检测那屈肝素钙中N‑NO的系统和方法技术方案

本发明专利技术涉及一种化学提取‑热能分析法检测那屈肝素钙中N‑NO的系统和方法，该系统包括TEA分析仪、一级冷凝装置、二级冷凝装置、蠕动泵、加热器、反应器、氧气源、真空泵和氮气源。该方法包括：S1：溶液配制；S2：仪器调节等准备；S3：打开两级冷凝装置，使两级冷凝开始冷凝介质循环；S4：从反应器的样品入口加入部分反应体系，调节氮气流速等；S5：加入标准品溶液和供试品溶液，记录色谱图；计算得出结果。该系统设置巧妙、简单，能够完全适宜那屈肝素钙中NO的检测。本方法结果更精确、检出限更低、检出速度更快、更简单，且该方法大大简化了程序，其具有极高的灵敏度和对含氮化合物的高选择性，是专一性极强的检测方法。

【技术实现步骤摘要】
一种化学提取-热能分析法检测那屈肝素钙中N-NO的系统和方法
本专利技术涉及化学成分定量检测领域，具体涉及一种化学提取-热能分析法检测那屈肝素钙中N-NO的系统和方法。
技术介绍
低分子肝素时近年发展起来的新一代肝素类抗血栓药物，其抗血栓作用优于肝素，而抗凝血作用低于肝素，且具有皮下注射吸收良好、生物利用度高、体内半衰期长、出血倾向小等优点，目前已广泛应用于临床。那屈肝素钙是低分子肝素的一种，由亚硝酸降解肝素得到，重均相对分子质量3600～5000，临床用于预防手术后血栓栓塞、预防深静脉血栓形成、肺栓塞、血液透析时体外循环的抗凝剂、末端血管病变等。近年许多研究表明，那屈肝素钙的临床适应症越来越广泛。那屈肝素钙的生产过程中使用了亚硝酸，亚硝酸和肝素在一定的条件下生成亚硝胺化合物，含有N-NO基团。大量的动物实验已确认，亚硝胺是强致癌物，并能通过胎盘和乳汁引发后代肿瘤。因此，检测那屈肝素钙中N-NO的含量，即是对亚硝胺化合物的含量控制，对保证患者用药安全具有重要意义。检测原理：样品释放出NO2·和NO·，通过过滤&冷阱除去裂解副产物，在反应室中，NO·与O3反应，得到电子激发态NO2，经过光电倍增管检测，在红外区域发射光谱，最后通过积分仪显示信号。目前那屈肝素钙中N-NO基团主要是用热能分析仪进行检测。体系载气为氩气，传统装置中需要配置气泡捕捉器和冷阱中用到的试剂，装填至装置后进行试验，该试剂配置过程复杂，装置耗费空间较大，冷阱温度控制麻烦，加热反应体系时无法振荡混匀。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的是提供一种化学提取-热能分析法检测那屈肝素钙中N-NO的系统和方法，解决了现有技术中存在的不足。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现：一种化学提取-热能分析法检测那屈肝素钙中N-NO的检测系统，包括TEA分析仪，所述TEA分析仪内设有化学发光检测器，TEA分析仪上设有能够为TEA分析仪提供氧气的氧气源入口、与化学发光检测器连通的N-NO混合气体入口和真空泵接口；所述检测系统还包括一级冷凝装置、二级冷凝装置、蠕动泵、加热器、反应器、氧气源、真空泵和氮气源。所述一级冷凝装置上设有冷凝介质流动腔和第一混合气体流动腔，所述冷凝介质流动腔上设有第一冷凝介质出口和第一冷凝介质入口，所述第一混合气体流动腔上设有第一混合气体入口和第一混合气体出口；所述二级冷凝装置内设有冷凝介质存放腔和第二混合气体流动腔，所述冷凝介质存放腔上设有第二冷凝介质出口和第二冷凝介质入口，所述第二混合气体流动腔上设有相互连通的第二混合气体入口和第二混合气体出口，所述第二混合气体入口与一级冷凝装置上的第一混合气体出口连接以使反应器内的混合气体通过一级冷凝装置进入二级冷凝装置内，所述第二混合气体出口通过气路管与TEA上的N-NO混合气体入口连接；所述第二冷凝介质入口与所述第一冷凝介质出口连接；所述蠕动泵，其与第一冷凝介质入口和第二冷凝介质出口连接以使二级冷凝装置中的冷凝介质进入一级冷凝装置中；所述反应器上设有气体出口和能够加入样品并通入氮气的样品入口，所述气体出口与第一混合气体入口连接以使反应器中的混合气体进入一级冷凝装置中，所述样品入口通过氮气管与氮气源连接；所述加热器上放置有反应器；所述热能分析仪上的氧气源入口与氧气源连接，所述真空泵接口与真空泵连接。进一步地，所述氮气管上设有氮气分压阀；所述TEA分析仪内设有能够调节混合气体进入量的氮气调节阀、氧气进入量的氧气调节阀。进一步地，所述一级冷凝装置为冷凝管；所述二级冷凝装置为冷凝器。进一步地，所述氮气管贯穿所述样品入口上的盖子从而通往反应器；所述反应器中设置有搅拌装置。一种化学提取-热能分析法检测那屈肝素钙中N-NO的方法，按照上述的检测系统将检测中所用到的设备进行连接，该方法包括以下步骤：S1：溶液配制：直接采用甲酰胺溶液稀释配制供试品溶液和标准品溶液；S2：①打开真空泵将TEA分析仪抽真空，真空度稳定在0.15torr以下以后，打开TEA分析仪；②TEA分析仪所显示的真空度在20min内均维持在0.13torr以下时，打开氮气调节阀和氮气管上的氮气分压阀，并将氮气分压调节至4～6psi；③转动氧气调节阀，使真空度达到0.50±0.01torr，然后转动氮气分压阀和氮气调节阀，使分压阀压力为5psi时，真空度达到1.67±0.01torr；④依次打开TEA分析仪中的臭氧发生器和光度计；S3：打开二级冷凝装置，使冷凝介质的温度维持在0-5℃，再打开蠕动泵，使一级冷凝装置和二级冷凝装置内的冷凝介质循环；S4：从反应器的样品入口加入乙酸乙酯和氢溴酸，使密闭整个系统，调节进入反应器中的氮气流速为35±0.5ml/min，调节加热器温度，使之保持持续稳定沸腾的状态；S5：将标准品溶液和供试品溶液分别注入反应器中，反应生成的NO气体经两次冷却进入化学发光检测器中，记录色谱图；并将采集到的数据进行计算，得出结果。进一步地，进入反应器中的氮气流速为35ml/min。进一步地，在步骤S1中，溶液配制的具体方法为：供试品溶液：配制甲酰胺溶液，然后精密称定供试品，加甲酰胺溶液稀释制成供试品溶液；配制标准品储备液：(1)配制标准品储备液：取标准品NDPA，加入无水乙醇溶解，制成NDPA浓度为10μg/ml的溶液，密封避光储存；(2)配制标准品浓配液：精密量取标准品储备液，用无水乙醇稀释，制成NDPA的浓配液；(3)标准曲线溶液：精密量取标准品浓配液适量，用甲酰胺溶液稀释，制成含NDPA浓度为逐渐增高的梯度浓度溶液。进一步地，所述配制标准品储备液的浓度为10μg/ml；标准品浓配液的浓度为1000ng/ml；用甲酰胺溶液稀释所制成的NDPA梯度浓度溶液分别为：0ng/ml、60ng/ml、120ng/ml、180ng/ml的溶液，其中，0ng/ml为甲酰胺溶液中不加取标准品浓配液。进一步地，甲酰胺溶液的配制浓度为：在1g的氨基磺酸中加入19ml甲酰胺和1ml水，振摇使成均匀溶液。进一步地，步骤S4中，反应容器内加入磁力搅拌子进行搅拌，乙酸乙酯和氢溴酸的加入量分别为15ml和5ml；加热器温度的温度调节为60～70℃；标准品溶液和供试品溶液每次的进样量均为30～60ul。本专利技术至少具有以下有益效果：本专利技术提供了一种化学提取-热能分析法检测那屈肝素钙中N-NO的系统和方法，该系统设置巧妙，简单、明了，能够更精确的检测NO，可完全适宜那屈肝素钙中NO的检测。本专利技术的方法比传统方法的检出结果稳定性更高、更精确、检出限更低、检出速度更快、更简单，且得到的色谱图峰型漂亮，图谱基线平稳，使得计算速度更快更方便，误差率极低，其计算结果与实际结果基本一致，具有极其重要的应用意义；具体地，本专利技术只需50ul的进样量，便可精确检测出ppb级浓度的亚硝胺类化合物，其检出限能达到0.06ppm以下。而且该方法的试剂配置过程非常简单，大大简化了程序，节省了时间、成本和人力；本专利技术具有极高的灵敏度和对含氮化合物的高选择性，是专一性极强的检测方法。具体地，①采用氮气流并将氮气流量精密控制能够显著提高检测精度和稳定性，且使检测结果更清晰、检出限更低。②通过具体的一级冷凝装置和二级冷凝装置等具体的设置使得控制温度等等更精确，且显著提高了精确度本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种化学提取‑热能分析法检测那屈肝素钙中N‑NO的检测系统，包括TEA分析仪，所述TEA分析仪内设有化学发光检测器，TEA分析仪上设有能够为TEA分析仪提供氧气的氧气源入口、与化学发光检测器连通的N‑NO混合气体入口和真空泵接口；其特征在于：所述检测系统还包括一级冷凝装置、二级冷凝装置、蠕动泵、加热器、反应器、氧气源、真空泵和氮气源；所述一级冷凝装置上设有冷凝介质流动腔和第一混合气体流动腔，所述冷凝介质流动腔上设有第一冷凝介质出口和第一冷凝介质入口，所述第一混合气体流动腔上设有第一混合气体入口和第一混合气体出口；所述二级冷凝装置内设有冷凝介质存放腔和第二混合气体流动腔，所述冷凝介质存放腔上设有第二冷凝介质出口和第二冷凝介质入口，所述第二混合气体流动腔上设有相互连通的第二混合气体入口和第二混合气体出口，所述第二混合气体入口与一级冷凝装置上的第一混合气体出口连接以使反应器内的混合气体通过一级冷凝装置进入二级冷凝装置内，所述第二混合气体出口通过气路管与TEA分析仪上的N‑NO混合气体入口连接；所述第二冷凝介质入口与所述第一冷凝介质出口连接；所述蠕动泵，其与第一冷凝介质入口和第二冷凝介质出口连接以使二级冷凝装置中的冷凝介质进入一级冷凝装置中；所述反应器上设有气体出口和能够加入样品并通入氮气的样品入口，所述气体出口与第一混合气体入口连接以使反应器中的混合气体进入一级冷凝装置中，所述样品入口通过氮气管与氮气源连接；所述加热器上放置有反应器；所述热能分析仪上的氧气源入口与氧气源连接，所述真空泵接口与真空泵连接。...

【技术特征摘要】
1.一种化学提取-热能分析法检测那屈肝素钙中N-NO的检测系统，包括TEA分析仪，所述TEA分析仪内设有化学发光检测器，TEA分析仪上设有能够为TEA分析仪提供氧气的氧气源入口、与化学发光检测器连通的N-NO混合气体入口和真空泵接口；其特征在于：所述检测系统还包括一级冷凝装置、二级冷凝装置、蠕动泵、加热器、反应器、氧气源、真空泵和氮气源；所述一级冷凝装置上设有冷凝介质流动腔和第一混合气体流动腔，所述冷凝介质流动腔上设有第一冷凝介质出口和第一冷凝介质入口，所述第一混合气体流动腔上设有第一混合气体入口和第一混合气体出口；所述二级冷凝装置内设有冷凝介质存放腔和第二混合气体流动腔，所述冷凝介质存放腔上设有第二冷凝介质出口和第二冷凝介质入口，所述第二混合气体流动腔上设有相互连通的第二混合气体入口和第二混合气体出口，所述第二混合气体入口与一级冷凝装置上的第一混合气体出口连接以使反应器内的混合气体通过一级冷凝装置进入二级冷凝装置内，所述第二混合气体出口通过气路管与TEA分析仪上的N-NO混合气体入口连接；所述第二冷凝介质入口与所述第一冷凝介质出口连接；所述蠕动泵，其与第一冷凝介质入口和第二冷凝介质出口连接以使二级冷凝装置中的冷凝介质进入一级冷凝装置中；所述反应器上设有气体出口和能够加入样品并通入氮气的样品入口，所述气体出口与第一混合气体入口连接以使反应器中的混合气体进入一级冷凝装置中，所述样品入口通过氮气管与氮气源连接；所述加热器上放置有反应器；所述热能分析仪上的氧气源入口与氧气源连接，所述真空泵接口与真空泵连接。2.根据权利要求1所述的化学提取-热能分析法检测那屈肝素钙中N-NO的检测系统，其特征在于：所述氮气管上设有氮气分压阀；所述TEA分析仪内设有能够调节混合气体进入量的氮气调节阀、氧气进入量的氧气调节阀。3.根据权利要求2所述的化学提取-热能分析法检测那屈肝素钙中N-NO的检测系统，其特征在于：所述一级冷凝装置为冷凝管；所述二级冷凝装置为冷凝器。4.根据权利要求3所述的化学提取-热能分析法检测那屈肝素钙中N-NO的检测系统，其特征在于：所述氮气管贯穿所述样品入口上的盖子从而通往反应器；所述反应器中设置有搅拌装置。5.一种化学提取-热能分析法检测那屈肝素钙中N-NO的方法，其特征在于：按照权利要求1～4中任一项所述的检测系统将检测中所用到的设备进行连接，该方法包括以下步骤：S1：溶液配制：直接采用甲酰胺溶液稀释配制供试品溶液和标准品溶液；S2：①打开真空泵将TEA分析仪抽真空，真空度稳定在0.15torr以下以后，打开TEA分析仪；②TEA分析仪所显示的真空度在...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾春华，徐燕妮，王晨光，王轲，
申请(专利权)人：常州千红生化制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32