The invention discloses a method for preparing multi enzyme system of glutathione, which comprises the following steps: the reaction vessel containing acetone acid and phosphoric acid substances in oxygen or air, adding pyruvate oxidase and catalase; the after reaction to the reaction vessel through nitrogen or inert gas. The use of GshF synthesis of glutathione; regeneration by ATP acetate kinase in situ; separation products of GSH and ATP in the reaction solution, ADP. Method for multi enzyme system of the invention is the preparation of glutathione, the use of POX and ACK, GshF synthesis of glutathione by in situ regeneration of ATP product at the same time, consumption and regeneration of ATP at the same time, the high energy phosphate cycle is defined between ATP and ADP, and there is a large number in the form of ATP, without further degradation into AMP, so that the ATP regeneration is more economical; only need very low concentration of ATP in reactants, low cost and no inhibition of enzyme activity.
【技术实现步骤摘要】
多酶体系制备还原型谷胱甘肽的方法
本专利技术涉及还原型谷胱甘肽的制备
,特别地,涉及一种多酶体系制备还原型谷胱甘肽的方法。
技术介绍
谷胱甘肽(简称GSH)是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合,含有巯基的三肽,分为还原型和氧化型两种形式,其中还原型谷胱甘肽具有抗氧化作用和整合解毒作用。谷胱甘肽还能参与生物转化作用,从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质,排泄出体外,广泛应用于食品、药品领域。目前谷胱甘肽的主要制备方法有溶剂萃取法、化学合成法、生物发酵法和酶法。采用溶剂萃取法从动植物组织中提取谷胱甘肽时,由于谷胱甘肽提取率低、成本高、有机溶剂污染严重、纯度不高,现已很少使用。化学合成法制备谷胱甘肽,由于活性产物不易分离,需要化学拆分,产品纯度也不高,难以推广。酵母发酵法制备谷胱甘肽,工艺较成熟,发表的专利也较多,如CN200880019101.6、CN200810233834.1、CN200810039695.9,但上述制备方法中产物浓度和生产周期会受到酵母菌本体的先天限制,而且下游工艺的处理很复杂。由于反应速度快、合成浓度高、产物纯度高等天然优势,酶法合成谷胱甘 ...
【技术保护点】
一种多酶体系制备还原型谷胱甘肽的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)盛有丙酮酸类物质及磷酸类物质的反应容器中通入氧气或空气,加入丙酮酸氧化酶和过氧化氢酶;(2)所述步骤(1)反应结束后,向所述反应容器中通入氮气或惰性气体,利用GshF合成还原型谷胱甘肽;利用乙酸激酶原位再生ATP;(3)分离产物GSH和反应液中的ATP、ADP。
【技术特征摘要】
1.一种多酶体系制备还原型谷胱甘肽的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)盛有丙酮酸类物质及磷酸类物质的反应容器中通入氧气或空气,加入丙酮酸氧化酶和过氧化氢酶;(2)所述步骤(1)反应结束后,向所述反应容器中通入氮气或惰性气体,利用GshF合成还原型谷胱甘肽;利用乙酸激酶原位再生ATP;(3)分离产物GSH和反应液中的ATP、ADP。2.根据权利要求1所述的多酶体系制备还原型谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述丙酮酸氧化酶的来源为气球菌属;所述GshF的来源为链球菌属;所述乙酸激酶的来源为线粒体或嗜热芽胞杆菌。3.根据权利要求1所述的多酶体系制备还原型谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述步骤(3)包括:(a)向所述反应容器中加入高分子聚合物;(b)利用酶膜反应器截留反应后的酶、ATP和ADP,与产物GSH分离。4.根据权利要求3所述的多酶体系制备还原型谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述步骤(3)还包括所述步骤(b)中分离的反应后的酶、ATP和ADP的循环利用,即将分离的反应后的酶、ATP和ADP添加至所述反应容器中参与生成谷胱甘肽及再生ATP的连续反应;和/或所述酶膜反应器的截留分子量为1~10kDa。5.根据权利要求4所述的多酶体系制备还原型谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述循环利用的次数为1~30次。6.根据权利要求3所述的多酶体系制备还原型谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述高分子聚合物为阳离子高分子聚合物,所述阳离子高分子聚合物为聚合伯胺型阳离子、聚合仲胺型阳离子、聚合叔胺型阳离子、聚合季胺型阳离子中的一种或几种;和/或所述高分子聚合物与所述反应底物中ATP的摩尔比为0.8~50∶1。7.根据权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员:吴峰,曹竟,曾红宇,许岗,
申请(专利权)人:湖南福来格生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:湖南,43
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