前蛋白转化酶枯草溶菌素kexin 9型的结合蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术涉及前蛋白转化酶枯草溶菌素kexin 9型的结合蛋白及其应用。本发明专利技术提供了含有独特的互补决定区的特异性结合前蛋白转化酶枯草溶菌素kexin 9型(PCSK9)的结合蛋白，其能与PCSK9特异性结合并有效抑制PCSK9的功能、降低血浆中LDL胆固醇水平，可以应用于治疗与PCSK9功能相关或者是受到PCSK9功能影响的疾病。

Binding protein proprotein convertase subtilisin / Kexin type 9 Kexin and its application

The present invention relates to binding protein proprotein convertase subtilisin / Kexin type 9 Kexin and its application. The present invention provides contains unique specific binding domain of complementarity determining proprotein convertase subtilisin / Kexin type 9 (PCSK9) Kexin binding protein, which can bind to PCSK9 specifically and effectively inhibit the function of PCSK9, the decrease in plasma LDL cholesterol levels, can be applied to treatment with PCSK9 function or by the effects of PCSK9 disease.

【技术实现步骤摘要】
前蛋白转化酶枯草溶菌素kexin9型的结合蛋白及其应用
本专利技术属于免疫学领域，更具体地，本专利技术涉及前蛋白转化酶枯草溶菌素kexin9型(Proproteinconvertasesubtilisinkexintype9，PCSK9)的结合蛋白及其应用。
技术介绍
心血管疾病是导致人类死亡的头号杀手。低密度脂蛋白胆固醇(Low-densitylipoproteincholesterol，LDL-C)已被证实是导致心血管疾病的主要因素之一。LDL-C的这种作用是相对独立且可以有效控制的，在过去20年中，他汀(statins)类降脂药的使用成功地减少了心血管疾病的发病率。但是他汀类药物治疗的方法却不总是有效的，还存在着一种另外的降血脂疗法的需求。一部分病人，尤其是家族性高胆固醇血症(familialhypercholesterolaemiaFH)患者，往往对于他汀类的药物很不敏感。即使使用了最高剂量的他汀类药物，这些患者也很难达到一个较低的LDL-C水平。此外，他汀类药物还存在着一些诸如引起肌痛及横纹肌溶解等副作用，导致一些病人不能使用或者只能很小剂量使用他汀药物来控制血脂水平。前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶kexin9型(PCSK9)抑制剂正是一种这样的全新药物类型，提供了一个全新的控制血液中LDL-C浓度的选择。PCSK9是一种丝氨酸蛋白酶，参与调解低密度脂蛋白受体(Low-densitylipoproteinreceptor，LDLR)的水平。体外实验证实，在HepG2细胞中加入PCSK9之后，细胞表面的LDLR水平降低。小鼠实验显示，PCSK9蛋白水平的提高能降低肝脏中LDLR的蛋白水平，同时，相对于正常小鼠，在PCSK9敲除小鼠中LDLR水平有所提高。业已显示PCSK9与LDLR直接结合，并与LDLR同时被吞噬，在整个内吞途径中PCSK9与LDLR共发生免疫荧光。目前没有PCSK9降解胞外LDLR的直接证据，其降低胞外LDLR蛋白水平的机制尚不明确。研究已证实PCSK9在调控LDL产生中起作用。PCSK9的表达或上调与增加的LDL胆固醇的血浆水平有关，PCSK9表达的抑制或缺乏与LDL胆固醇血浆水平低有关。因此，制备抑制或拮抗PCSK9活性和PCSK9在各种治疗状况下所发挥的相应作用的、基于治疗的PCSK9拮抗剂尤其是特异性结合PCSK9的单克隆抗体非常重要。目前在研的PCSK9抑制剂大概包括小干扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)、反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotides，ASOs)、单克隆抗体以及一些应用新技术产生的特异性结合融合蛋白，如adnectin技术产生的融合蛋白。目前正在研究的PCSK9抑制剂主要是siRNA类药物RG7652(AlnylamPharmaceuticals/TheMedicinesCompany)，Adnectin技术融合蛋白BMS-962476(BMS)，ASO类药物ALN-PCS02(IderaPharmaceuticals)，抗体类药物如Bococizumab(Pfizer/Rinat)、LGT-209(Novartis)等。但是，动物试验或临床研究中发现，一些PCSK9单克隆抗体类抑制剂，还存在着特异性、亲和力不够理想或存在副作用的问题，因此，本领域需要进一步优化及制备新的抗PCSK9抗体。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供前蛋白转化酶枯草溶菌素kexin9型(PCSK9)的结合蛋白及其应用。在本专利技术的第一方面，提供特异性结合PCSK9的结合蛋白，该结合蛋白具有轻链可变区和重链可变区，且，其重链可变区的CDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:7或SEQIDNO:13所示的氨基酸序列；其重链可变区的CDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示；其重链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:9或SEQIDNO:14所示的氨基酸序列；其轻链可变区的CDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:10所示；其轻链可变区的CDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:11所示；其轻链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:12所示。在本专利技术的一个优选例中，所述的特异性结合PCSK9的结合蛋白选自：(a)，其重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9所示；其轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12所示；或(b)，其重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO:13、SEQIDNO:8、SEQIDNO:14所示；其轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12所示。在另一优选例中，所述的特异性结合PCSK9的结合蛋白，其特征在于，其重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:2和SEQIDNO:4所示；或其重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:6和SEQIDNO:8所示。在另一优选例中，所述的结合蛋白是Fab、F(ab’)、F(ab’)2、Fv、dAb、Fd、互补决定区(CDR)片段、单链抗体(scFv)、二价单链抗体、单链噬菌体抗体、双特异双链抗体、三链抗体、四链抗体。在另一优选例中，所述的结合蛋白是单克隆抗体。在另一优选例中，所述的结合蛋白的重链可变区和轻链可变区分别具有SEQIDNO:2和SEQIDNO:4所示的氨基酸序列，或分别具有SEQIDNO:6和SEQIDNO:8所示的氨基酸序列，其重链恒定区选择下组中重链类型之一的恒定区：IgGl、IgG2a、IgG2b和IgG3，和其轻链恒定区选择下组轻链类型的恒定区之一：κ链和λ链；在本专利技术的另一方面，提供编码所述的特异性结合PCSK9的结合蛋白的核酸。在本专利技术的另一方面，提供一种表达载体，其包含所述的核酸。在本专利技术的另一方面，提供一种宿主细胞，其包含所述的表达载体或基因组中整合有所述的核酸。在本专利技术的另一方面，提供所述的特异性结合PCSK9的结合蛋白在制备用于诊断、治疗和/或预防PCSK9表达或活性失调相关疾病的药物中的用途。在一个优选例中，所述的PCSK9表达或活性失调相关疾病包括但不限于：高血清胆固醇水平相关的病症；较佳地，包括：高胆固醇血症，冠心病，代谢综合征，急性冠状动脉综合症。在本专利技术的另一方面，提供一种药物组合物，所述药物组合物含有：有效量的所述的特异性结合PCSK9的结合蛋白；和药学上可接受的载体。在本专利技术的另一方面，提供一种用于治疗和/或预防PCSK9表达或活性失调相关疾病的药盒，该药盒中包括：所述的特异性结合PCSK9的结合蛋白；或所述的药物组合物。在本专利技术的另一方面，提供一种免疫辍合物，所述的免疫辍合物包括：所述的特异性结合PCSK9的结合蛋白；以及可检测标记物；较佳地，所述可检测标记物包括：荧光标记物、显色标记物。在本专利技术的另一方面，提供一种用于检测PCSK9水平的检测试剂盒，该检测试剂盒中包括：所述的特异性结合PCSK9的结合蛋白；或所述的免疫辍合物。本专利技术的其它方面由于本文的公本文档来自技高网...

【技术保护点】
特异性结合PCSK9的结合蛋白，其特征在于，该结合蛋白具有轻链可变区和重链可变区，且，其重链可变区的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；其重链可变区的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；其重链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列；其轻链可变区的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示；其轻链可变区的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示；其轻链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示。

【技术特征摘要】
1.特异性结合PCSK9的结合蛋白，其特征在于，该结合蛋白具有轻链可变区和重链可变区，且，其重链可变区的CDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:7或SEQIDNO:13所示的氨基酸序列；其重链可变区的CDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示；其重链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:9或SEQIDNO:14所示的氨基酸序列；其轻链可变区的CDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:10所示；其轻链可变区的CDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:11所示；其轻链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:12所示。2.如权利要求1所述的特异性结合PCSK9的结合蛋白，其特征在于，其选自：(a)，其重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9所示；其轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12所示；或(b)，其重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO:13、SEQIDNO:8、SEQIDNO:14所示；其轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12所示。3.如权利要求1或2所述的特异性结合PCSK9的结合蛋白，其特征在于，其重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:2和SEQIDNO:4所示...

【专利技术属性】
技术研发人员：王少雄，
申请(专利权)人：迈博斯香港科技有限公司，
类型：发明
国别省市：中国香港,81