小麦光腥黑粉菌原生质体的制备方法技术
Method for preparing wheat light black fungus protoplast
The invention relates to a preparation method of a kind of Tilletia foetida protoplasts, which comprises the following steps: (1) Mycelium Culture: the teliospores of Tilletia foetida in water agar after 9 days of culture medium with 6, distilled water washed down, collecting bacteria liquid, centrifugal to clearly, get mycelium; (2) cell wall lysis as osmotic stabilizer with potassium chloride solution, mixed enzyme solution, adding the mycelia, 1.5 28 C 2.5h oscillation enzyme to obtain Tilletia foetida protoplast; the mixed enzyme solution including the mass percent concentration of lywallzyme and 1.5% snail enzyme 1.5%, 1.5% driselase. The protoplast of wheat light smut fungus is prepared by adopting the method, and the yield is up to 17 * 10
【技术实现步骤摘要】
小麦光腥黑粉菌原生质体的制备方法
本专利技术涉及细胞工程中真菌原生质体制备与再生
，具体涉及一种小麦光腥黑粉菌原生质体的制备方法。
技术介绍
小麦光腥黑粉菌(TilletiafoetidaWalle.Lindr.)引起的小麦光腥黑穗病(commonbuntofwheat)是一种世界性病害，具有分布广泛、流行性强，危害严重等特点，严重影响小麦的生产。感病植株通常在外观上没有明显的症状，在发病后期，颖壳略向外张开，整个麦穗变成病穗，病粒外有一层灰色薄膜，内部充满黑粉，是病原菌的冬孢子，冬孢子有鱼腥味，引起小麦产量和品质降低。小麦光腥黑粉菌属于担子菌亚门(Basidiomycotina)、冬孢菌纲(Teliomycetes)、黑粉菌目(Ustilaginales)、腥黑粉菌科(Tilletiaceae)、腥黑粉菌属(Tilletia)。冬孢子呈褐色，球形或近球形，可随种子传播，在土壤中能够存活多年，一旦条件适宜并遇到大面积的寄主植物，便会引起发病。国内外对于小麦光腥黑穗病的研究主要集中在病原菌生物学特性以及分子标记技术，对该病原菌的致病机制研究较少。遗传转化技术是...
【技术保护点】
小麦光腥黑粉菌原生质体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)菌丝培养：将小麦光腥黑粉菌的冬孢子在水琼脂培养基中培养6‑9天后，用灭菌蒸馏水冲洗下来，收集菌液，离心去上清，得到菌丝；(2)细胞壁裂解：以氯化钾溶液作为渗透压稳定剂，配制混合酶液，加入菌丝中，28℃振荡酶解1.5‑2.5h，即得到小麦光腥黑粉菌原生质体；所述混合酶液包括质量百分比浓度为1.5％的崩溃酶、1.5％的溶壁酶和1.5％的蜗牛酶。
【技术特征摘要】
1.小麦光腥黑粉菌原生质体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)菌丝培养：将小麦光腥黑粉菌的冬孢子在水琼脂培养基中培养6-9天后，用灭菌蒸馏水冲洗下来，收集菌液，离心去上清，得到菌丝；(2)细胞壁裂解：以氯化钾溶液作为渗透压稳定剂，配制混合酶液，加入菌丝中，28℃振荡酶解1.5-2.5h，即得到小麦光腥黑粉菌原生质体；所述混合酶液包括质量百分比浓度为1.5％的崩溃酶、1.5％的溶壁酶和1.5％的蜗牛酶。2.根据权利要求1所述的小麦光腥黑粉菌原生质体的制备方法，其特征在于：所述水琼脂培养基的制备方法为：称取20g琼脂粉，加水定容到1L，高压蒸汽灭菌。3.根据权利要求1所述的小麦光腥黑粉菌原生质体的制备方法，其特征在于：所述小麦...
【专利技术属性】
技术研发人员：高利，沈慧敏，陈万权，刘太国，刘博，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11
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