一种干细胞制剂及其制备方法和应用技术

本申请属于干细胞技术领域，具体涉及一种干细胞制剂及其制备方法和应用。本发明专利技术所提供的一种干细胞制剂，包括：牙髓间充质干细胞和人血白蛋白，各组分配伍合理、协同增效，促进牙周炎的修复治疗，改善患者的生活质量。本发明专利技术采用牙髓间充质干细胞作为种子细胞，采集简单、容易获得，而且免疫原性低，无伦理问题，对于牙周炎患者具有重要意义。本发明专利技术所提供的制备方法，步骤操作简单，工艺优化，可实现规模化生产。

A stem cell preparation and its preparation method and Application

The present invention belongs to the field of stem cell technology, in particular relates to a stem cell preparation, its preparation method and application. A stem cell preparation provided by the invention comprises: dental pulp mesenchymal stem cells and Human Albumin, each distribution is reasonable, Wu synergies, promote repair in the treatment of periodontitis, improve the quality of life of patients. The dental pulp mesenchymal stem cells are used as seed cells, the collection is simple and easy to obtain, and the immunogenicity is low, and there is no ethical problem, which is of great significance for periodontitis patients. The preparation method provided by the invention has the advantages of simple operation, optimized process and large scale production.

【技术实现步骤摘要】
一种干细胞制剂及其制备方法和应用
本专利技术属于干细胞
，具体涉及一种干细胞制剂及其制备方法和应用。
技术介绍
牙周炎是侵犯牙龈和牙周组织的慢性炎症，是一种破坏性疾病，其主要特征为牙周袋的形成、袋壁的炎症、牙槽骨吸收和牙齿逐渐松动，是导致成年人牙齿丧失的主要原因。本病多因为菌斑、牙石、食物嵌塞、不良修复体和咬创伤等引起，症状多表现为牙龈发炎肿胀，同时使菌斑堆积加重，并由龈上向龈下扩延。由于龈下微生态环境的特点，龈下菌斑中滋生着大量毒力较大的牙周致病菌，如牙龈类杆菌、中间类杆菌、螺旋体等，使牙龈的炎症加重并扩延，导致牙周袋形成和牙槽骨吸收，造成牙周炎。牙周炎已被医学界定论为继癌症、心脑血管疾病之后，威胁人类身体健康的第三大杀手，也是口腔健康的“头号杀手”。牙周炎出现的一些前期症状，也成为口腔“亚健康”恶化的主要特征。治疗牙周炎的主要途径在于消除炎症，促进被破坏的牙周组织的再生，恢复牙齿的正常功能。临床常采用的牙周炎治疗方法包括：牙周基础治疗(洁治、刮治、根面平整)、牙周翻瓣术及牙周组织再生术。然而，上述方法均一定程度上给患者带来不便和痛苦，而且无法根治牙周炎，容易复发或继续加重。因此，临床上迫切需要找到创伤小、易接受、疗效好的新的治疗方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种干细胞制剂及其制备方法和应用，用于辅助治疗牙周炎，减轻手术痛苦，改善患者的生活质量。本专利技术的具体技术方案如下：本专利技术提供了一种干细胞制剂，包含：牙髓间充质干细胞和人血白蛋白。优选的，所述牙髓间充质干细胞的细胞密度为4×106个/mL～7×106个/mL。优选的，所述人血白蛋白的体积百分比浓度为5％～20％，更优选为5％～15％，最优选为10％～15％。优选的，所述牙髓间充质干细胞为第四代至第六代牙髓间充质干细胞。优选的，所述干细胞制剂为注射剂。优选的，所述干细胞制剂的注射剂量为10mL/次。本专利技术还提供了一种上述干细胞制剂的制备方法，将牙髓间充质干细胞和人血白蛋白混合均匀，得到所述干细胞制剂。本专利技术还提供了上述干细胞制剂或上述制备方法得到的干细胞制剂在制备治疗牙周炎的药物中的应用。本专利技术所提供的一种干细胞制剂，包括：牙髓间充质干细胞和人血白蛋白，各组分配伍合理、协同增效，促进牙周炎的修复治疗，改善患者的生活质量。本专利技术采用牙髓间充质干细胞作为种子细胞，采集简单、容易获得，而且免疫原性低，无伦理问题，对于牙周炎患者具有重要意义。本专利技术所提供的制备方法，步骤操作简单，工艺优化，可实现规模化生产。具体实施方式本专利技术提供了一种干细胞制剂及其制备方法和应用，用于辅助治疗牙周炎，减轻手术痛苦，改善患者的生活质量。下面将结合本专利技术具体实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例只是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。本领域技术人员应当理解，对本专利技术的具体实施例进行修改或者对部分技术特征进行同等替换，而不脱离本专利技术技术方案的精神，均应涵盖在本专利技术保护的范围中。实施例1牙髓间充质干细胞的分离培养采集牙齿，在清洗后把牙齿置于12孔板中，每颗牙齿只放在一个孔，用3mL酒精清洗两次，去除牙周膜及牙垢，然后用3mL含1％双抗的PBS清洗2次，再用纱布包着牙齿，用老虎钳把牙齿钳开，用尖捏把牙腔中的牙髓组织夹出来，放于EP管中，取完后再用小剪刀把组织块剪碎。往规格为15mL的离心管中加入0.9mL体积百分比浓度为0.3-0.5％的I型胶原酶和0.6mL体积百分比浓度为1％的Dispase分散酶，混匀后，把牙髓组织转移到此离心管中，转移至恒温震荡仪中以37℃、100～150rpm消化30～50min。然后加入2～4mLDMEM/F12完全培养基终止消化，1500rpm离心5min，去上清，用9mLDMEM/F12重悬细胞沉淀，接种到6孔板，每孔接3mL，再在每孔加30μL双抗和EGF，放入培养箱中培养，每隔2天换一次培养基，等到细胞汇合度达到50％以上时进行传代培养。在传代培养时隔天换培养基，等汇合度达到90％以上再进行下一代传代培养处理，然后分别收集第三代至第六代牙髓间充质干细胞。实施例2取第三代牙髓干细胞用生理盐水清洗两遍，用0.25％胰蛋白酶消化下来，用DMEM/F12完全培养基终止消化，转移至50mL离心管中1500rpm离心5min；用生理盐水重悬细胞，1500rpm离心5min，去上清，如此重复两次，然后加入生理盐水和人血白蛋白，混匀，用70μm的滤网过滤，再用注射器收集滤液，做成10mL注射制剂。其中，该注射制剂中牙髓间充质干细胞的细胞密度为4×106个/mL，人血白蛋白的体积百分比浓度为5％。实施例3取第四代牙髓干细胞用生理盐水清洗两遍，用0.25％胰蛋白酶消化下来，用DMEM/F12完全培养基终止消化，转移至50mL离心管中1500rpm离心5min；用生理盐水重悬细胞，1500rpm离心5min，去上清，如此重复两次，然后加入生理盐水和人血白蛋白，混匀，用70μm的滤网过滤，再用注射器收集滤液，做成10mL注射制剂。其中，该注射制剂中牙髓间充质干细胞的细胞密度为5×106个/mL，人血白蛋白的体积百分比浓度为10％。实施例4取第五代牙髓干细胞用生理盐水清洗两遍，用0.25％胰蛋白酶消化下来，用DMEM/F12完全培养基终止消化，转移至50mL离心管中1500rpm离心5min；用生理盐水重悬细胞，1500rpm离心5min，去上清，如此重复两次，然后加入生理盐水和人血白蛋白，混匀，用70μm的滤网过滤，再用注射器收集滤液，做成10mL注射制剂。其中，该注射制剂中牙髓间充质干细胞的细胞密度为6×106个/mL，人血白蛋白的体积百分比浓度为15％。实施例5随机选取50例牙周炎患者，将患者随机分为2组，每组25人，其中一组设为对照组，另外3组设为实验组。对照组采用米诺霉素注射治疗，3组实验组分别采用实施例2至实施例4所制备的干细胞制剂进行注射治疗，分别注射到患者牙龈处，每隔两周注射一次，每次注射10mL，然后在第3周、第6周和第9周分别观察一次治疗效果。表1为第3周的观察结果，表2为第6周的观察结果，表3为第9周的观察结果，如表1-3的结果所示，对照组和3组实验组均呈现不同程度的好转，其中实验组的痊愈人数和显效人数均高于对照组，说明本专利技术所提供的干细胞制剂能有效改善牙周炎。以下为评估指标：无效：牙龈病情无改善还会经常性疼痛；有效：牙龈病情有改善偶尔还会疼痛；有效不复发：牙龈病情有改善不会疼痛。表1无效有效有效不复发对照组4192实施例20187实施例30169实施例40196表2表3无效有效有效不复发对照组01510实施例20421实施例30124实施例40520本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种干细胞制剂，其特征在于，包含：牙髓间充质干细胞和人血白蛋白。

【技术特征摘要】
1.一种干细胞制剂，其特征在于，包含：牙髓间充质干细胞和人血白蛋白。2.根据权利要求1所述的干细胞制剂，其特征在于，所述牙髓间充质干细胞的细胞密度为4×106个/mL～7×106个/mL。3.根据权利要求1所述的干细胞制剂，其特征在于，所述人血白蛋白的体积百分比浓度为5％～20％。4.根据权利要求1所述的干细胞制剂，其特征在于，所述牙髓间充质干细胞为第三代至第六代牙髓间充质干细胞。5.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛啸虎，陈海佳，王一飞，陈育广，王小燕，
申请(专利权)人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44