基于hemin‑石墨烯复合材料分析检测PARP活性的方法技术
Methods to detect the activity of PARP hemin graphene based composites
The invention discloses a method for detection and analysis of the PARP activity of hemin graphene composite materials based on the steps of the method are as follows: (1) select the activation of DNA (2) H GNs (hemin synthesis of graphene composite materials); (3) the activation of DNA, PARP, nicotinamide adenine dinucleotide (NAD
【技术实现步骤摘要】
基于hemin-石墨烯复合材料分析检测PARP活性的方法
本专利技术属于一种定量检测PARP(聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶)活性的技术，涉及石墨烯复合材料在临床检测的应用，具体涉及石墨烯复合材料定量检测生物酶的应用领域。
技术介绍
PARP，也称聚ADP-核糖聚合酶，是一类存在于绝大多数真核生物中能催化多聚ADP核糖基化的细胞核酶，结构主要包括三个区域：DNA结合域、自身修饰域、催化域。PARP能够结合各种DNA结构和核小体，并且具有NAD+依赖的催化活性，可在目标蛋白上合成聚(ADP-核糖)聚合物。聚(ADP-核糖)聚合物的形成显著改变了受体蛋白的电荷特性，引发了DNA损伤的控制和修补过程。PARP在基因稳定和肿瘤的发生发展、炎症和应激反应、代谢和能量消耗、昼夜节律等方面都起重要的调节作用。而且PARP在恶性肿瘤与正常组织中的表达存在有差异性，且这种差异性有可能在疾病的发生发展中起重要作用。近几年，PARP在DNA损伤修复和维持基因组的稳定性的作用引起世人的关注。在此基础上，运用抑制剂抑制PARP参与介导的肿瘤细胞DNA损伤修复，更是当前研究热点之一。PARP活性...
【技术保护点】
一种基于hemin‑石墨烯复合材料分析检测PARP活性的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)选取激活DNA激活PARP(聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶)；(2)合成H‑GNs(hemin‑石墨烯)复合材料；(3)将激活DNA、PARP、NAD+(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)混合反应，合成了带大量负电荷的PAR(聚ADP‑核糖)聚合物；(4)将所述H‑GNs复合材料与所述PAR聚合物混合反应，加入盐溶液，记录H‑GNs与PAR聚合物产物的团聚变化；(5)利用紫外‑可见光谱仪对步骤(4)获得的产物溶液进行定量检测。
【技术特征摘要】
1.一种基于hemin-石墨烯复合材料分析检测PARP活性的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)选取激活DNA激活PARP(聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶)；(2)合成H-GNs(hemin-石墨烯)复合材料；(3)将激活DNA、PARP、NAD+(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)混合反应，合成了带大量负电荷的PAR(聚ADP-核糖)聚合物；(4)将所述H-GNs复合材料与所述PAR聚合物混合反应，加入盐溶液，记录H-GNs与PAR聚合物产物的团聚变化；(5)利用紫外-可见光谱仪对步骤(4)获得的产物溶液进行定量检测。2.根据权利要求1所述的基于hemin-石墨烯复合材料分析检测PARP活性的方法，其特征在于，步骤(1)中所述激活DNA的序列为：单链DNA1：5’-CCCGTGCGTGCGCGAGTGAGTTGGTGTGTGTGTGTGTGTGT-3’单链DNA2：5’-CAACTCACTCGCGCACGCACGGG-3’形成激活双链DNA的方法为：激活DNA单链在95℃水浴反应3-10分钟后，冷却至室温，形成杂交的双链DNA，所述双链DNA与所述PARP进行反应，以激活PARP的活性。3.根据权利要求1所述的基于hemin-石墨烯复合材料分析检测PARP活性的方法，其特征在于，所述步骤(2)具体如下：称取10mg氧化石墨溶于10-40mL二次水中所述氧化石墨的浓度为0.2-1mg/mL，超声分散2～4h进行机械剥离，2000～4000rpm转速下离心20～30min，除去未剥离的氧化石墨，取上清液在透析袋(MW：8000～12000)中透析一周除去杂质小分子得分散均匀的氧化石墨烯；将上述氧化石墨烯溶液与10-40mL溶于0.1MNaOH溶液的hemin在烧瓶中充分混合，所述hemin的浓度为0.2-1mg/mL；之后缓慢加入150～200μL氨溶液，最后加入20～50μL水合肼，剧烈搅拌混合溶液30～60min，将烧瓶置于60℃水浴中反应3～24h，得到稳定分散的黑色溶液；将上述黑色溶...
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