一种用于转化莱茵衣藻的AANAT基因植物双元表达载体及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种含有莱茵衣藻褪黑素合酶

For the AANAT gene of Chlamydomonas Rhine plant transformation binary expression vector and its construction method

The invention discloses a containing Rhine Chlamydomonas melatonin synthase

【技术实现步骤摘要】
一种用于转化莱茵衣藻的AANAT基因植物双元表达载体及其构建方法
本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种用于转化莱茵衣藻的AANAT基因植物双元表达载体的构建。
技术介绍
褪黑素(meLatonin，MT；N-乙酰基-5-甲氧基-色胺)是色氨酸的吲哚衍生物，分子式为C13H16N2O2，相对分子量为232.27，熔点116-118℃，纯品为淡黄色叶片状结晶。高亲脂性和部分亲水性的褪黑素属中性偏弱酸性，不溶于水，易溶于丙酮、乙醇、乙醚等有机溶剂，受热易破坏。褪黑素具有吲哚杂环性质，能与羟自由基（–OH）和烷过氧自由基（ROO–）等反应。1958年，MT最早被Lerner等发现于脊椎动物脑中松果体腺(pineaLgLand)，首次从牛松果体中分离出，L963年正式被确认为激素，也称松果体腺素，普遍存在于动物、藻类、真菌和细菌中。褪黑素作为一种动物激素，对脊椎动物生物节律和光周期反应有调控作用，同时褪黑素能与一些自由基发生反应，是一种有效的抗氧化剂；另外，褪黑素与生殖系统，免疫、内分泌系统的密切相关，可以防治老年痴呆、帕金森病、季节性抑郁症、癫病等症等。褪黑素在植物体内也有类似的功能本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有莱茵衣藻

【技术特征摘要】
1.一种含有莱茵衣藻AANAT基因的双元表达载体，其特征在于：所述载体的构建方法包括以下步骤：（1）AANAT基因为序列表中SEQIDNo.5所示DNA分子，来自莱茵衣藻的CDNA序列，并在目的基因两端增加NdeI和EcoRI酶切位点，其引物序列为序列表中SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的DNA分子；（2）以pUCK-AANAT质粒为模板，PCR扩增含有NdeI和EcoRI位点的目的基因AANAT后，同时与PDBLe质粒进行双酶切回收，回收产物用T4DNA连接酶连接，转化感受态大肠杆菌DH5α，Amp100mg/L抗性的LB平板筛选培养，挑取单克隆扩大培养，进行菌液PCR验证及质粒双酶切验证，将阳性重组质粒命名为pDBLe-AANAT；（3）将重组质粒pDBLe-AANAT与质粒pRI101-AN使用BamHI和KpnI双酶切，回收产物连接，热激转化DH5α的感受态细胞，Kana50mg/L抗性的LB平板筛选培养，挑取单克隆扩大培养，将阳性重组质粒命名为pRI101-AANAT。2.根据权利要求1所述的含有莱茵衣藻AANAT基因的双元表达载体，其特征在于，所述双元表达载体为pRI101-AANAT。3.权利要求1所述含有莱茵衣藻AANAT基因的双元表达载体的构建方法，其特征在于包括以下步骤：（1）AANAT基因为序列表中SEQIDNo.5所示DNA分子，来自莱茵衣藻的CDNA序列，并在目的基因两端增加NdeI和EcoRI酶切位点，其引物序列为序列表中SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的DNA分子；（2）以pUCK-AANAT质粒为模板，PCR扩...

【专利技术属性】
技术研发人员：王英娟，张雨靖，高文英，杨泽熵，吕亚维，
申请(专利权)人：西北大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61