增强的蛋白质表达制造技术

本发明专利技术总体上涉及具有遗传改变的细菌细胞，以及制造和使用此类细胞的方法，该遗传改变导致感兴趣的蛋白质的增加的表达。本发明专利技术的方面包括经改变的革兰氏阳性微生物，该经改变的革兰氏阳性微生物具有降低sin操纵子中基因表达的一个或多个遗传改变，从而导致一种或多种感兴趣的蛋白质的增强的表达。

Enhanced protein expression

The present invention generally relates to bacterial cells with genetic alterations, as well as methods of making and using such cells, which alter the expression of increased proteins of interest. Aspects of the invention include gram positive microorganisms after the change, the change of the gram positive microorganisms with reduced sin operon gene expression in one or more genetic changes, resulting in one or more of the protein of interest in enhanced expression.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】增强的蛋白质表达相关申请的交叉引用本申请要求在35U.S.C.§119下于2014年12月16日提交的美国临时专利申请号62/092,461的优先权，其整体通过引用并入本文。专利
本专利技术总体涉及分子生物学、细胞生物学、微生物学、遗传学和蛋白质生产领域。更具体地，在本文披露的各种实施例中，本专利技术涉及具有遗传改变的革兰氏阳性细菌细胞，以及制造和使用此类细胞的方法，所述遗传改变导致感兴趣的蛋白质的增加的表达。序列表的引用命名为NB40772-WO-PCT_SequenceListing.txt的文本文件序列表的电子提交内容创建于2015年10月29日并且大小为11KB，其通过引用并入本文。本专利技术的背景遗传工程已经允许改进在食品发酵中用作工业生物反应器和细胞工厂的微生物。包括多个芽孢杆菌物种的革兰氏阳性生物体被用于产生大量有用的蛋白质和代谢产物(参见，例如，Zukowski,“Productionofcommerciallyvaluableproducts,”In:DoiandMcGlouglin(eds.)BiologyofBacilli:ApplicationstoInd本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于在革兰氏阳性细菌细胞中增加感兴趣的蛋白质(POI)的表达的方法，该方法包括：(a)获得生产感兴趣的蛋白质的经改变的革兰氏阳性细菌细胞，其中该经改变的革兰氏阳性细菌细胞包含降低sin操纵子中一个或多个基因的表达的至少一个遗传改变；并且(b)在表达该POI的条件下培养该经改变的革兰氏阳性细菌细胞，其中该POI的增加的量是相对于未经改变的革兰氏阳性细菌细胞中相同POI的表达而言的。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.16 US 62/092,4611.一种用于在革兰氏阳性细菌细胞中增加感兴趣的蛋白质(POI)的表达的方法，该方法包括：(a)获得生产感兴趣的蛋白质的经改变的革兰氏阳性细菌细胞，其中该经改变的革兰氏阳性细菌细胞包含降低sin操纵子中一个或多个基因的表达的至少一个遗传改变；并且(b)在表达该POI的条件下培养该经改变的革兰氏阳性细菌细胞，其中该POI的增加的量是相对于未经改变的革兰氏阳性细菌细胞中相同POI的表达而言的。2.如权利要求1所述的方法，其中该经改变的革兰氏阳性细菌细胞是芽孢杆菌属的成员。3.如权利要求2所述的方法，其中该芽孢杆菌属细胞选自下组，该组由以下各项组成：枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)、迟缓芽孢杆菌(B.lentus)、短芽孢杆菌(B.brevis)、嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus)、嗜碱芽孢杆菌(B.alkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、克劳氏芽孢杆菌(B.clausii)、索诺拉沙漠芽孢杆菌(B.sonorensis)、耐盐芽孢杆菌(B.halodurans)、短小芽孢杆菌(B.pumilus)、灿烂芽孢杆菌(B.lautus)、饲料芽孢杆菌(B.pabuli)、蜡样芽孢杆菌(B.cereus)、黏琼脂芽孢杆菌(B.agaradhaerens)、秋叶氏芽孢杆菌(Bakibai)、库拉奇芽孢杆菌(B.clarkii)、假坚强芽孢杆菌(B.pseudofirmus)、列城芽孢杆菌(B.lehensis)、巨大芽孢杆菌(B.megaterium)、凝结芽孢杆菌(B.coagulans)、环状芽孢杆菌(B.circulans)、吉氏芽孢杆菌(B.gibsonii)、和苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)。4.如权利要求3所述的方法，其中该芽孢杆菌属细胞是枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌细胞。5.如权利要求1所述的方法，其中该经改变的细菌细胞包含降低sin操纵子的sinR基因表达的遗传改变。6.如权利要求1所述的方法，其中该遗传改变被进一步定义为来自sin操纵子的mRNA转录物水平的降低。7.如权利要求6所述的方法，其中该水平降低的mRNA转录物是sinRmRNA转录物。8.如权利要求7所述的方法，其中相对于未经改变的细菌对照细胞，该sinRmRNA转录物水平的降低为至少10％。9.如权利要求5所述的方法，其中该sinR基因的核苷酸序列与SEQIDNO:1具有至少60％的同一性。10.如权利要求5所述的方法，其中该遗传改变是该sinR基因中的突变。11.如权利要求10所述的方法，其中该sinR基因中的突变是沉默突变。12.如权利要求11所述的方法，其中该沉默突变在对应于SEQIDNO:1的核苷酸330的核苷酸位置处发生。13.如权利要求12所述的方法，其中该沉默突变是在对应于SEQIDNO:1的核苷酸330的核苷酸位置处的G到A的突变。14.如权利要求11所述的方法，其中该沉默突变在对应于SEQIDNO:1的核苷酸729的核苷酸位置处发生。15.如权利要求14所述的方法，其中该沉默突变是在对应于SEQIDNO:1的核苷酸729的核苷酸位置处的C到T的突变。16.如权利要求10所述的方法，其中该突变是该sinR基因的全部或部分缺失。17.如权利要求1所述的方法，其中该POI由该经改变的细菌细胞的外源基因或该经改变的细菌细胞的内源基因编码。18.如权利要求1所述的方法，其中该POI是一种酶。19.如权利要求18所述的方法，其中该酶选自下组，该组由以下各项组成：乙酰酯酶、氨肽酶、淀粉酶、阿拉伯糖酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维素酶、几丁质酶、凝乳酶、角质酶、脱氧核糖核酸酶、差向异构酶、酯酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、α-葡聚糖酶、葡聚糖裂解酶、内切-β-葡聚糖酶、葡糖淀粉酶、葡萄糖氧化酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、葡萄糖醛酸酶、半纤维素酶、己糖氧化酶、水解酶、转化酶、异构酶、漆酶、脂肪酶、裂解酶、甘露糖苷酶、氧化酶、氧化还原酶、果胶酸裂解酶、果胶乙酰酯酶、果胶解聚酶、果胶甲酯酶、果胶分解酶、过水解酶、多元醇氧化酶、过氧化物酶、酚氧化酶、植酸酶、聚半乳糖醛酸酶、蛋白酶、鼠李糖-半乳糖醛酸酶、核糖核酸酶、转移酶、转运蛋白、转谷氨酰胺酶、木聚糖酶、己糖氧化酶、及其组合。20.如权利要求1所述的方法，进一步包括回收该POI。21.如权利要求1所述的方法，其中相对于未经改变的革兰氏阳性对照细胞，所表达的POI的增加的量为至少10％。22.一种经改变的革兰氏阳性细菌细胞，该经改变的革兰氏阳性细菌细胞相对于未经改变的革兰氏阳性细菌对照细胞中感兴趣的蛋白质(POI)的表达，表达增加的量的相同POI，其中该经改变的细菌细胞包含降低sin操纵子中一个或多个基因的表达的至少一个遗传改变。...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·邦焦尔尼，R·冈萨雷斯卡吉埃特，C·恩米菲奥雷斯，B·F·施密特，A·范齐蒙耐德，C·朱，
申请(专利权)人：丹尼斯科美国公司，
类型：发明
国别省市：美国,US