一种植物生长调节剂应用于链霉菌菌剂制备的方法技术

本发明专利技术涉及一种植物生长调节剂应用于链霉菌菌剂制备的方法，包括如下步骤：1)菌种摇床培养；2)种子液制备；3)发酵液制备；4)菌剂的固定。本发明专利技术采用三级发酵方式实现一种产纤维素酶的链霉菌剂的工业化生产。尤其是在种子罐和发酵罐培养过程中添加植物生长调节剂如三十烷醇、复硝酚钠、胺鲜酯等，可显著缩短种子生长周期，提高链霉菌生产效率，该菌剂纤维素酶活高，可有效降解果树枝条、秸秆、木薯渣等，制备生物有机肥，创造可观的经济效益。

【技术实现步骤摘要】
一种植物生长调节剂应用于链霉菌菌剂制备的方法
本专利技术涉及一种植物生长调节剂应用于链霉菌菌剂制备的方法，属于肥料生产

技术介绍
链霉菌是目前研究和应用最广泛的生防因子之一，开发应用的产品涉及杀菌、杀虫、除草、生长调节、抗病毒等多种制剂。在微生物产生的20000多种活性物质中，链霉菌占到60％以上，是一类作物有益菌，具有明显的促生、抗病作用，越来越多地被应用于果树、蔬菜等多种作物栽培中。较高的活菌密度是确保应用效果的关键，研制适于规模化生产的高效菌剂及其扩培工艺具有重要意义。专利CN200810079467.4提供一种适于酒红土褐链霉菌生长的“液体制种，固体发酵”新工艺，实现了有效活菌数高，发酵周期短的技术要求；专利CN201310078132.1将玫瑰黄链霉菌发酵液按比例转接于玉米芯中，得到微生物杀菌剂颗粒剂；专利CN201410058407.X将固体发酵种子接入产孢培养基分装至浅盘，盖上灭菌纱布，发酵4-5d，得到链霉菌孢子产品。专利CN201610538598.9提供了一种弗氏链霉菌固体培养基，该培养基包括玉米粉、豆粕粉、秸秆粉、草炭土等。现有链霉菌剂制备工艺主要集中在低成本固体发酵技术开发上，对提高菌剂浓度及活性物质产出技术报道较少。近年来研究发现植物生长调节物质不仅是控制植物生长发育的重要手段，也对微生物尤其是大型真菌培养具有促进作用。专利CN201310237936.1在PDA加富培养基上，添加三十烷醇，增强了猴头菌丝的生长活力，使母种培育时间缩短；专利CN201510002947.0公开玉米粉、维生素B、豆粕、硫酸铵、三十烷醇等的混合物可显著提高香菇产量；专利CN201510056506.9公开了一种球等鞭金藻培养基，包括：KNO3，KH2PO4，柠檬酸铁铵，胺鲜酯，VB等，该培养基具有生长速率快、细胞密度大的特点；专利CN201510603655.2公开妇科千金片药渣、麦麸、硫酸锌、三十烷醇、甘油等，可显著提高成熟的灵芝子实体中多糖的含量。截止目前未见报道有植物生长调节物质对链霉菌培养的影响。
技术实现思路
本专利技术旨在设计一种植物生长调节剂应用于链霉菌菌剂制备的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)菌种摇床培养，培养基配方组成：蔗糖1％-3％、蛋白胨0.5％-1％、磷酸氢二钾0.05％-0.1％、硫酸铵1％-2％、其余为水，培养条件：温度28℃-30℃、湿度30％-50％、转速200r/min-240r/min，接种量2％，培养周期：10h-12h；2)种子液制备，培养基配方组成：蔗糖1％-3％、蛋白液1％-3％、磷酸氢二钾0.05％-0.1％、硫酸铵1％-2％、其余为水，培养条件：温度28℃-30℃、罐压0.05MPa、空气流量7m3/h，搅拌转速80r/min，接种量5％，培养周期16h-18h，发酵过程添加三十烷醇进行补料；3)发酵液制备，培养基配方组成：葡萄糖1％-3％、蛋白液1％-3％、磷酸氢二钾0.5％-1％、硫酸铵1％-2％、植物生长调节剂0.3％-0.6％、其余为水，培养条件：温度28℃-30℃、罐压0.05MPa、空气流量10m3/h,搅拌转速40r/min，接种量2％，培养周期60h-66h；4)菌剂的固定，果树枝条粉碎后过100目筛处理，将步骤3)菌液过滤后均匀喷洒在果树枝条粉末上，30℃-50℃条件下烘干。进一步，步骤1)摇瓶装量为50ml/250ml。进一步，步骤2)发酵8-10h进行补料。进一步，步骤2)发酵过程中补料为0.1％的三十烷醇。进一步，步骤3)所述植物生长调节剂为复硝酚钠、三十烷醇、胺鲜酯的一种或几种混合。进一步，步骤1)、2)、3)培养基灭活方法为控制温度114℃-116℃，压力0.09-0.11MPa，时间20min-25min。进一步，步骤1)、2)、3)培养基灭活后，加入碳酸钙调节pH值为6.4-6.7。进一步，步骤4)所述果树枝条为苹果、梨树、桃树的一种或几种混合。进一步，步骤4)所述菌液与果树枝条比例为1:10。本专利技术还要求保护使用上述方法制备得到的菌剂在降解果树枝条、秸秆、木薯渣、动物粪便等制备生物有机肥的应用。本专利技术所用的链霉菌YIC24为：中国科学院烟台海岸带研究所于2015年12月09日在中国科学院微生物研究所保藏，保藏编号为CGMCCNo.11848。本专利技术的优越性体现在：1)种子罐培养效率高。种子培养过程以补料形式添加三十烷醇，可有效缩短细胞分裂周期，提高菌种活性，降低生产成本。2)发酵液活力高。发酵培养基中添加植物生长素，可显著提高链霉菌产纤维素酶活性，同时单位时间内菌体密度也有明显上升。3)固化性能稳定。利用果树枝条粉末吸附性将菌体有效固定，提高菌体对外界不利环境适应性及稳定性，菌剂保质期达到24个月。具体实施方式以下结合实例对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。实施例11)菌种摇床培养，培养基配方组成：蔗糖10g、蛋白胨5g、磷酸氢二钾0.5g、硫酸铵10g，加水1L，摇瓶装量为50/250ml，培养基灭活温度114-116℃、灭活压力0.09-0.11MPa，时间20-25min，灭活后加碳酸钙调节pH约6.5，之后接种培养，培养条件：温度28℃、湿度35％、转速200r/min，接种量2％，培养周期：10h；2)种子液制备，培养基配方组成：蔗糖200g、蛋白液200g、磷酸氢二钾10g、硫酸铵200g，加水20L，灭活温度114-116℃、压力0.09-0.11MPa，时间20-25min，灭活后加碳酸钙调节pH约6.5，接种培养，培养条件：温度28℃、罐压0.05MPa、空气流量7m3/h，搅拌转速80r/min，接种量5％，培养周期18h，其中发酵9h时补料20g三十烷醇；3)发酵液制备，培养基配方组成：葡萄糖10kg、蛋白液10kg、磷酸氢二钾5kg、硫酸铵10kg、植物生长调节剂复硝酚钠3kg，加水至1000L，培养基灭活温度114-116℃、压力0.09-0.11MPa，时间20-25min，灭活后加碳酸钙调节pH约6.5，接种培养，培养条件：温度28℃-30℃、罐压0.05MPa、空气流量10m3/h，搅拌转速40r/min，接种量2％，培养周期60h；4)菌剂的固定，苹果树枝条粉碎后过100目筛处理，将步骤3)菌液过滤后，按菌液：果树枝条为1：10的量均匀喷洒在果树枝条粉末上，30℃-50℃条件下烘干，制出菌剂成品10吨。5)取菌剂2kg与一吨粉碎果树枝条混合翻堆后腐熟，10天即可腐熟完成得到生物有机肥。实施例21)菌种摇床培养，培养基配方组成：蔗糖40g、蛋白胨10g、磷酸氢二钾1.4g、硫酸铵30g，加水2L，摇瓶装量为50/250ml，培养基灭活温度114-116℃、灭活压力0.09-0.11MPa，时间20-25min，灭活后加碳酸钙调节pH6.4-6.7，之后接种培养，培养条件：温度28℃、湿度35％、转速240r/min，接种量2％，培养周期：12h；2)种子液制备，培养基配方组成：蔗糖800g、蛋白液800g、磷酸氢二钾28g、硫酸铵600g，加水40L，灭活温度114-116℃、压力0.09-0.11MPa，时间20-25mi本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种植物生长调节剂应用于链霉菌菌剂制备的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)菌种摇床培养，培养基配方组成：蔗糖1％‑3％、蛋白胨0.5％‑1％、磷酸氢二钾0.05％‑0.1％、硫酸铵1％‑2％、其余为水，培养条件：温度28℃‑30℃、湿度30％‑50％、转速200r/min‑240r/min，接种量2％，培养周期：10h‑12h；2)种子液制备，培养基配方组成：蔗糖1％‑3％、蛋白液1％‑3％、磷酸氢二钾0.05％‑0.1％、硫酸铵1％‑2％、其余为水，培养条件：温度28℃‑30℃、罐压0.05MPa、空气流量7m

【技术特征摘要】
1.一种植物生长调节剂应用于链霉菌菌剂制备的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)菌种摇床培养，培养基配方组成：蔗糖1％-3％、蛋白胨0.5％-1％、磷酸氢二钾0.05％-0.1％、硫酸铵1％-2％、其余为水，培养条件：温度28℃-30℃、湿度30％-50％、转速200r/min-240r/min，接种量2％，培养周期：10h-12h；2)种子液制备，培养基配方组成：蔗糖1％-3％、蛋白液1％-3％、磷酸氢二钾0.05％-0.1％、硫酸铵1％-2％、其余为水，培养条件：温度28℃-30℃、罐压0.05MPa、空气流量7m3/h，搅拌转速80r/min，接种量5％，培养周期16h-18h，发酵过程添加三十烷醇进行补料；3)发酵液制备，培养基配方组成：葡萄糖1％-3％、蛋白液1％-3％、磷酸氢二钾0.5％-1％、硫酸铵1％-2％、植物生长调节剂0.3％-0.6％、其余为水，培养条件：温度28℃-30℃、罐压0.05MPa、空气流量10m3/h,搅拌转速40r/min，接种量2％，培养周期60h-66h；4)菌剂的固定，果树枝条粉碎后过100目筛处理，将步骤3)菌液过滤后均匀喷洒在果树枝条粉末上，30℃-50℃条件下烘干。2.根据权利要求1所述的一种植物生长调节剂应用于链霉菌菌剂制备的方法，其特征在于，步骤1)摇瓶装量为50ml/250m...

【专利技术属性】
技术研发人员：高筱莎，常大勇，常晓菲，
申请(专利权)人：烟台固特丽生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37