一种肝素中细菌内毒素的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种肝素中细菌内毒素的检测方法，方法包括：Step1：用细菌内毒素检查用水溶解细菌内毒素标准品；Step2：用细菌内毒素检查用水稀释细菌内毒素标准品溶液至0.01‑5EU/mL范围内；Step3：用细菌内毒素检查用水溶解动态浊度法鲎试剂；Step4：将Step2配制的细菌内毒素标准品溶液取于反应容器中，加鲎试剂，置于内毒素检测仪检测；Step5：配制样品溶液；Step6：配制加标样品溶液：将样品溶液和细菌内毒素标准品溶液，混匀即得；Step7：取Step5中配制的样品溶液和Step6中配置的加标样品溶液分别置于两个反应容器中，分别加入Step3中制备的鲎试剂，置于内毒素检测仪检测。

A method for the detection of bacterial endotoxin in heparin

【技术实现步骤摘要】
一种肝素中细菌内毒素的检测方法
本专利技术涉及药物制剂
，具体涉及普通肝素或低分子肝素中的细菌内毒素的检测方法。
技术介绍
肝素首先从肝脏发现而得名，由葡萄糖胺，L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替组成的黏多糖硫酸脂。它也存在于肺、血管壁、肠粘膜等组织中，是动物体内一种天然抗凝血物质。作为一种抗凝剂，是由二种多糖交替连接而成的多聚体，在体内外都有抗凝血作用。临床上主要用于血栓栓塞性疾病、心肌梗死、心血管手术、心脏导管检查、体外循环、血液透析等。随着药理学及临床医学的进展，肝素的应用不断扩大。肝素钠(Heparinsodium)具有带强负电荷的理化特性，能干扰血凝过程的许多环节，在体内外都有抗凝血作用。其作用机制比较复杂，主要通过与抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)结合，而增强后者对活化的Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ和Ⅻ凝血因子的抑制作用。其后果涉及阻止血小板凝集和破坏，妨碍凝血激活酶的形成；阻止凝血酶原变为凝血酶；抑制凝血酶，从而妨碍纤维蛋白原变成纤维蛋白。细菌内毒素是检测肝素和低分子肝素中的重要指标，目前，用细菌内毒素凝胶法来检测本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肝素中细菌内毒素的检测方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：/nStep1：用细菌内毒素检查用水溶解细菌内毒素标准品，置于混悬器上混悬5min；/nStep2：用细菌内毒素检查用水稀释细菌内毒素标准品溶液至0.01-5EU/mL范围内；/nStep3：用细菌内毒素检查用水溶解动态浊度法鲎试剂；/nStep4：将Step2配制的细菌内毒素标准品溶液取于反应容器中，加鲎试剂，置于内毒素检测仪检测；/nStep5：配制样品溶液：细菌内毒素检查用水配制样品溶液；配制样品溶液的溶液浓度为3～10IU/mL；所述样品包括肝素或低分子肝素；肝素包括肝素钠和肝素钙，低分子肝素包括依诺肝素钠、达肝素钠...

【技术特征摘要】
1.一种肝素中细菌内毒素的检测方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
Step1：用细菌内毒素检查用水溶解细菌内毒素标准品，置于混悬器上混悬5min；
Step2：用细菌内毒素检查用水稀释细菌内毒素标准品溶液至0.01-5EU/mL范围内；
Step3：用细菌内毒素检查用水溶解动态浊度法鲎试剂；
Step4：将Step2配制的细菌内毒素标准品溶液取于反应容器中，加鲎试剂，置于内毒素检测仪检测；
Step5：配制样品溶液：细菌内毒素检查用水配制样品溶液；配制样品溶液的溶液浓度为3～10IU/mL；所述样品包括肝素或低分子肝素；肝素包括肝素钠和肝素钙，低分子肝素包括依诺肝素钠、达肝素钠、那屈肝素钙；
Step6：配制加标样品溶液：将样品溶液和细菌内毒素标准品溶液，混匀即得；
Step7：取Step5中配制的样品溶液和Step6中配置的加标样品溶液分别置于两个反应容器中，分别加入Step3中制备的鲎试剂，置于内毒素检测仪检测。


2.根据权利要求1所述的肝素中细菌内毒素的检测方法，其特征在于：Step1中的细菌内毒素含量小于0.005EU/mL；细菌内毒素标准品的稀释方法中，每2-10倍稀释为一个检测点。


3.根据权利要求2所述的肝素中细菌内毒素的检测方法，其特征在于：Step2中所述细菌内毒素标准品的稀释方法中，稀释的检测点的具体浓度梯度及体积为：1EU/mL0.7mL，0.2EU/mL1.8mL，0.1EU/mL1mL，0.02EU/mL1.4mL，0.01EU/mL1.2mL；
所述细菌内毒素标准品的稀释方法中，稀释时，混匀时间为30s。


4.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：恽卫东，陶翎，张贵莲，
申请(专利权)人：常州千红生化制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32