一种荧光分子量内标的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种荧光分子量内标的制备方法，将外源DNA片段A克隆进质粒载体，得到亚克隆质粒B；以亚克隆质粒B为模板，利用定点突变技术，依次向质粒B中引入n个不同长度的外源片段，得到亚克隆质粒C1‑Cn；以C1‑Cn质粒为模板设计通用引物，其中上游引物5’端用FAM荧光标记，以所设计得到的通用引物对C1‑Cn质粒进行扩增，得到扩增产物D1‑Dn；将得到的扩增产物D1‑Dn混合，在ABI3500xl上进行检测，调整各片段峰高趋于一致。本发明专利技术采用定点突变技术结合PCR扩增的方法，采用定点突变技术结合PCR扩增的方法，实现制备一系列长度不同、R值＝0.99的片段。

A method for preparation of internal standard of fluorescent molecular weight

The invention discloses a preparation method of a fluorescent internal standard of molecular weight, the exogenous DNA fragment was cloned into A plasmid vector, was subcloned in plasmid B; cloned plasmid B as template, using site directed mutagenesis technology were introduced into the n of different lengths of exogenous fragment to vector B, sub clone plasmid C1 Cn; universal primer template design based on C1 Cn plasmid, the upstream primer 5 'end labeled with FAM fluorescence of C1 plasmid Cn were amplified with universal primers designed by D1 Dn, amplified products; will be amplified D1 Dn hybrid, were detected in ABI3500xl, adjustment the fragment peak height consistent. In the present invention, site directed mutagenesis combined with PCR amplification method and site directed mutagenesis technique combined with PCR amplification method are used to prepare a series of fragments with different lengths and R = 0.99.

【技术实现步骤摘要】
一种荧光分子量内标的制备方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种荧光分子量内标的制备方法。
技术介绍
分子量内标是在进行STR检测时与样品在同一通道电泳的一系列长度不同的DNA片段，在数据分析时，通过分析样品DNA与分子量内标的相对出峰位置，就可以标定样品DNA的大小。在电泳时，分子量内标的出峰时间和峰型也可以反映电泳仪器的工作状态。现有的分子量内标制备方法都是采用PCR扩增技术对模板进行扩增，通过固定上游引物，依次向下设计下游引物的方法得到一系列长度不等的片段，如图1所示。采用这种方法需要摸索PCR扩增条件，扩增产物容易有非特异性条带，并且制备的分子量内标稳定性差。而且由于引物二聚体的长度与内标中的小片段长度相近，不易于纯化，因此混有引物峰，容易在数据分析时产生误判，也不易于规模化生产。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术旨在提供一种荧光分子量内标的制备方法，采用定点突变技术结合PCR扩增的方法，实现制备一系列长度不同、R值＝0.99的片段。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种荧光分子量内标的制备方法，包括如下步骤：S1将外源DNA片段A克隆进质粒载体，得本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种荧光分子量内标的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1将外源DNA片段A克隆进质粒载体，得到亚克隆质粒B；S2以亚克隆质粒B为模板，利用定点突变技术，依次向质粒B中引入n个设定长度不同的外源片段，得到亚克隆质粒C1‑Cn；S3以C1‑Cn质粒为模板设计通用引物，其中上游引物5’端用FAM荧光标记，以所设计得到的通用引物对C1‑Cn质粒进行扩增，得到扩增产物D1‑Dn；S4将步骤S3中得到的扩增产物D1‑Dn混合，在ABI3500xl上进行检测，调整各片段峰高趋于一致，最终得到荧光分子量内标。

【技术特征摘要】
1.一种荧光分子量内标的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1将外源DNA片段A克隆进质粒载体，得到亚克隆质粒B；S2以亚克隆质粒B为模板，利用定点突变技术，依次向质粒B中引入n个设定长度不同的外源片段，得到亚克隆质粒C1-Cn；S3以C1-Cn质粒为模板设计通用引物，其中上游引物5’端用FAM荧光标记，以所设...

【专利技术属性】
技术研发人员：荣海博，管桦，郝凤龙，姜伯玮，阮德林，张涛，金川，
申请(专利权)人：公安部第一研究所，北京中盾安民分析技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11