The invention discloses a method for qualitative and related protein staining for extracting animal cells, which comprises the following steps: collection of A. cells; B. cells were C. Cells cracking; preparation; dyeing separation quality and related proteins in D. cells; detect E. chromatin associated protein. By using the method of the invention, the chromatin and related proteins of higher purity can be obtained, and the composition of the cytoplasm and the cell membrane is not contained. This method solves the extraction of chromatin and its related proteins difficult problem from tissue or cell lysates in full separation, provides the experimental basis for the study on the function of chromatin and its related protein, and has broad application prospects.
【技术实现步骤摘要】
一种提取动物细胞核内染色质及其相关蛋白的方法
本专利技术涉及一种提取动物细胞核内染色质及其相关蛋白的方法。
技术介绍
细胞是一切生命活动的基本结构和功能单位。动物细胞的基本结构包括细胞质膜,细胞核,细胞质。细胞质膜是指围绕在细胞最外层,由脂质、蛋白质和糖类组成的生物膜,在结构上作为细胞的界限,使细胞具有一个相对稳定的内环境,同时可以介导细胞与环境之间的物质运输、能量转换及信息传递等过程。细胞质是指细胞质膜包围的除核区外的一切半透明、胶状、颗粒状物质的总称,由细胞质基质、内膜系统、细胞骨架和包含物组成,细胞质是生命活动的主要场所。细胞质包括基质、细胞器和后含物,在生活状态下为透明的胶状物。基质是指细胞质内呈液态的部分,是细胞质的基本成分,主要含有多种可溶性酶、糖、无机盐和水等。细胞器是分布于细胞质内、具有一定形态、在细胞生理活动中起重要作用的结构,包括线粒体、质体,内质网、高尔基体、溶酶体、细胞骨架(微丝、微管、中间纤维)、中心粒以及周围物质等。细胞核是动物细胞内最大、最重要的细胞器,是细胞遗传与代谢的调控中心。细胞核主要由核被膜、核纤层、染色质、核仁及核体组成。细胞核是遗传信息的储存场所,与细胞遗传及代谢活动密切相关的基因复制、转录和转录初产物的加工过程均在此进行。染色质作为遗传物质的载体,是指间期细胞核内由DNA、组蛋白、非组蛋白及少量RNA组成的线性复合结构。染色质是细胞遗传与代谢调控中心的最重要成员,几乎所有细胞生命活动都要从染色质开始。与基因组直接相关的细胞活动都是在染色质水平进行,如DNA复制、基因转录、同源重组、DNA修复,包括转录偶联的修复以 ...
【技术保护点】
一种提取动物细胞核内染色质及其相关蛋白的方法,其特征在于:包括以下步骤:a. 收集细胞弃去培养液,使用稀释后的0.25%的胰酶溶液进行常规细胞消化,离心弃上清,保留细胞沉淀,用适量PBS重悬细胞沉淀,离心弃上清,保留沉淀;b. 细胞匀浆裂解(1)向步骤a所得沉淀中加入buffer 1,震荡后冰浴2‑5分钟;(2)将细胞悬液转移到预冷的玻璃匀浆器内,冰上匀浆50‑60次左右后冰上静置1‑2 h;(3)600‑900g,4℃离心5‑10分钟,得到的沉淀即粗细胞核组分;(4)吸取步骤b(3)所得上清,600‑900g,4℃,5‑10分钟,反复多次离心,直至没有沉淀,最终得到的上清即为胞浆和胞膜的混合组分;c. 细胞核的制备用适量buffer 1重悬步骤b(3)得到的粗核,离心弃上清;重复上述离心过程4‑5次,最终得到的沉淀即为完整且纯度较高的细胞核组分;d. 细胞染色质及其相关蛋白的分离(1)用适量的buffer 2溶解细胞核组分,冰浴30‑60 min,离心,获得沉淀和上清,上清即为核内可溶性组分;(2)将步骤d(1)得到的沉淀用buffer 2重悬,离心,弃去上清,重复离心2‑3次,最终 ...
【技术特征摘要】
1.一种提取动物细胞核内染色质及其相关蛋白的方法,其特征在于:包括以下步骤:a.收集细胞弃去培养液,使用稀释后的0.25%的胰酶溶液进行常规细胞消化,离心弃上清,保留细胞沉淀,用适量PBS重悬细胞沉淀,离心弃上清,保留沉淀;b.细胞匀浆裂解(1)向步骤a所得沉淀中加入buffer1,震荡后冰浴2-5分钟;(2)将细胞悬液转移到预冷的玻璃匀浆器内,冰上匀浆50-60次左右后冰上静置1-2h;(3)600-900g,4℃离心5-10分钟,得到的沉淀即粗细胞核组分;(4)吸取步骤b(3)所得上清,600-900g,4℃,5-10分钟,反复多次离心,直至没有沉淀,最终得到的上清即为胞浆和胞膜的混合组分;c.细胞核的制备用适量buffer1重悬步骤b(3)得到的粗核,离心弃上清;重复上述离心过程4-5次,最终得到的沉淀即为完整且纯度较高的细胞核组分;d.细胞染色质及其相关蛋白的分离(1)用适量的buffer2溶解细胞核组分,冰浴30-60min,离心,获得沉淀和上清,上清即为核内可溶性组分;(2)将步骤d(1)得到的沉淀用buffer2重悬,离心,弃去上清,重复离心2-3次,最终得到的沉淀即为细胞核内不溶性的染色质组分;e.染色质相关蛋白的检测(1)胞浆和胞膜的混合组分以及核内可溶性组分:根据上清体积加1/3体积的三氯醋酸水溶...
【专利技术属性】
技术研发人员:马勇杰,谷峰,付丽,张慧鲲,余峰,
申请(专利权)人:天津市肿瘤医院,
类型:发明
国别省市:天津,12
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