The invention discloses a method for preparing a stem cell preparation for diabetic islet function, pancreatic stem cells and bone marrow mesenchymal stem cells were cultured to induce bone marrow mesenchymal stem cells into pancreatic stem cells differentiation. Then, directed differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into the body can effectively repair the islet function of type I diabetes and type II diabetes in the advanced stage. Directional differentiation of the bone marrow mesenchymal stem cells with high proliferative potential, easy to obtain, less ethical restrictions and low immunogenicity etc., and induced, targeting clear, targeted repair of islet function. The invention uses pure natural induced differentiation, without any additives, drugs and factors, has high safety; the induced cells are seed cells, which are stem cells and have long-term stability.
【技术实现步骤摘要】
一种修复糖尿病胰岛功能的干细胞制剂的制备方法
本专利技术涉及干细胞再生医学
,具体涉及一种修复糖尿病胰岛功能的干细胞制剂的制备方法。
技术介绍
糖尿病(diabetesmellitus,DM)是全球范围内的一种流行病,影响着全球将近3.82亿人(2013年统计数据),并预计患病人数在2035年达到5.92亿人。糖尿病会引发一系列严重的并发症,特别是眼、心脏、血管及神经的慢性损害和功能障碍,因此对于糖尿病的治疗研究是一个全球性课题。糖尿病的最重要原因是胰岛中分泌胰岛素的β细胞缺失(I型糖尿病)或者体内胰岛素不能有效发挥作用(II型糖尿病)所致。由于传统的口服降糖药物和外源给予胰岛素注射治疗,不能从根本上治愈该疾病,也不能完全阻止其并发症的发生和进展,因此补充胰岛β细胞数量是一种潜在的治愈I型糖尿病方法。II型糖尿病晚期也存在严重的胰岛素分泌功能缺陷,故补充足量的胰岛β细胞亦是恢复正常的血糖水平,治愈晚期II型糖尿病之必需。胰岛移植可补充患者体内胰岛β细胞数量的不足,重建胰岛β细胞总量的稳态平衡,既能有效控制血糖,又可能防止或逆转糖尿病并发症,故被认为是治愈糖尿病的希望所在。然而由于胰岛β细胞获得困难,来源稀少,并且难以体外增殖,因此直接移植β细胞往往不能达到良好的治疗效果。因此目前的研究焦点是寻找一种可以替代生成β细胞的方法,而采用最多的就是干细胞技术。利用干细胞技术治疗糖尿病的主要理论依据是干细胞具有强大的增殖能力和向胰岛素分泌细胞分化的潜能,从而补充胰岛β细胞数量,重建内源性胰岛素分泌功能。干细胞技术治疗糖尿病目前有两种思路:一是在实验室条件下将干 ...
【技术保护点】
一种修复糖尿病胰岛功能的干细胞制剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、骨髓间充质干细胞的制备:取SD大鼠股骨,PBS冲洗;剪除股骨近端骨骺,用注射器吸取FBS‑MSCM培养基,从远端骨骺洞隙进针,反复冲洗骨髓腔,直到股骨变为苍白色;轻柔吹打骨髓液,PBS洗涤后,接种培养瓶中培养;24h后全量换液,换液时用PBS冲洗两次,去除杂细胞,细胞密度达到80%时,进行第一次传代;收集第三代的骨髓间充质干细胞备用;S2、取SD乳鼠胰芽,加入胶原酶V消化;将细胞悬液用5%FBS‑1640培养基培养;收集3、4次差速贴壁后的细胞,培养;2‑3d后细胞呈现鹅卵石样,继续培养1‑2d,细胞密度基本达到80%,即可传代;收集二代的胰腺干细胞备用;S3、将步骤S1所得的骨髓间充质干细胞以1×10
【技术特征摘要】
1.一种修复糖尿病胰岛功能的干细胞制剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、骨髓间充质干细胞的制备:取SD大鼠股骨,PBS冲洗;剪除股骨近端骨骺,用注射器吸取FBS-MSCM培养基,从远端骨骺洞隙进针,反复冲洗骨髓腔,直到股骨变为苍白色;轻柔吹打骨髓液,PBS洗涤后,接种培养瓶中培养;24h后全量换液,换液时用PBS冲洗两次,去除杂细胞,细胞密度达到80%时,进行第一次传代;收集第三代的骨髓间充质干细胞备用;S2、取SD乳鼠胰芽,加入胶原酶V消化;将细胞悬液用5%FBS-1640培养基培养;收集3、4次差速贴壁后的细胞,培养;2-3d后细胞呈现鹅卵石样,继续培养1-2d,细...
【专利技术属性】
技术研发人员:栗彦宁,齐锦生,张菁,
申请(专利权)人:河北医科大学,
类型:发明
国别省市:河北,13
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