一种包含过氧化氢酶的组合物及用途制造技术

本发明专利技术公开了一种包含过氧化氢酶的组合物及其用途，包含有标记在生物大分子上的放射性核素，可溶性海藻酸盐及过氧化氢酶。该组合物可以通过介入治疗的方式注入肿瘤内，当组合物中的海藻酸根离子进入肿瘤后遇到钙离子时会形成凝胶，从而将放射性核素及过氧化氢酶均匀的限定在肿瘤内。本发明专利技术公开的包含过氧化氢酶的组合物，利用过氧化氢酶分解瘤内过氧化氢产生的溶解氧改善肿瘤细胞乏氧状态，同时利用放射性射线对乏氧改善后的肿瘤细胞进行杀伤，具有良好的肿瘤治疗应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种包含过氧化氢酶的组合物及用途
本专利技术涉及医药
，尤其涉及一种用于制备抗肿瘤药剂的组合物及用途。
技术介绍
放射性核素因为其在不同器官组织中的富集效应不同，如甲状腺细胞对碘化物具有特殊的亲和力，口服一定量的碘-131后，能被甲状腺大量吸收，碘-131在衰变为氙-131时，能放射出β射线(占99％)和γ射线(占1％)，前者的有效射程3.63mm，平均射程为0.48mm，能选择性地破坏甲状腺腺泡上皮而不影响邻近组织，但是富集效应也限制了放射性核素应用于其他组织中。现有技术中，通过放射粒子的微创植入疗法是目前较为理想的方式之一，将放射性材料放置于微型载体中，再通过微创手术在超声或CT的引导下将放射性籽源植入病灶处，通过粒子衰变发出的射线来杀伤肿瘤细胞。这种方式会将载体粒子永久的留在患者体内，对患者的身体会造成长期的影响，该植入方法还存在分布不均匀和覆盖性差等问题，难以达到预期的效果。另一方面，由于肿瘤的无序生长,血管生成不充分,所以人体实体瘤大多存在氧缺乏问题,乏氧状态的肿瘤细胞抵抗电离辐射的能力超过含氧量正常的肿瘤细胞的数倍,主要原因是减少了氧自由基对DNA的损伤，因此放射线对乏氧肿瘤细胞的杀伤性有限，导致现有放射粒子的治疗效果并不明显。现有技术中一类解决方式是通过高压氧仓的方式提高体内的溶解氧浓度；另一类方法通常采用乏氧细胞增敏剂以降低放射线的剂量或增强放射性治疗的效果，但放射性增敏剂通常具有较强的毒性，会对患者身体造成不良影响。如一类具有亲电子活性结构的硝基芳烃化合物,能参与乏氧细胞的生物还原代谢，减弱硝基对氧的模拟作用,能够在乏氧条件下固定DNA损伤,使DNA损伤不能进行修复，然而由于其副反应大而在临床使用中受到很大的限制。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术中的上述问题，提供一种包含过氧化氢酶的组合物及其用于制备抗肿瘤药剂的用途。可改善肿瘤细胞乏氧问题，提高放射性粒子分布的均匀性及放射线对肿瘤细胞的杀伤能力，且不会影响周围的正常组织。本专利技术公开了一种包含过氧化氢酶的组合物，包含过氧化氢酶，可溶性海藻酸盐，以及标记在生物大分子上的放射性核素。组合物中的海藻酸根离子进入肿瘤后，遇到钙离子时形成凝胶而附着在肿瘤内部，同时会将放射性核素标记的生物大分子及过氧化氢酶均匀限定在肿瘤内部。利用过氧化氢酶分解肿瘤内的过氧化氢可以产生溶解氧，从而改善肿瘤细胞的乏氧状态，同时利用放射性射线电离溶解氧产生氧自由基，该氧自由基会对肿瘤细胞进行杀伤，极大的增强了放射线对肿瘤细胞的杀伤作用。另一方面，可溶性海藻酸盐与氧化氢酶以及放射性核素标记的生物大分子能够因应肿瘤内部的结构形态，形成网络状均匀分布的凝胶结构，且过氧化氢酶和放射性核素标记的生物大分子因体型结构合适，能够被限定在海藻酸盐的凝胶结构中，而不会被血液带到患者的正常组织区域，同时也保证了病灶区域的放射线强度。此外，海藻酸钠在生物体内数周内逐渐降解，不会留下任何微粒。可选的，该包含过氧化氢酶的组合物中，可溶性海藻酸盐为海藻酸钠。可选的，该包含过氧化氢酶的组合物中，可溶性海藻酸盐为海藻酸钾，钾离子可促进血管的收缩，降低注入液在瘤体内的流动性。可选的，该包含过氧化氢酶的组合物中，可溶性海藻酸盐为海藻酸钠与海藻酸钾的混合物，可依据肿瘤内血管的不同情况，调整混合物的比例关系，从而调整血管的收缩程度，进而调整组合物在血管中的分布状态。可选的，该包含过氧化氢酶的组合物中，放射性核素可为碘-131，碘-125。可选的，该包含过氧化氢酶的组合物中，放射性核素标记的生物大分子为蛋白质、核酸或多糖。可选的，该包含过氧化氢酶的组合物中，放射性核素标记在该过氧化氢酶，将放射性核素标记在过氧化氢酶上，可以进一步限定放射线与过氧化氢酶产生的溶解氧的相对距离分布的均匀性，不会因为分子量的差异导致空间分布上的不均匀，从而提高氧自由基生成的几率和对肿瘤细胞的杀伤效果。可选的，该包含过氧化氢酶的组合物中，过氧化氢酶浓度为5mg/mL-10mg/mL，海藻酸盐浓度为5mg/mL-10mg/mL，放射性核素剂量为200Ci/mL-500Ci/mL。可选的，该包含过氧化氢酶的组合物中，还包含免疫刺激CpG寡聚脱氧核苷酸，可联合细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)，为免疫治疗制造适量的抗原，在组合物中加入免疫佐剂更好地产生肿瘤相关抗原，然后联用CTLA-4调节免疫反应，利用自身免疫杀伤远端的肿瘤或者转移瘤，在治疗原位肿瘤的同时实现治疗远端或者转移瘤的目的。本专利技术解决了现有技术中存在的乏氧肿瘤细胞的耐放射线辐射的问题，同时改善了现有技术中放射线核素事先容置与载体颗粒中，但介入病灶区后分布不均匀和覆盖性差的问题。此外杀死肿瘤细胞的同时可产生抗原，与T淋巴细胞抗原-4抗体(CTLA-4)，治疗原位肿瘤的同时实现治疗远端或者转移瘤附图说明下面结合附图及实施例对本专利技术作进一步描述：图1是放射线核素在小鼠瘤内48小时动向的成像监测图；图2是小鼠瘤内血氧浓度的光声监测图；图3是肿瘤生长曲线图；图4是小鼠存活曲线图；图5是原位肿瘤生长曲线图图6是远端肿瘤生长曲线图图7是小鼠体内免疫相关细胞因子含量图图8是不同浓度的海藻酸钠在肿瘤内的渗透行为切片图具体实施方式实施例一：制备海藻酸钠溶液。称取50毫克的海藻酸钠溶于10毫升的去离子水中，充分震荡使得海藻酸钠充分溶解，从而得到5毫克每毫升的海藻酸钠溶液。制备碘-131标记的过氧化氢酶。将碘-131原液50微升和0.1毫克每毫升的氯胺-T溶液100微升混合并加入加入500微升的PBS或者生理盐水，随后将碘-131和氯胺-T的混合液加入500微升浓度为5毫克每毫升的人过氧化氢酶中，在涡旋振荡器上震荡混匀5分钟后，室温静置15分钟，15分钟后将混合液转移至15毫升超滤管中4000转离心处理15分钟，加分散介质洗涤3次后取出上层清液，用活度计测量其活度。将海藻酸钠溶液与碘-131标记的过氧化氢酶混合均匀，得到包含过氧化氢酶的组合物，其中过氧化氢酶浓度为5mg/mL-10mg/mL，海藻酸钠浓度为5mg/mL-10mg/mL，放射性核素剂量为200Ci/mL-500Ci/mL。实施例二：制备海藻酸钠溶液。称取50毫克的海藻酸钠溶于10毫升的去离子水中，充分震荡使得海藻酸钠充分溶解，从而得到5毫克每毫升的海藻酸钠溶液。制备碘-131标记的人血清白蛋白。将碘-131原液50微升和100微升0.1毫克每毫升的氯胺-T混合并加入500微升分散介质，随后将碘-131和氯胺-T的混合液加入500微升浓度为5毫克每毫升的人血清白蛋白中，在涡旋振荡器上震荡混匀5分钟后，室温静置15分钟，15分钟后将混合液转移至15毫升超滤管中4000转离心处理15分钟，加分散介质洗涤3次后取出上层清液，用活度计测量其活度。将海藻酸钠溶液、碘-131标记的人血清白蛋白和过氧化氢酶溶液混合均匀，得到包含过氧化氢酶的组合物，其中过氧化氢酶浓度为5mg/mL-10mg/mL，海藻酸盐浓度为5mg/mL-10mg/mL，放射性核素剂量为200Ci/mL-500Ci/mL。实施例三：制备海藻酸钾溶液。称取50毫克的海藻酸钾溶于10毫升的去离子水中，充分震荡使得海藻酸钾充分溶解，从而得到5毫克每毫升的海藻酸钾溶液。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含过氧化氢酶的组合物，其特征在于：包含过氧化氢酶，可溶性海藻酸盐，以及标记在生物大分子上的放射性核素。

【技术特征摘要】
1.一种包含过氧化氢酶的组合物，其特征在于：包含过氧化氢酶，可溶性海藻酸盐，以及标记在生物大分子上的放射性核素。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于该可溶性海藻酸盐可为海藻酸钠、海藻酸钾或其混合物。3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于该放射性核素为碘-131或碘-125。4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于该放射性核素标记在该过氧化氢酶上。5.根据权利要求1-4所述的组合物，其特征在于该过氧化氢酶浓度为5mg/mL-10mg/mL；该海藻酸盐浓度为5mg/mL-10mg/mL；以及该放射性核素剂量为200Ci/mL-500Ci/mL。6.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于该组合物还包含免疫佐剂CpG寡聚脱氧核苷酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘庄，杨凯，巢宇，
申请(专利权)人：苏州杰纳生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32