一种胰高血糖素样肽-1类似物及其制备方法和用途技术

本发明专利技术提供了一种胰高血糖素样肽-1类似物单体肽，所述单体肽具有通式1：Z1HAX1GTFTSDVSSYLE X2QAAKEFIAWLVKGRGCAX3；其中，Z1为H、乙酰基或三氟乙酰基；X1为Met、Leu、Pro、Phe或Tyr；X2为Gly、Glu或Aib(2-氨基异丁酸)，X3为NH2或H。本发明专利技术还提供了由所述单体肽形成的二聚体，以及该二聚体的制备方法和在制备药物中的用途。本发明专利技术提供的GLP-1类似物单体的二聚体具有显著的降血糖作用，体内半衰期可以达到12-72小时以上，克服了天然GLP-1半衰期短的问题，可大幅提高临床应用依从性。

Glucagon like peptide -1 analog, preparation method and application thereof

The invention provides a glucagon like peptide analogues of -1 monomer peptide, the peptide monomer having the formula 1:Z1HAX1GTFTSDVSSYLE X2QAAKEFIAWLVKGRGCAX3 Z1; among them, H, acetyl or three fluorine acetyl; X1 Met, Leu, Pro, Phe or Tyr; X2 is Gly, Glu or Aib (2-, X3) amino isobutyric acid is NH2 or H. The present invention also provides a two polymer formed from the monomeric peptide, and a process for the preparation of the two polymer and the use thereof in the preparation of a drug. Two dimers of GLP-1 analogues provided by the invention monomer has significant hypoglycemic effect, in vivo half-life can reach 12-72 hours, overcome the natural short half-life of GLP-1, can significantly improve the clinical compliance.

【技术实现步骤摘要】
一种胰高血糖素样肽-1类似物及其制备方法和用途
本专利技术涉及医药
，具体涉及一种具有长效作用的胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物及其二聚体。本专利技术还涉及该GLP-1类似物二聚体在制备用于治疗和/或预防糖尿病、肥胖和阿尔兹海默病的药物中的应用。
技术介绍
胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是一种肠源性激素，主要在末端空肠、回肠和结肠的L细胞中合成，进餐反应中释放到循环。GLP-1(7-36,7-37)是体循环中GLP-1的主要活性形式，通过复杂的机制控制血糖，包括胰岛素和胰高血糖素的分泌，胃的排空以及外周胰岛素的调节。GLP-1(7-36,7-37)降血糖作用是葡萄糖依赖性的，可避免低血糖发生，而且具有抑制胰岛β-细胞的凋亡，促进胰岛β-细胞的增生的作用，可逆转病情发展。但天然GLP-1的血浆半衰期仅为1-2分钟，代谢不稳定性限制了其作为药物的应用。研究表明，体内的二肽激肽酶(DPPIV)特异性识别并降解GLP-1结构中受体结合活性部位N端His-Ala片段而使其快速失活，同时其他蛋白水解酶如内肽酶等也参与肾脏滤过清除过程。提高代谢稳定性，延长血浆半衰期，从而提高临床用药依从性是基于GLP-1的药物开发领域的技术目标。在公开号为CN00806548.9、CN99814187.9、申请号为200410017667.9等的中国专利申请中记载了以下一些技术：1)针对酶降解关键位点的结构改造；2)母体肽链结构中引入脂肪酰基团，提高与血浆蛋白结合力以避免多肽在体内快速清除(CN201210513145.2、CN200810124641.2、CN20118000352.1等)；3)GLP-1类似物蛋白融合技术；4)PEG修饰等。尽管多年来进行了多方面的尝试，但是到目前为止基于GLP-1(7-36,7-37)的母体肽链开发上市的药物只有利拉鲁肽。而利拉鲁肽虽然大幅延长了GLP-1体内半衰期，但仍需要每天注射一次，用药依从性仍有待改善。本专利技术人在之前获授权专利号为CN201110076380.3的中国专利中记载了GLP-1(7-37)序列中的单个位点10、15、22、23、30、33分别被半胱氨酸替换形成的二聚体。
技术实现思路
本申请的专利技术人在后续的优化研究中发现对序列中酶降解敏感位点的替换、修饰以及有助于形成二级结构的改造可以进一步提高二聚体的活性和延长体内半衰期。为此，本专利技术人经过深入研究和反复试验，提供了一种胰血糖素样肽-1类似物。本专利技术提供了一种胰高血糖素样肽-1类似物单体肽，所述单体肽具有通式1：Z1HAX1GTFTSDVSSYLEX2QAAKEFIAWLVKGRGCAZ2；其中，其中，Z1为氢、乙酰基或三氟乙酰基；X1为Leu、Met、Pro、Phe或Tyr；X2为Gly、Glu或Aib(2-氨基异丁酸)。Z2为连接于丙氨酸残基C端上的NH2或氢。优选地，所述单体肽的氨基酸序列为：SEQIDNO1：HAMGTFTSDVSSYLEGQAAKEFICWLVKGRGCA-NH2SEQIDNO2：HALGTFTSDVSSYLEGQAAKEFICWLVKGRGCA-NH2SEQIDNO3：Ac-HAMGTFTSDVSSYLEEQAAKEFICWLVKGRGCA-NH2SEQIDNO4：Ac-HAFGTFTSDVSSYLEGQAAKEFICWLVKGRGCASEQIDNO5：HAYGTFTSDVSSYLEEQAAKEFICWLVKGRGCA-NH2SEQIDNO6：HAMGTFTSDVSSYLEAibQAAKEFICWLVKGRGCA-NH2SEQIDNO7：Ac-HALGTFTSDVSSYLEGQAAKEFICWLVKGRGCA-NH2SEQIDNO8：HAPGTFTSDVSSYLEAibQAAKEFICWLVKGRGCA-NH2SEQIDNO9：HAFGTFTSDVSSYLEAibQAAKEFICWLVKGRGCA-NH2SEQIDNO10：CF3CO-HAYGTFTSDVSSYLEAibQAAKEFICWLVKGRGCASEQIDNO11：HAPGTFTSDVSSYLEGQAAKEFICWLVKGRGCA-NH2SEQIDNO12：Ac-HALGTFTSDVSSYLEGQAAKEFICWLVKGRGCA-NH2SEQIDNO13：CF3CO-HAPGTFTSDVSSYLEEQAAKEFICWLVKGRGCA-NH2SEQIDNO14：CF3CO-HAFGTFTSDVSSYLEEQAAKEFICWLVKGRGCASEQIDNO15：Ac-HAYGTFTSDVSSYLEGQAAKEFICWLVKGRGCASEQIDNO16：CF3CO-HAFGTFTSDVSSYLEAibQAAKEFICWLVKGRGCA-NH2SEQIDNO17：HAFGTFTSDVSSYLEEQAAKEFICWLVKGRGCA-NH2SEQIDNO18：HALGTFTSDVSSYLEAibQAAKEFICWLVKGRGCA-NH2SEQIDNO19：CF3CO-HALGTFTSDVSSYLEAibQAAKEFICWLVKGRGCA-NH2SEQIDNO20：HAPGTFTSDVSSYLEGQAAKEFICWLVKGRGCASEQIDNO21：HAYGTFTSDVSSYLEGQAAKEFICWLVKGRGCA-NH2。本专利技术进一步提供了一种胰高血糖素样肽-1类似物单体肽的二聚体，所述二聚体由上述单体肽中的一种或两种通过分子间二硫键连接形成；优选地，所述二聚体是由上述单体肽与另一条具有相同序列的单体肽通过分子间二硫键连接形成。本专利技术还提供了一种制备上述二聚体的方法，所述方法包括：1)通过Fmoc法合成GLP-1类似物单体肽粗品；2)将步骤1)中得到的GLP-1类似物单体肽粗品纯化、浓缩和冻干，得到冻干粉；优选地，所述纯化是将步骤1)得到的单体肽粗品溶解于水或10～15％乙腈中得到浓度为10～15mg/ml的溶液后，采用制备型HPLC法、C18色谱柱、乙腈-水-三氟乙酸系统分离纯化实现的；3)将步骤2)中得到的冻干粉溶解于去离子水中，以碳酸氢铵法或DMSO法形成GLP-1类似物二聚体，纯化，获得GLP-1类似物二聚体纯品；优选地，所述单体肽溶解于去离子水中得到的溶液中所述单体肽的浓度为1.5～2mmol/L。在根据本专利技术的一个实施方案中，当所述单体肽的N-端酰化时，是通过包括下述步骤的方法实现的：将单体肽合成过程中得到的肽-树脂偶联物去除N端Fmoc保护基，然后将所述去除N端Fmoc保护基的肽树脂偶联物混悬于吡啶中，加入适当摩尔比的乙酸酐或三氟乙酸酐，混匀、放置后，得到N-端组氨酸酰化的肽-树脂偶联物；所述N-端组氨酸酰化的肽-树脂偶联物裂解后得到N-端组氨酸酰化的单体肽粗品。本专利技术进一步提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含上述的胰高血糖素样肽-1类似物二聚体或其盐。根据本专利技术的一个实施方案中，所述药物组合物还包含一种或多种药学上可接受辅料。根据本专利技术的一个实施方案中，所述辅料选自水溶性填充剂、pH调节剂、稳定剂、注射用水或渗透压调节剂中的一种或多种；所述水溶性填充剂包括但不限于甘露醇、低分子右旋糖酐、山梨醇、聚乙本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胰高血糖素样肽‑1类似物单体肽，其特征在于，所述单体肽具有通式1：Z1HAX1GTFTSDVSSYLE X2QAAKEFIAWLVKGRGCAZ2；其中，Z1为氢、乙酰基或三氟乙酰基；X1为Leu、Met、Pro、Phe或Tyr；X2为Gly、Glu或2‑氨基异丁酸(Aib)；Z2为连接于丙氨酸残基C端上的NH2或氢。

【技术特征摘要】
1.一种胰高血糖素样肽-1类似物单体肽，其特征在于，所述单体肽具有通式1：Z1HAX1GTFTSDVSSYLEX2QAAKEFIAWLVKGRGCAZ2；其中，Z1为氢、乙酰基或三氟乙酰基；X1为Leu、Met、Pro、Phe或Tyr；X2为Gly、Glu或2-氨基异丁酸(Aib)；Z2为连接于丙氨酸残基C端上的NH2或氢。2.如权利要求1所述的单体肽，其特征在于，所述单体肽的氨基酸序列为：SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20或SEQIDNO:21。3.一种胰高血糖素样肽-1类似物单体肽的二聚体，其特征在于，所述二聚体由如权利要求1或2所述的单体肽中的一种或两种通过分子间二硫键连接形成；优选地，所述二聚体是由如权利要求1或2所述的单体肽与另一条具有相同序列的单体肽通过分子间二硫键连接形成。4.一种制备如权利要求3所述的二聚体的方法，其特征在于，所述方法包括：1)通过Fmoc法合成GLP-1类似物单体肽粗品；2)将步骤1)中得到的GLP-1类似物单体肽粗品纯化、浓缩和冻干，得到冻干粉；优选地，所述纯化是将步骤1)得到的单体肽粗品溶解于水或10～15％乙腈中得到浓度为10～15mg/ml的溶液后，采用制备型HPLC法、C18色谱柱、乙腈-水-三氟乙酸系统分离纯化实现的；3)将步骤2)中得到的冻干粉溶解于去离子水中，以碳酸氢铵法或DMSO法形成GLP-1类似物二聚体，纯化，获得GLP-1类似物二聚体纯品；优选地，所述单体肽溶解于去离子水中得到的...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵娜夏，韩英梅，王玉丽，夏广萍，
申请(专利权)人：天津药物研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12