高效表达抗菌肽PG‑1的方法及其在修复组织损伤中的应用技术
High expression of antimicrobial peptide PG 1 method and its application in the repair of injured tissues
The present invention provides a method for efficient expression of antibacterial peptide PG 1, which comprises the following steps: (1) gene sequence optimization of antibacterial peptide PG after 1; (2) to construct the yeast cells expressing PG 1 recombinant plasmid pJ912 PG 1; (3) using the recombinant pJ912 PG 1 plasmid was transformed into Pichia pastoris X 33 cells; (4) screening positive transformants identification; (5) culturing the transformed bacteria, get a lot of expression of antibacterial peptide PG 1. The method of the invention is simple and easy to operate, has high yield and is easy to be produced on a large scale.
【技术实现步骤摘要】
高效表达抗菌肽PG-1的方法及其在修复组织损伤中的应用
本专利技术属于生物
，具体涉及抗菌肽PG-1在酵母菌中的高效表达及其在修复组织损伤中的应用。
技术介绍
抗菌肽Protegrin-1(PG-1)是从猪白细胞中分离得到的由18个氨基酸残基组成的猪源抗菌肽，二级结构为β-折叠，4个半胱氨酸形成2个二硫键对其二级结构的维持及抗微生物学活性起着非常重要的作用。目前已证明PG-1对革兰氏阴性菌、部分革兰氏阳性菌、真菌以及少数囊膜病毒有抗微生物学活性，其中包括HIV、登革热病毒。抗菌肽在医学和农业上具有重要的研究和应用价值。因此，PG-1是目前被证明为最具潜力成为抗生素的替代物之一。酵母表达系统具有生长快、操作简单，利于大规模发酵生产等优点，同时真核生物能对表达外源蛋白质进行翻译后修饰，使得表达的蛋白具有生物学活性等的优点。毕赤酵母是一种可高效表达外源蛋白的表达系统，具有遗传稳定性。毕赤酵母的醇氧化酶(AOX)基因的启动子具有强诱导性和强启动性，适于外源基因的高水平诱导表达，可高密度发酵等许多优点，应用十分广泛，已有数百种外源蛋白在该系统中获得表达。研究发现，毕赤...
【技术保护点】
一种高效表达抗菌肽PG‑1的方法，其包括如下步骤：(1)提供抗菌肽PG‑1的优化后的基因序列SEQ ID NO.1；(2)构建酵母细胞中表达PG‑1的重组质粒pJ912‑PG‑1；(3)用所述重组质粒pJ912‑PG‑1转化毕赤酵母X‑33细胞；(4)筛选阳性转化子，鉴定；(5)培养转化菌，获得大量表达的抗菌肽PG‑1。
【技术特征摘要】
1.一种高效表达抗菌肽PG-1的方法，其包括如下步骤：(1)提供抗菌肽PG-1的优化后的基因序列SEQIDNO.1；(2)构建酵母细胞中表达PG-1的重组质粒pJ912-PG-1；(3)用所述重组质粒pJ912-PG-1转化毕赤酵母X-33细胞；(4)筛选阳性转化子，鉴定；(5)培养转化菌，获得大量表达的抗菌肽PG-1。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，在整个基因序列前后分别加入XhoI_和NotI酶切位点。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，重组质粒的构建是采用限制性内切酶XhoI酶和NotI酶酶切，再用T4DNA连接酶连接而成。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，重组质粒转化方法是电转化法，采用Bio-rad电转化仪预设PIC程序。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，先用SacⅠ酶切重组表达质粒使其线性化，再电击转化毕赤酵母感受态细胞X-33。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(4)中，鉴定阳性转转化子方法为PCR鉴定法。7.根据权利要求1所述的方法，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：李巨浪，伊芬娜，
申请(专利权)人：佛山科学技术学院，
类型：发明
国别省市：广东,44
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