融合蛋白基因、工程菌及其在制备9α‑羟基‑雄烯二酮中的应用制造技术
The fusion protein, gene engineering bacteria and its use in preparing 9 alpha hydroxy androst-4-ene-3,17-dione in two.
The invention discloses a fusion protein, gene engineering bacteria and its application in preparation, 9 alpha hydroxy androst-4-ene-3,17-dione in two in which the gene encoding fusion protein including 3 phytosterone 9 alpha hydroxylase gene encoding cytochrome P450 BM and enzyme in Huang Suyu 3 gene. The 3 phytosterone 9 alpha hydroxylation enzyme expressed in E.coli, and the recombinant DNA technology, 3 phytosterone 9 alpha hydroxylase and cytochrome P450 BM 3 enzyme Huang Suyu fusion expression, KshA fusion protein was obtained P450, and containing the fusion protein of recombinant strains catalyzed androst-4-ene-3,17-dione in two preparation of 9 alpha hydroxy androst-4-ene-3,17-dione in two, not only improve the activity, but also improve the conversion rate.
【技术实现步骤摘要】
融合蛋白基因、工程菌及其在制备9α-羟基-雄烯二酮中的应用
本专利技术涉及生物化工领域，尤其涉及一种融合蛋白基因、工程菌及其在制备9α-羟基-雄烯二酮中的应用。
技术介绍
9α-OH-AD是一种重要的化工中间体，在甾体类物质生产中起着重要作用。利用9α-OH-AD可以合成多种甾体原料药，比如氢化可的松、地塞米松、依普利酮、17α-OH黄体酮、可的松等。9α-OH-AD的结构式如式(1)所示：目前，9α-OH-AD主要是以雄烯二酮(AD)为原料，通过多步化学反应进行制备获得。但化学法普遍存在着制备路线长、选择性差、反应复杂、收率低和污染严重等问题。因此，开发环境友好的9α-羟基-雄烯二酮生物制备方法来克服化学合成法的不利之处就显得尤为重要。现今已发现多种微生物可以用来制备9α-OH-AD，如诺卡氏菌(Nocardia)、红球菌(Rhodococcus)等可以对雄烯二酮(AD)进行9α-羟基化生成9α-OH-AD；分支杆菌(Mycobacterium)等可以通过对植物甾醇底物进行侧链降解以及9α-羟基化等一系列的反应来生成9α-OH-AD。在微生物转化法制备9α-OH...
【技术保护点】
一种融合蛋白基因，其特征在于，所述融合蛋白基因包括编码3‑甾酮‑9α‑羟基化酶的基因和编码细胞色素P450 BM‑3酶中黄素域的基因。
【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白基因，其特征在于，所述融合蛋白基因包括编码3-甾酮-9α-羟基化酶的基因和编码细胞色素P450BM-3酶中黄素域的基因。2.如权利要求1所述的融合蛋白基因，其特征在于，所述3-甾酮-9α-羟基化酶来源于红平红球菌(Rhodococcuserythropolis)SQ1，其碱基序列在GenBank的登录号为AY083508.1；所述细胞色素P450BM-3酶来源于巨大芽孢杆菌(BacillusmegateriumNBRC15308)，其碱基序列在GenBank的登录号为CP009920.1。3.如权利要求1所述的融合蛋白基因，其特征在于，其碱基序列如SEQIDNO.1所示。4.一种包含权利要求1～3任一所述融合蛋白基因的表达载体或重组质粒。5.一种由权利要求1～3任一所述的融合蛋白基因编码的融合蛋白。6.如权利要求5所述的融合蛋...
【专利技术属性】
技术研发人员：梅乐和，王康，赵伟睿，胡升，黄俊，金志华，吴志革，
申请(专利权)人：浙江大学宁波理工学院，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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