The invention provides a fluorescent probe for detecting hydrogen peroxide activity, through the use of aspirin dissolved in dichloromethane, adding 1 hydroxyl benzene and three triazole, 1 ethyl (3 two methyl amino propyl) two carbonyl imine hydrochloride, adding fluorophore containing hydroxyl, obtained by extraction, decompression rotary dry column chromatography. Detection method of fluorescent probe provided by the invention is simple, with the detection system probe was incubated for 10 min measured fluorescence intensity, then the results are given, without other auxiliary reagents; detection of hydrogen peroxide activity of live cells in the organization; detection of hydrogen peroxide to protective effect on oxidative stress injury. Application of fluorescent probes of the invention can be used in the detection of hydrogen peroxide concentration in the solution, can also be applied in the detection of hydrogen peroxide in cells or tissue activity in living cells as well as in the application of detection of protective effect on oxidative stress injury. The structure of the fluorescent probe is described:
【技术实现步骤摘要】
一种检测过氧化氢活性的荧光探针及制备和应用
本专利技术属生物检测领域,涉及一类检测过氧化氢活性的荧光探针,及其制备方法和在检测生物样本中过氧化氢活性中的应用。
技术介绍
内皮细胞功能紊乱对心脑血管疾病的发生发展起着重要的促进作用。虽然二者之间的潜在的分子事件仍未有明确的定论,但是,在病理进程中必然伴随着氧化应激的发生。因此,在神经血管及心血管疾病的发生发展中,活性氧自由基(ROS)起着关键的作用。过氧化氢是活性氧自由基家族中的关键成员,在包括中风等重大疾病的病理机制中均有参与。内皮细胞中的过氧化氢水平的失衡,会导致细胞内氧化还原紊乱,破坏内皮细胞正常功能的发挥,对细胞造成损伤。作为促氧化分子,过氧化氢主要由超氧化物自发或是以超氧化物歧化生成。过氧化氢可被谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶、硫氧化还原蛋白或过氧化还原酶(Prx)等酶清除。过氧化氢可以氧化一些生物大分子,如脂质、蛋白质和DNA,从而引起细胞毒性损伤。有研究报道表明过氧化氢不仅限于表现损伤的一方面,过氧化氢还可以作为第二信使,在生理过程中起着重要的调控作用。因此,过氧化氢表现作用的好坏主要取决于其产生的部位、局部浓度及累积情况。对活体组织中过氧化氢水平进行检测具有重要的疾病诊断意义。针对过氧化氢的检测,现已有多种方式,包括氧化还原敏感荧光蛋白、纳米管、超极化、超声、质谱、PET、化学发光,以及过氧化氢反应性小分子荧光探针。值得注意的是,小分子荧光探针由于具有高敏感、对组织无损伤等特性,越来越引起研究人员的关注。然而,现有的市售的荧光探针,如二氯二氟荧光素、二氢罗丹明等,对ROS缺乏特异性。 ...
【技术保护点】
一种检测过氧化氢活性的荧光探针,其特征在于,具有式I所示的结构:
【技术特征摘要】
1.一种检测过氧化氢活性的荧光探针,其特征在于,具有式I所示的结构:R为荧光团如苯并噻唑类、香豆素、荧光素、1,8-萘二酰亚胺类、萘系列染料、罗丹明、花菁素系列、2-二氰基亚甲基-3-氰基-4,5,5-三甲基-2,5-二氢呋喃染料、7-硝基-苯并-2-氧杂-1,3-二唑染料、苯并吡喃类染料、2,5-二苯基恶唑类、染料氟硼二吡咯。2.权利要求1所述的式I化合物的制备方法,其特征在于,通过以下步骤实现:将阿司匹林溶解在二氯甲烷中,加入1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐,之后再加入含有羟基的荧光团,室温反应,经萃取,减压旋干溶剂,柱层析,即得式I化合物。3.根据权利要求1所述的式I化合物在检测溶液中过氧化氢浓度中的应用,其特征在于,通过以下步骤实现:将探针分子用二甲基亚砜溶解,制备储备液;取储备液,加入待检测体系中,使探针终浓度为10微摩尔,室温孵育,一小时后在荧光光谱仪上测定体系荧光强度,进而确定待检测溶液中的过氧化氢浓度。4.根据权利要求1所述的式I化合物在检测细胞或组织中过氧化氢活性中的应用。5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,通过以下步骤实现:(1)细胞中外源过氧化氢浓度的检测:体外培养EA.hy926细胞,接种于玻璃片上,待细胞密度达到70-80%后用于后续实验,细胞分别孵育5μM,10μM,20μM的探针观测探针的有效工作浓度;给予50μM,100μM,200μM,的...
【专利技术属性】
技术研发人员:李新,王成坤,程娟,韩峰,卢应梅,胡永洲,
申请(专利权)人:浙江大学,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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