一种同时表达n个蛋白或蛋白亚基的方法及其专用系统技术方案

本发明专利技术公开了一种同时表达n个目的物的方法及其专用系统。同时表达n个目的物的系统，包含DNA甲和DNA乙；n为2以上的自然数；目的物为蛋白或蛋白亚基或蛋白片段或多肽或多肽片段；所述DNA甲依次包括如下元件：启动子甲、融合基因甲、终止序列甲；所述DNA乙依次包括如下元件：启动子乙、融合基因乙、终止序列乙。实验证明，将编码人源COPI复合体的各个亚基的编码基因插入重组质粒pFBD‑mCEG‑COPI，转化受体菌获得重组杆状病毒穿梭载体，进一步转染昆虫细胞，可获得有活性的人源COPI复合体。因此，本发明专利技术所提供的同时表达n个目的物的系统在同时表达多个蛋白或蛋白亚基或多肽或多肽片段中具有重要的应用价值。

A method for simultaneous expression of N protein or protein subunits and its specific system

The invention discloses a method for simultaneously expressing n objects and a special system thereof. The expression of n system at the same time an object that contains the DNA A and DNA B; n is a natural number more than 2; the object for protein or protein subunits or protein fragments or peptides or polypeptides; the method comprises the following components: a DNA promoter, a fusion gene and a termination sequence; the DNA B includes the following components: promoter B, B, B fusion gene sequence. Experiments show that each subunit encoding gene encoding human COPI complexes inserted into the recombinant plasmid pFBD mCEG COPI, transformed into the recombinant baculovirus shuttle vector to transfect insect cell, can obtain human COPI complex activity. Therefore, the system provided for simultaneous expression of n objects has important application value in simultaneous expression of multiple proteins or protein subunits or polypeptides or polypeptide fragments.

【技术实现步骤摘要】
一种同时表达n个蛋白或蛋白亚基的方法及其专用系统
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种同时表达n个蛋白或蛋白亚基的方法及其专用系统。
技术介绍
杆状病毒表达系统(BaculovirusExpressionSystem，BVES)是在昆虫细胞中高效表达外源蛋白质的用力工具，具有安全性好、表达水平高、可进行翻译后加工等优点。由于杆状病毒的基因组庞大，外源基因的克隆不能通过酶切连接的方法直接插入，所以人们对杆状病毒基因组进行改造，并构建与之相匹配的转移载体，使两者重组为能够感染昆虫细胞的含外源基因的重组杆状病毒。在目前广泛使用的BactoBac系统中，杆状病毒穿梭载体(Bacmid)既可以在大肠杆菌中复制，又可以感染鳞翅目昆虫细胞，其在大肠杆菌中可以与含外源基因的匹配转移载体发生Tn7位点特异性重组。重组得到的杆状病毒穿梭载体能在大肠杆菌中高效复制，被提纯后可用于转染昆虫细胞。杆状病毒基因组容量大，可以在转移载体上插入多个开放阅读框(ORF，OpenReadingFrame)，继而使得到的重组杆状病毒穿梭载体在昆虫细胞中同时表达多个蛋白质。这也是目前在昆虫细胞中实现多种蛋白质共表达的通本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时表达n个目的物的系统，包含DNA甲和DNA乙；所述DNA甲依次包括如下元件：启动子甲、融合基因甲、终止序列甲；所述融合基因甲中含有片段Ⅰ；所述片段Ⅰ包括m1个区段，每个区段编码一个所述目的物，每相邻两个区段之间具有一个以上特异区；所述特异区编码蛋白酶的酶切识别序列；所述DNA乙依次包括如下元件：启动子乙、融合基因乙、终止序列乙；所述融合基因乙中含有片段Ⅱ；所述片段Ⅱ包括m2个区段，每个区段编码一个所述目的物，每相邻两个区段之间具有一个以上所述特异区；融合基因乙中还含有编码所述蛋白酶的区段；所述编码所述蛋白酶的区段与所述片段Ⅱ之间具有一个以上所述特异区；所述目的物为蛋白或蛋白亚基或蛋白片...

【技术特征摘要】
1.一种同时表达n个目的物的系统，包含DNA甲和DNA乙；所述DNA甲依次包括如下元件：启动子甲、融合基因甲、终止序列甲；所述融合基因甲中含有片段Ⅰ；所述片段Ⅰ包括m1个区段，每个区段编码一个所述目的物，每相邻两个区段之间具有一个以上特异区；所述特异区编码蛋白酶的酶切识别序列；所述DNA乙依次包括如下元件：启动子乙、融合基因乙、终止序列乙；所述融合基因乙中含有片段Ⅱ；所述片段Ⅱ包括m2个区段，每个区段编码一个所述目的物，每相邻两个区段之间具有一个以上所述特异区；融合基因乙中还含有编码所述蛋白酶的区段；所述编码所述蛋白酶的区段与所述片段Ⅱ之间具有一个以上所述特异区；所述目的物为蛋白或蛋白亚基或蛋白片段或多肽或多肽片段；m1为2以上的自然数；m2为2以上的自然数；m1+m2＝n。2.如权利要求1所述的系统，其特征在于：所述融合基因甲中还含有一个编码荧光蛋白甲的区段，所述编码荧光蛋白甲的区段与所述片段Ⅰ之间具有一个以上所述特异区；所述融合基因乙中还含有一个编码荧光蛋白乙的区段，所述编码荧光蛋白乙的区段与所述片段Ⅱ之间具有一个以上所述特异区。3.如权利要求1或2所述的系统，其特征在于：所述融合基因甲依次包括：所述片段Ⅰ、所述编码荧光蛋白甲的区段；所述融合基因乙依次包括：所述编码所述蛋白酶的区段、所述片段Ⅱ、所述编码荧光蛋白乙的区段。4.如权利要求1至3任一所述的系统，其特征在于：所述启动子甲为P10启动子或P6.9启动子；所述启动子乙为P10启动子或P6.9启动子；所述终止序列甲为HSVtkpolyadenylation信号序列或SV40polyadenylation信号序列；所述终止序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：翟宇佳，孙飞，
申请(专利权)人：中国科学院生物物理研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11