提高骨形成蛋白产量的方法技术

本发明专利技术涉及提高骨形成蛋白产量的方法。本发明专利技术提供了用于改进的重组蛋白生产的方法和工艺。所述方法可用于生产生长因子，特别是TGF‑β超家族的那些，包括骨形成蛋白(BMPs)，例如BMP‑2。在下述培养基中培养合适的宿主细胞，所述培养基中铁以至少2.25μΜ浓度存在，并且若存在吡哆醛，吡哆醛占培养基中的维生素B6摩尔浓度的少于55％。

Method for increasing bone morphogenetic protein production

The present invention relates to methods for increasing the yield of bone morphogenetic proteins. The present invention provides methods and processes for improved recombinant protein production. The method can be used for the production of growth factors, especially those of the TGF beta superfamily, including bone morphogenetic protein (BMPs), such as BMP 2. On the cultivation of the appropriate host cell medium, the medium of iron by at least 2.25 um concentration exists, and if there is pyridoxal medium vitamin B6 pyridoxal accounted for less than 55% of the molar concentration of culture.

【技术实现步骤摘要】
提高骨形成蛋白产量的方法本申请是申请号为200980117930.2的中国专利申请的分案申请，原申请是申请日为2009年4月16日的国际申请PCT/US2009/040789的中国国家阶段申请。本申请要求在2008年4月17日提交的美国临时申请No.61/045,643的较早申请日的权益，该申请通过引用整体并入本文。
本专利技术涉及重组蛋白生产的领域。具体而言，本专利技术涉及生产肽生长因子(包括骨形成蛋白(BMPs))的方法。
技术介绍
转化生长因子β(TGF-β)超家族的成员具有生理学上重要的生长调控和形态发生特性(Kingsleyetal.,GenesDev.8:133-146(1994)；Hoodlessetal.,Curr.TopicsMicrobiol.Immunol.228:235-272(1998))。骨形成蛋白(BMPs)是生长和分化因子的TGF-β超家族的成员(Rosenetal.,PrinciplesofBoneBiology2:919-928(2002))。BMPs存在的最初证据中的一些是：当将BMPs植入肌肉时去矿物质的骨能够诱导新的骨的能力(Uristeta本文档来自技高网...

【技术保护点】
生产BMP‑2的方法，所述方法包括以下步骤：i)在下述培养基中培养包含编码BMP‑2的DNA分子的合适的宿主细胞，所述的培养基包含浓度为至少大约2.25μM的铁、聚阴离子化合物、15mM到40mM的总氨基酸浓度，并且若存在吡哆醛，所述吡哆醛占所述培养基中维生素B6的摩尔浓度的少于大约50％；并ii)回收感兴趣的蛋白，其中在具有大于大约3L的容量的生物反应器中培养所述宿主细胞。

【技术特征摘要】
2008.04.17 US 61/045,6431.生产BMP-2的方法，所述方法包括以下步骤：i)在下述培养基中培养包含编码BMP-2的DNA分子的合适的宿主细胞，所述的培养基包含浓度为至少大约2.25μM的铁、聚阴离子化合物、15mM到40mM的总氨基酸浓度，并且若存在吡哆醛，所述吡哆醛占所述培养基中维生素B6的摩尔浓度的少于大约50％；并ii)回收感兴趣的蛋白，其中在具有大于大约3L的容量的生物反应器中培养所述宿主细胞。2.根据权利要求1的方法，其中所述铁的浓度为至少大约5μM。3.根据权利要求1的方法，其中所述培养基能支持至少大约2x106个细胞/mL的收获密度。4.根据权利要求1的方法，其中所述培养基中还包含选自由吡哆素、吡哆胺、吡哆素5’-磷酸酯、吡哆胺5’-磷酸酯构成的组的至少一种维生素B6。5.根据权利要求4的方法，其中所述培养基具有至少大约15μM的总的维生素B6浓度。6.根据权利要求4的方法，其中所述培养基具有小于1.2的吡哆醛与吡哆素的比率。7.根据权利要求6的方法，其中吡哆醛与吡哆素的所述比率小于0.4。8.根据权利要求1的方法，其中所述培养基还包含浓度为至少大约10nM的铜。9.根据权利要求1的方法，其中所述培养基还包含浓度为至少大约0.2μM的锌。10.根据权利要求1的方法，其中所述聚阴离子化合物是右旋糖酐硫酸酯。11.根据权利要求10的方法，其中所述右旋糖酐硫酸酯以至少大约10mg/L的浓度存在。12.根据权利要求10的方法，其中所述右旋糖酐硫酸酯以至少大约100mg/L的浓度存在。13.根据权利要求11的方法，其中所述右旋糖酐硫酸酯具有大约5,000至500,000g/摩尔之间的分子量。14.根据权利要求13的方法，其中所述右旋糖酐硫酸酯具有大约7,000g/摩尔的分子量。15.根据权利要求1的方法，其中所述培养基包含浓度为至少大约0.5mM的L-胱氨酸。16.根据权利要求15的方法，其中所述培养基包含浓度为至多大约0.3mM的L-谷氨酸。17.根据权利要求1的方法，其中所述的培养基具有大约260至360mOsm之间的初始渗透压。18.根据权利要求1的方法，其中所述BMP-2是重组的人类BMP-2(rhBMP-2)。19.根据权利要求1的方法，其中所述合适的宿主细胞选自由COS细胞、CHO细胞、BHK细胞、Balb/c3T3细胞或293细胞构成的组。20.根据权利要求19的方法，其中所述合适的宿主细胞是CHO细胞。21.根据权利要求20的方法，其中所述CHO细胞具有降低的DHFR基因表达。22.根据权利要求1的方法，其中在具有至少大约160L的容量的生物反应器中培养所述合适的宿主细胞。23.根据权利要求22的方法，其中所述生物反应器具有至少大约500L的容量。24.根据权利要求23的方法，其中所述生物反应器具有至少大约2,500L的容量。25.根据权利要求24的方法，其中所述生物反应器具有至少大约12,000L的容量。26.根据权利要求24的方法，其中通过分批重新进料、补料分批或灌注法来培养所述宿主细胞。27.根据权利要求26...

【专利技术属性】
技术研发人员：栾衍栋，王文革，格里戈·奈伯格，乔斯·曼纽尔·古梅斯，丹尼斯·帝拉佩尤，特里·卡多扎，
申请(专利权)人：惠氏有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国,US