一种抗菌肽制造技术

本发明专利技术公开了一种抗菌肽，其序列为Tyr‑Gly‑Arg‑Lys‑Lys‑Arg‑Arg‑Gln‑Arg‑Arg‑Arg‑X1‑X2‑Arg‑Arg‑Leu‑Trp‑Gly‑Ala，其中，X1选自Lys、Arg、Trp、Leu、Phe、Tyr；X2选自Trp、Arg、Lys、Phe、Ser、His。该抗菌肽对耐甲氧青霉素金葡菌、耐万古霉素肠球菌、耐碳青霉烯铜绿假单胞菌、耐药肺炎克雷伯杆菌有明显的抑制作用，而且具有很低的溶血活性，稳定性好，抗菌活性强，具有高效广谱抑菌作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种抗菌肽。
技术介绍
抗生素作为一类重要的临床用药，自被应用以来已拯救了无数人的生命。但近年来，抗生素滥用及耐药菌的层出不穷，特别是多药耐药菌(超级细菌)的出现成为当今世界医疗领域面临的主要难题之一，也使得越来越多的国家开始寻求抗生素替代品。多肽类抗菌药物因其抗菌活性高，不易产生耐药性等原因，被认为将会在医药工业上有着广阔的应用前景，也是人们解决耐药菌、促进人类健康的希望所在。抗菌肽又称抗微生物肽(antimicrobialpeptide)或肽抗生素(peptideantibiotics)，在动植物体内分布广泛，是天然免疫防御系统的一部分。抗菌肽和常规的抗生素不同，它是某个特定基因编码的蛋白产物，因此具有独特的抗菌机制。抗菌肽来源于多种生物,如哺乳动物、无脊椎动物、植物、真菌、细菌等,目前已发现的抗菌肽有2000多种。抗菌肽具有广谱抗细菌、真菌、病毒、螺旋体、寄生虫的活性,而且具有不易产生耐药的特性。近年来,抗生素的广泛使用造成了多药耐药菌感染在临床的蔓延,因而抗菌肽低耐药性在预防与治疗耐药菌感染方面具有广阔的应用前景,其研究及应用已成为当前生物制药的热点。同时作为最具潜力的抗生素替代品之一，抗菌肽在新型食品、药品、护肤品以及化妆品防腐剂中的应用也越来越广泛，具有良好的发展前景。虽然天然抗菌肽具有普遍的优点，但也存在着某些明显的不足。例如，相当一部分天然的抗菌肽抑菌活性较低、稳定性较差、毒性较高，例如导致真核细胞发生溶血等；另外，部分天然抗菌肽对耐药菌的抑制效果差，不能满足实际应用的要求。
技术实现思路
本专利技术针对上述问题，提供一种抗菌肽，该抗菌肽的序列为：Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-X1-X2-Arg-Arg-Leu-Trp-Gly-Ala，其中，X1选自Lys、Arg、Trp、Leu、Phe、Tyr；X2选自Trp、Arg、Lys、Phe、Ser、His。实验结果表明，本专利技术的抗菌肽对耐甲氧青霉素金葡菌(MRSA)、耐万古霉素肠球菌(VRE)、耐碳青霉烯铜绿假单胞菌(CRPA)、耐药肺炎克雷伯杆菌(KPN)有明显的抑制作用，而且具有很低的溶血活性，稳定性好，抗菌活性强，具有高效广谱抑菌作用。根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种抗菌肽，其序列为：Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-X1-X2-Arg-Arg-Leu-Trp-Gly-Ala，其中，X1选自Lys、Arg、Trp、Leu、Phe、Tyr；X2选自Trp、Arg、Lys、Phe、Ser、His；优选，X1为Arg；优选，X2为Lys。根据本专利技术的另一个方面，本专利技术提供了一种组合物，含有本专利技术的抗菌肽。在本专利技术中，该组合物包括但不限于洗面奶、洗手液、沐浴液、洗发香波、漱口水、牙膏、香皂、化妆品、女性护理洗液、洗衣皂、洗衣液、洗衣粉、洗涤灵、消毒液或洁厕液等。根据本专利技术的另一个方面，本专利技术提供了一种织物，含有本专利技术的抗菌肽。在本专利技术中，织物包括但不限于衣物、床上用品、消毒纸巾、辅料或绷带等。根据本专利技术的另一个方面，本专利技术提供了一种食品或饲料，含有本专利技术的抗菌肽。根据本专利技术的另一个方面，本专利技术提供了一种卫生巾、卫生护垫、尿不湿或尿垫，含有本专利技术的抗菌肽。根据本专利技术的另一个方面，本专利技术提供了一种药物组合物，含有本专利技术的抗菌肽。根据本专利技术的另一个方面，本专利技术提供了本专利技术的抗菌肽在制备具有抑菌和或杀菌性能的产品中的应用。这些产品包括但不限于洗面奶、洗手液、沐浴液、洗发香波、漱口水、牙膏、香皂、化妆品、女性护理洗液、洗衣皂、洗衣液、洗衣粉、洗涤灵、消毒液、洁厕液、衣物、床上用品、消毒纸巾、辅料、绷带、卫生巾、卫生护垫、尿不湿、尿垫、食品、饲料等。根据本专利技术的另一个方面，本专利技术提供了本专利技术的抗菌肽在制备用于预防和/或治疗感染的药物中的应用。优选，所述感染由细菌、真菌、病毒、螺旋体或寄生虫引起。根据本专利技术的另一个方面，本专利技术提供了本专利技术的抗菌肽用作防腐剂的应用。在本专利技术的上述组合物、食品或饲料、药物组合物中，抗菌肽可以是使其具有抑菌和/或杀菌性能的活性成分，也可以仅用作防腐剂。如果抗菌肽为具有抑菌和/或杀菌性能的活性成分，其含量应当是抑菌和/或杀菌有效量的；如果抗菌肽用作防腐剂，其含量应当是防腐有效量的。本领域技术人员具有能力确定上述组合物、食品或饲料、药物组合物中抗菌肽的合适含量。在本专利技术的上述织物、卫生巾、卫生护垫、尿不湿或尿垫中，抗菌肽为提供抑菌和/或杀菌性能的活性成分。本领域技术人员具有能力确定抗菌肽的合适含量。本领域技术人员知晓，在本专利技术的各种组合物、食品或饲料、药物组合物中，可进一步含有常规的各种辅料和/或活性成分，并且能够根据本领域的常规方法确定本专利技术的抗菌肽、各种辅料和火星成分的合适含量。本领域技术人员同样知晓如何制备含有本专利技术的抗菌肽的织物、卫生巾、卫生护垫、尿不湿、尿垫，包括但不限于将织物、卫生巾、卫生护垫、尿不湿、尿垫，或者制造织物、卫生巾、卫生护垫、尿不湿、尿垫的材料在含有本专利技术抗菌肽的溶液中浸渍。本专利技术的抗菌肽可以采用本领域技术人员已知的方法(例如固相合成方法)制备得到，以及可以采用本领域已知的分离纯化方法(例如高效液相色谱法)分离纯化。附图说明图1为抗菌肽BT315的溶血活性图2为抗菌肽BT315的质谱鉴定图图3为抗菌肽BT315的HPLC纯度鉴定图具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外，应理解，在阅读了本专利技术所记载的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本专利技术所限定的范围。实施例1.抗菌肽的合成与纯化1.按照Fmoc固相多肽合成法合成X1为Arg、X2为Lys的抗菌肽BT315，合成步骤如下所示：1.1为保证多肽C-端为-CONH2结构，选用RinkAmide树脂类作为高分子固相载体。1.2去Fmoc保护基团：1.2.1将所需高分子固相载体放入合成柱中，加入有机溶剂DMF(二甲基甲酰胺)浸泡10分钟后排放；通入20％的哌啶/DMF溶液盖过树脂表面，通N2反应10分钟后排放；重复一遍通入20％哌啶/DMF、通N2反应10分钟后排放。1.2.2N2保护下，通入DMF溶剂5遍，以彻底洗涤上述树脂。1.3缩合反应:氨基酸活化：称取所需摩尔量3倍的Fmoc-保护氨基酸，溶解于DMF溶剂中，配制成其饱和溶液，加入等摩尔量1-羟基苯并三唑(HOBT)及二异丙基碳二亚胺(DIC)，如果需要再加入DMF直至完全溶解，形成氨基酸活化液。在N2环境下，氨基酸活化液通入合成柱中，与其中高分子树脂充分接触，使高分子树脂上活性基团与活化的氨基酸发生(脱水)缩合反应生成肽键；室温下缩合反应时间为30分钟至1小时；反应后排放废液；1.4按照多肽序列，重复步骤1.2至1.3操作直至完成整个肽链的合成。1.5裂解及侧链保护基团的移除：1.5.1配制三氟乙酸(TFA)混合裂解液“K”，配方如下：三氟乙酸(TFA)(82.5％v/v)苯酚(phenol)(5％v/v)水(wate本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗菌肽，其特征在于，所述抗菌肽的序列为：Tyr‑Gly‑Arg‑Lys‑Lys‑Arg‑Arg‑Gln‑Arg‑Arg‑Arg‑X1‑X2‑Arg‑Arg‑Leu‑Trp‑Gly‑Ala，其中，X1选自Lys、Arg、Trp、Leu、Phe、Tyr；X2选自Trp、Arg、Lys、Phe、Ser、His；优选，X1为Arg；优选，X2为Lys。

【技术特征摘要】
1.一种抗菌肽，其特征在于，所述抗菌肽的序列为：Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-X1-X2-Arg-Arg-Leu-Trp-Gly-Ala，其中，X1选自Lys、Arg、Trp、Leu、Phe、Tyr；X2选自Trp、Arg、Lys、Phe、Ser、His；优选，X1为Arg；优选，X2为Lys。2.一种组合物，其特征在于，含有如权利要求1所述的抗菌肽。3.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物为洗面奶、洗手液、沐浴液、洗发香波、漱口水、牙膏、香皂、化妆品、女性护理洗液、洗衣皂、洗衣液、洗衣粉、洗涤灵、消毒液...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵树民，鲍勇刚，石松传，周方，
申请(专利权)人：北京博肽未名生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11