一种小麦胚芽中还原性谷胱甘肽含量的检测方法技术

本发明专利技术提供一种小麦胚芽中还原性谷胱甘肽含量的检测方法。本发明专利技术使用带紫外检测器的高效液相色谱采用标准曲线法获得小麦胚芽中还原性谷胱甘肽含量的含量，从而获得较高的测试精度，可适于食品及保健食品中还原性谷胱甘肽含量的检测。

Method for detecting reduced glutathione content in wheat germ

The present invention provides a method for detecting reduced glutathione content in wheat germ. Get the content of reduced glutathione content in wheat germ of the invention using high performance liquid chromatography with UV detector using standard curve method, so as to obtain high precision, can be used for detection of glutathione content in foods and health foods.

【技术实现步骤摘要】
一种小麦胚芽中还原性谷胱甘肽含量的检测方法
本专利技术涉及谷胱甘肽含量检测的
，特别是指一种小麦胚芽中还原性谷胱甘肽含量的检测方法。
技术介绍
目前，对于还原型谷胱甘肽的检测方法分光光度法、有酶法、荧光法、电化学测定方法、红外检测分析法等。较为常用的方法就是分光光度法，但分光光度法检测出来的是谷胱甘肽的总量，检测的并非是还原性谷胱甘肽含量，虽然很多人在改进这一技术并诞生了不少相关专利，但这一问题不能根本性解决。其他较常用的方法是基于Ellman试剂(5,5’-二硫代双(2-硝基苯甲酸)，DTNB)与巯基反应的DTNB检测方法，但是该方法由于测定误差使精确度受到很大限制，基于该方法建立的谷胱甘肽还原酶循环法需要使用价格昂贵的辅酶，应用也有所限制。荧光法的反应速度快、灵敏度高，但容易受干扰亦有其局限；电化学测定方法也有电极制作成本较高等限制。现有技术中，虽然已建立了多种测定还原型谷胱甘肽的方法，但是检测出来的基本为谷胱甘肽含量的总量，检测不准确或者精度较低。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种小麦胚芽中还原性谷胱甘肽含量的检测方法，该检测方法精度较高。一种小麦胚芽中还原性谷胱甘肽含量的检测方法，使用带紫外检测器的高效液相色谱采用标准曲线法获得小麦胚芽中还原性谷胱甘肽含量的含量。上述高效液相色谱(HPLC)通常包括储液器、输液泵、混合器、进样装置、分离色谱柱、检测装置五构件。上述带有紫外检测器的高效液相色谱是指检测装置的种类为紫外检测器(UV检测器或简称为UVD，以及应用紫外检测原理的二极管阵列检测器或简称为DAD)的HPLC。紫外检测器基于溶质分子吸收紫外光的原理设计的检测器，其工作原理是Lambert-Beer定律，即当一束单色光透过流动池时，若流动相不吸收光，则吸收度A与吸光组分的浓度C和流动池的光径长度L成正比相比于其它类型的检测装置，UV检测器具有灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，波长可选，对流动相的流速和温度变化不敏感，适用于梯度洗脱，对强吸收物质检测极限可达10-9g/ml以下，检测后不破坏样品。上述标准曲线法为本领域技术人员所熟知的技术。标准曲线法标准曲线法也称为外标法或直接比较法，首先用欲测组分的标准样品绘制标准工作曲线。具体作法是：用标准样品配制成不同浓度的标准系列，在与欲测组分相同的色谱条件下，等体积准确量进样，测量各峰的峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准工作曲线，此标准工作曲线应是通过原点的直线。若标准工作曲线不通过原点，说明测定方法存在系统误差。标准工作曲线的斜率即为绝对校正因子。在测定样品中的组分含量时，要用与绘制标准工作曲线完全相同的色谱条件作出色谱图，测量色谱峰的峰面积或峰高，然后根据峰面积和峰高在标准工作曲线上直接查出进入色谱柱中样品组分的浓度，也可通过式(2-3-19)计算这一浓度。pi/％＝fiAi(hi)(2-3-19)式中Ai(hi)——i组分峰的峰面积(峰高)；fi——i组分标准工作曲线的斜率。知道进入色谱柱中样品组分的浓度后，就可根据样品处理条件及进样量来计算原样品中该组分的含量了。当欲测组分含量变化不大，并已知这一组分的大概含量时，也可以不必绘制标准工作曲线，而用单点校正法，即直接比较法定量。先配制一个和待测组分含量相近的已知浓度的标准溶液，在相同的色谱条件下，分别将待测样品溶液和标准样品溶液等体积进样，作出色谱图，测量待测组分和标准样品的峰面积或峰高，然后由式(2-3-20)直接计算样品溶液中待测组分的含量：式中ws——标准样品溶液质量分数，％：wi——样品溶液中待测组分质量分数，％：As(hs)——标准样品的峰面积(峰高)：Ai(hi)——样品中i组分的峰面积(峰高)。单点校正法实际上是利用原点作为标准工作曲线上的另一个点。因此，当方法存在系统误差时(即标准工作曲线不通过原点)，单点校正法的误差较大。标准曲线法的优点是：绘制好标准工作曲线后测定工作就很简单了，计算时可直接从标准工作曲线上读出含量，这对大量样品分析十分合适。特别是标准工作曲线绘制后可以使用一段时间，在此段时间内可经常用一个标准样品对标准工作曲线进行单点校正，以确定该标准工作曲线是否还可使用。作为本专利技术的HPLC所采用的色谱柱的型号及规格没有特别的限定，例如其型号及规格为symmetryC185μm3.9×150mm。作为专利技术的高效液相色谱的流动相，其可以包含体积比为2～6：94～98的有机溶剂和由质量比为2.5～3.5：1的磷酸二氢钠、辛烷磺酸钠所组成的缓冲溶液。例如有机溶剂和缓冲溶液的体积比可为2：98、2.5：97.5、3：97、4：96、5：95、5.5：94.5、6：94等，优选为4：96。此处，有机溶剂可以列举出甲醇、乙腈中一种或二种，更优选为乙腈，以获得较高的检测灵敏度。缓冲溶液的作用是维持流动相的pH值，以使得被测组分保持分子状态的稳定性。缓冲溶液中磷酸二氢钠、辛烷磺酸钠的质量比可以为2.5：1、2.8：1、3：1、3.2：1、3.3：1、3.4：1、3.5：1等，优选为3：1。上述流动相的pH以3.0～3.5，如3.0、3.2、3.5。优选为3.0，以保持还原性谷胱甘肽的高吸收率。上述高效液相色谱的色谱柱的流速为0.8～1.2mL/min，如0.8mL/min、0.85mL/min、0.90mL/min、1.0mL/min、1.1mL/min、1.15mL/min或1.2mL/min、；优选为1.0mL/min。作为本专利技术的高效液相色谱，其色谱柱的温度以20～40℃为宜，优选为30℃。上述紫外检测器的紫外光波长以190～250nm为佳，优选为210nm。高效液相色谱的标准物的浓度可参考性地为150～250μg/ml，优选为200μg/ml。作为本专利技术的流动相，在使用前超声波脱气，以避免流动相中的气泡会增加基线的噪音，造成灵敏度下降，甚至无法分析。同时，还可避免溶解的氧气还所导致的某些组份被氧化，柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能。本专利技术未述及之处适用于现有技术。除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本专利技术所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。如本文所用之术语：“由……制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。连接词“由……组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由……组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1～5”时，所描述的范本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种小麦胚芽中还原性谷胱甘肽含量的检测方法，其特征在于，使用带紫外检测器的高效液相色谱采用标准曲线法获得小麦胚芽中还原性谷胱甘肽含量的含量。

【技术特征摘要】
1.一种小麦胚芽中还原性谷胱甘肽含量的检测方法，其特征在于，使用带紫外检测器的高效液相色谱采用标准曲线法获得小麦胚芽中还原性谷胱甘肽含量的含量。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱的流动相包含体积比为2～6：94～98的有机溶剂和由质量比为2.5～3.5：1的磷酸二氢钠、辛烷磺酸钠所组成的缓冲溶液。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述有机溶剂为甲醇和/或乙腈，优选为乙腈。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相的pH为3.0～3...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕强，戴雨薇，刘清飞，彭林，王钊，
申请(专利权)人：北京水木源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11