错折叠蛋白质的检测制造技术
Detection of misfolded proteins
The present invention provides methods and kits for amplification and detection of misfolded proteins from samples such as those suffering from Alzheimer's disease and Parkinson's disease. For example, a method for determining the existence of fault samples in soluble folding proteins may include that the sample with a single protein folding contact to form the incubation mixture; were incubated for two cycles or more times to facilitate the formation of misfolded protein amplification part; the incubation mixture was incubated at least a part of the fault to cause the monomer folding of protein folding and / or aggregation; physical damage to the incubation at least part of education in order to effectively decompose any mixture of protein aggregates exist; and through the detection of the soluble misfolded protein to determine at least a portion of the soluble faults the sample in the presence of protein folding. Single fold protein and soluble misfolded protein can exclude prion protein (PrP) and its homologous type.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】错折叠蛋白质的检测相关申请的交叉引用本申请要求2014年9月11日提交的美国临时专利申请No.62/049,306的优先权，该临时专利申请的全部内容以引用方式并入本文。背景蛋白质错折叠病症(PMD)包括：阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、2型糖尿病、亨延顿氏舞蹈病、肌萎缩性侧索硬化、系统性淀粉样变性、朊病毒病等。不同蛋白质的错折叠聚集体可形成并且积聚。除了其他效应外，错折叠聚集体可诱发细胞功能障碍和组织损伤。例如，阿尔茨海默氏病(AD)和帕金森氏病(PD)是无有效治疗或准确临床前诊断的退行性脑障碍。在AD中，例如，迄今的证据表明，淀粉样-β蛋白(Aβ)的错折叠、聚集和脑沉积可为AD病状的触发因素。虽然Aβ斑块最初被认为是疾病的标志，但当前的研究表明，可溶性Aβ低聚物可能是引起AD中神经变性的关键突触-毒性物质。因为大脑的再生能力低，所以PMD的早期诊断对于允许在发生不可逆神经病理变化之前进行干预而言是至关重要的。若干条证据表明，错折叠和低聚过程可以在临床症状和实质性脑损伤发作前的几年或几十年开始。缺乏广泛接受的早期、灵敏以及客观的实验室诊断对于罹患PMD患者的护理而言仍然是主要问题。本申请意识到，对蛋白质错折叠进行检测(例如)以诊断相关疾病可能是一项充满挑战性的工作。概述在一个实施方案中，提供了一种用于确定样品中可溶性错折叠蛋白质的存在的方法。所述方法可包括使样品与单体折叠蛋白质接触以形成孵育混合物。所述方法可包括进行孵育循环两次或更多次以有效形成错折叠蛋白质的扩增部分。每个孵育循环可包括对孵育混合物进行孵育以在可溶性错折叠蛋白质的存在下有效引起单体折叠蛋白质的至...
【技术保护点】
一种用于确定样品中可溶性错折叠蛋白质的存在的方法，其包括：使所述样品与对应于所述可溶性错折叠蛋白质的单体折叠蛋白质接触以形成孵育混合物；进行孵育循环两次或更多次以有效形成错折叠蛋白质的扩增部分，每个孵育循环包括：对所述孵育混合物进行孵育以在所述可溶性错折叠蛋白质的存在下有效引起所述单体折叠蛋白质的至少一部分的错折叠和/或聚集；物理地破坏所述孵育混合物以有效分解所存在的任何蛋白质聚集体的至少一部分；和通过检测所述可溶性错折叠蛋白质的至少一部分来确定所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的存在，所述可溶性错折叠蛋白质包括下列的一种或多种：可溶性错折叠单体和可溶性错折叠聚集体；并且所述错折叠蛋白质的扩增部分包括下列的一种或多种：所述可溶性错折叠单体的扩增部分、所述可溶性错折叠聚集体的扩增部分以及不溶性错折叠聚集体，前提条件是所述单体折叠蛋白质和所述可溶性错折叠蛋白质排除朊病毒蛋白质(PrP)及其同种型。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.09.11 US 62/049,3061.一种用于确定样品中可溶性错折叠蛋白质的存在的方法，其包括：使所述样品与对应于所述可溶性错折叠蛋白质的单体折叠蛋白质接触以形成孵育混合物；进行孵育循环两次或更多次以有效形成错折叠蛋白质的扩增部分，每个孵育循环包括：对所述孵育混合物进行孵育以在所述可溶性错折叠蛋白质的存在下有效引起所述单体折叠蛋白质的至少一部分的错折叠和/或聚集；物理地破坏所述孵育混合物以有效分解所存在的任何蛋白质聚集体的至少一部分；和通过检测所述可溶性错折叠蛋白质的至少一部分来确定所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的存在，所述可溶性错折叠蛋白质包括下列的一种或多种：可溶性错折叠单体和可溶性错折叠聚集体；并且所述错折叠蛋白质的扩增部分包括下列的一种或多种：所述可溶性错折叠单体的扩增部分、所述可溶性错折叠聚集体的扩增部分以及不溶性错折叠聚集体，前提条件是所述单体折叠蛋白质和所述可溶性错折叠蛋白质排除朊病毒蛋白质(PrP)及其同种型。2.根据权利要求1所述的方法，其还包括使所述可溶性错折叠蛋白质的指示剂与所述孵育混合物接触，所述可溶性错折叠蛋白质的指示剂的特征为在存在所述可溶性错折叠蛋白质时的指示状态以及在不存在所述可溶性错折叠蛋白质时的非指示状态；并且其中所述确定所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的存在包括检测所述可溶性错折叠蛋白质的所述指示剂的所述指示状态。3.根据权利要求2所述的方法，所述指示剂的所述指示状态和所述指示剂的所述非指示状态的特征为荧光的差异，所述确定所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的存在包括检测荧光的所述差异。4.根据权利要求2所述的方法，其包括使摩尔过量的所述可溶性错折叠蛋白质的所述指示剂与所述孵育混合物接触，所述摩尔过量大于所述孵育混合物中的所述单体折叠蛋白质和所述可溶性错折叠蛋白质中所包括的蛋白质单体的总摩尔量。5.根据权利要求2所述的方法，所述可溶性错折叠蛋白质的指示剂包括下列的一种或多种：硫磺素T、刚果红、m-I-均二苯代乙烯、柯胺G、PIB、BF-227、X-34、TZDM、FDDNP、MeO-X-04、IMPY、NIAD-4、发光共轭聚噻吩、荧光蛋白及其衍生物。6.根据权利要求1所述的方法，所述确定所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的存在包括确定所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的量。7.根据权利要求6所述的方法，其包括以下列中至少约一个或多个的敏感性来检测所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的量：80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％。8.根据权利要求6所述的方法，其包括检测所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的量，所述量小于下列中的约一个或多个：100nmol、10nmol、1nmol、100pmol、10pmol、1pmol、100fmol、10fmol、3fmol、1fmol、100attomol、10attomol和1attomol。9.根据权利要求6所述的方法，其包括以与所述样品中所含的单体折叠蛋白质的摩尔比率来检测所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的量，所述摩尔比率小于下列中的约一个或多个：1:100、1:10,000、1:100,000和1:1,000,000。10.根据权利要求1所述的方法，其包括以下列中至少约一个或多个的特异性来检测所述样品中的所述可溶性错折叠蛋白质：80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％。11.根据权利要求1所述的方法，其包括制备包含浓度为下列中一个或多个的所述单体折叠蛋白质的所述孵育混合物：介于约1nM和约2mM之间；介于约10nM和约200μM之间；介于约100nM和约20μM之间；介于约1μM和约10μM之间；约7μM；和约2μM。12.根据权利要求1所述的方法，其包括制备包含缓冲组合物的所述孵育混合物，所述缓冲组合物包括Tris-HCL、PBS、MES、PIPES、MOPS、BES、TES和HEPES中的一个或多个，所述孵育混合物包含总浓度介于约1μm和约1M之间的所述缓冲组合物。13.根据权利要求1所述的方法，其包括制备包含总浓度介于约1μm和约500mM之间的盐组合物的所述孵育混合物。14.根据权利要求13所述的方法，所述盐组合物包含下列的一种或多种：NaCl和KCl。15.根据权利要求1所述的方法，其包括用下列中一个或多个pH制备或维持所述孵育混合物：介于约5和约9之间；介于约6和约8.5之间；介于约7和约8之间；和约7.4。16.根据权利要求1所述的方法，所述孵育包括在下列的一个或多个温度下对所述孵育混合物进行孵育：介于约4℃和约60℃之间；介于约4℃和约35℃之间；介于约8℃和约50℃之间；介于约12℃和约40℃之间；介于约18℃和约30℃之间；介于约18℃和约26℃之间；和约22℃。17.根据权利要求1所述的方法，所述确定所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的存在包括确定与对照样品比较的所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的量。18.根据权利要求1所述的方法，所述检测所述可溶性错折叠蛋白质包括下列中的一种或多种：蛋白质印迹测定、斑点印迹测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、硫磺素T结合测定、刚果红结合测定、沉淀测定、电子显微术、原子力显微术、表面等离子体共振和光谱法。19.根据权利要求18所述的方法，所述ELISA包括双面夹心ELISA。20.根据权利要求18所述的方法，所述光谱法包括下列的一种或多种：准光散射光谱法、多光谱紫外光谱法、共焦双色荧光相关光谱法、傅里叶变换红外光谱法、毛细管电泳与光谱检测、电子自旋共振光谱法、核磁共振光谱法和荧光共振能量转移(FRET)光谱法。21.根据权利要求1所述的方法，所述检测所述可溶性错折叠蛋白质包括：使所述孵育混合物与蛋白酶接触；和使用抗错折叠蛋白质抗体以下列的一种或多种测定来检测所述可溶性错折叠蛋白质：蛋白质印迹测定、斑点印迹测定和ELISA。22.根据权利要求1所述的方法，其还包括提供呈标记形式的单体折叠蛋白质。23.根据权利要求22所述的方法，呈所述标记形式的所述单体折叠蛋白质包括下列的一种或多种：共价结合的放射性氨基酸、共价结合的同位素标记的氨基酸和共价结合的荧光团。24.根据权利要求22所述的方法，所述检测所述可溶性错折叠蛋白质包括检测掺入所述错折叠蛋白质的扩增部分的呈标记形式的所述单体折叠蛋白质。25.根据权利要求1所述的方法，所述样品从受试者获取，所述方法还包括根据所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的存在来确定或诊断所述受试者的蛋白质错折叠病症(PMD)的存在。26.根据权利要求25所述的方法，所述PMD包括下列的至少一种：淀粉样变性；突触核蛋白病；三联体重复病症；和肌萎缩性侧索硬化。27.根据权利要求25所述的方法，所述PMD包括下列的至少一种：阿尔茨海默氏病和系统性淀粉样变性。28.根据权利要求25所述的方法，所述PMD包括下列的至少一种：帕金森氏病、路易体痴呆；多系统萎缩；和突触核蛋白相关的神经轴性营养不良。29.根据权利要求25所述的方法，所述PMD包括亨延顿氏舞蹈病。30.根据权利要求1所述的方法，所述样品从受试者获取，所述方法还包括根据与从对照受试者获取的对照样品比较的所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的存在来确定或诊断所述受试者中PMD的存在。31.根据权利要求1所述的方法，所述检测包括检测所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的量，所述样品从受试者获取，所述方法还包括通过将所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的量与预定阈值量比较来确定或诊断所述受试者中PMD的存在。32.根据权利要求1所述的方法，所述样品从根据认知测试未表现出痴呆临床征象的受试者获取，所述方法还包括根据所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的存在来确定或诊断所述受试者中PMD的存在。33.根据权利要求1所述的方法，所述样品从根据β淀粉样蛋白对比成像未表现出皮质斑块或缠结的受试者获取，所述方法还包括根据所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的存在来确定或诊断所述受试者中PMD的存在。34.根据权利要求1所述的方法，所述样品从根据认知测试表现出痴呆临床征象的受试者获取，所述方法还包括根据所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的存在来确定或诊断作为所述受试者的所述痴呆临床征象的促成因素的PMD的存在。35.根据权利要求1所述的方法，所述样品从根据认知测试未表现出痴呆临床征象的受试者获取，所述方法还包括根据所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的存在来确定或诊断所述受试者中PMD的存在。36.根据权利要求1所述的方法，所述样品包括下列的一种或多种：羊水；胆汁；血液；脑脊液；耳垢；皮肤；渗出液；排泄物；胃液；淋巴；乳汁；粘液；粘膜；腹膜液；血浆；胸膜腔积液；脓液；唾液；皮脂；精液；汗液；滑液；泪液；和尿液。37.根据权利要求1所述的方法，其还包括从受试者获得所述样品。38.根据权利要求37所述的方法，所述受试者为下列之一：人、小鼠、大鼠、狗、猫、牛、马、鹿、麋鹿、绵羊、山羊、猪和非人灵长类动物。39.根据权利要求37所述的方法，所述受试者处于下列的一种或多种情况：处于PMD风险；患有所述PMD；及处于针对所述PMD的治疗。40.根据权利要求1所述的方法，所述样品从受试者获取，所述方法还包括通过将所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的量与相较于所述样品在不同的时间从所述受试者获取的比较样品中的所述错折叠蛋白质的量进行比较来确定所述受试者的PMD的进展或稳态。41.根据权利要求1所述的方法，所述受试者用PMD调节疗法来治疗，所述方法还包括：将所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的量与比较样品中所述可溶性错折叠蛋白质的量进行比较，所述样品和所述比较样品在所述PMD调节疗法下的时段中的不同时间从所述受试者获取；和确定所述受试者具有下列情况之一：根据所述时段中所述可溶性错折叠蛋白质的变化对所述PMD调节疗法有响应，或根据所述时段中所述可溶性错折叠蛋白质的稳态对所述PMD调节疗法无响应。42.根据权利要求41所述的方法，其还包括用PMD调节疗法来治疗经确定对所述PMD调节疗法有响应的所述受试者。43.根据权利要求1所述的方法，所述样品从受试者获取，所述受试者用PMD调节疗法治疗以抑制所述单体折叠蛋白质的产生或抑制所述可溶性错折叠蛋白质的聚集。44.根据权利要求1所述的方法，其还包括选择性地浓缩所述样品和所述孵育混合物的一种或多种中的所述可溶性错折叠蛋白质。45.根据权利要求44所述的方法，所述选择性地浓缩所述可溶性错折叠蛋白质包括在形成所述孵育混合物之前预处理所述样品。46.根据权利要求44所述的方法，所述选择性地浓缩所述可溶性错折叠蛋白质包括在对所述孵育混合物进行孵育之前预处理所述孵育混合物。47.根据权利要求44所述的方法，所述选择性地浓缩所述可溶性错折叠蛋白质包括使一种或多种可溶性错折叠蛋白质特异性抗体与所述可溶性错折叠蛋白质接触以形成捕获的可溶性错折叠蛋白质。48.根据权利要求47所述的方法，一种或多种可溶性错折叠蛋白质特异性抗体包括下列的一种或多种：对所述可溶性错折叠蛋白质的氨基酸序列具有特异性的抗体，和对所述可溶性错折叠蛋白质的构象具有特异性的抗体。49.根据权利要求47所述的方法，所述一种或多种可溶性错折叠蛋白质特异性抗体偶联至固相。50.根据权利要求49所述的方法，所述固相包括磁珠和多孔板中的一种或多种。51.根据权利要求49所述的方法，所述使所述样品与所述单体折叠蛋白质接触以形成所述孵育混合物包括使接触摩尔过量的所述单体折叠蛋白质与包含所述捕获的可溶性错折叠蛋白质的所述样品接触，所述单体折叠蛋白质的所述摩尔过量大于所述捕获的可溶性错折叠蛋白质中所包括的蛋白质单体的总摩尔量。52.根据权利要求49所述的方法，对所述孵育混合物进行所述孵育在所述捕获的可溶性错折叠蛋白质的存在下有效引起所述单体折叠蛋白质的至少一部分的错折叠和/或聚集，从而形成所述错折叠蛋白质的扩增部分。53.根据权利要求1所述的方法，所述蛋白质聚集体包括下列的一种或多种：所述单体蛋白质、所述可溶性错折叠蛋白质以及所述可溶性错折叠蛋白质的捕获形式。54.根据权利要求1所述的方法，所述物理地破坏所述孵育混合物包括下列的一种或多种：超声处理、搅拌、振荡、冷冻/解冻、激光辐照、高压釜孵育、高压和均质化。55.根据权利要求1所述的方法，所述物理地破坏所述孵育混合物包括循环搅动。56.根据权利要求55所述的方法，所述循环搅动以下列的一个或多个进行：介于约50转/分钟(RPM)和10,000RPM之间、介于约200RPM和约2000RPM之间以及约500RPM。57.根据权利要求1所述的方法，所述物理地破坏所述孵育混合物在每个孵育循环中进行下列的一个或多个时间：介于约5秒和约10分钟之间、介于约30秒和约1分钟之间、介于约45秒和约1分钟之间以及约1分钟。58.根据权利要求1所述的方法，对所述孵育混合物进行所述孵育在每个孵育循环中独立地进行下列的一个或多个时间：介于约5分钟和约5小时之间、介于约10分钟和约2小时之间、介于约15分钟和约1小时之间以及介于约25分钟和约45分钟之间。59.根据权利要求1所述的方法，每个孵育循环包括将所述孵育混合物独立地孵育且物理地破坏下列的一个或多个时间：孵育介于约5分钟和约5小时之间且物理地破坏介于约5秒和约10分钟之间；孵育介于约10分钟和约2小时之间且物理地破坏介于约30秒和约1分钟之间；孵育介于约15分钟和约1小时之间且物理地破坏介于约45秒和约1分钟之间；孵育介于约25分钟和约45分钟之间且物理地破坏介于约45秒和约1分钟之间；以及孵育约1分钟且物理地破坏约1分钟。60.根据权利要求1所述的方法，所述进行所述孵育循环重复下列的一个或多个：介于约2次和约1000次之间、介于约5次和约500次之间、介于约50次和约500次之间以及介于约150次和约250次之间。61.根据权利要求1所述的方法，对所述孵育混合物进行所述孵育在每个孵育循环中在介于约15℃和约50℃之间的温度下独立地进行。62.根据权利要求1所述的方法，所述使所述样品与所述单体折叠蛋白质接触以形成所述孵育混合物在生理条件下进行。63.根据权利要求1所述的方法，其包括使所述样品与摩尔过量的所述单体折叠蛋白质接触以形成所述孵育混合物，所述摩尔过量大于所述样品中的所述可溶性错折叠蛋白质中所包括的蛋白质单体的总摩尔量。64.根据权利要求1所述的方法，其包括：使所述样品与硫磺素T和摩尔过量的所述单体折叠蛋白质接触以形成所述孵育混合物，所述摩尔过量大于所述样品中的所述可溶性错折叠蛋白质中所包括的蛋白质单体的量；进行所述孵育循环两次或更多次以有效形成所述错折叠蛋白质的扩增部分，每个孵育循环包括：对所述孵育混合物进行孵育以在所述可溶性错折叠蛋白质的存在下有效引起所述单体折叠蛋白质的至少所述部分的错折叠和/或聚集；振荡所述孵育混合物以有效分解所存在的任何蛋白质聚集体的至少所述部分；和通过检测与所述可溶性错折叠蛋白质对应的所述硫磺素T的荧光来确定样品中所述可溶性错折叠蛋白质的存在，所述可溶性错折叠蛋白质包括下列的一种或多种：可溶性错折叠单体和可溶性错折叠聚集体；并且所述错折叠蛋白质的扩增部分包括下列的一种或多种：所述可溶性错折叠单体的扩增部分、所述可溶性错折叠聚集体的扩增部分以及不溶性错折叠聚集体。65.根据权利要求1所述的方法，所述单体折叠蛋白质由下列之一产生：化学合成、重组产生和从非重组生物样品提取。66.根据权利要求1所述的方法，所述可溶性错折叠蛋白质基本上为所述可溶性错折叠聚集体。67.根据权利要求1所述的方法，所述错折叠蛋白质的扩增部分基本上为下列的一种或多种：所述可溶性错折叠聚集体的所述扩增部分和所述不溶性错折叠聚集体。68.根据权利要求1所述的方法，所提供的所述样品排除αS原纤维和tau原纤维。69.一种用于确定样品中可溶性错折叠蛋白质的存在的方法，其包括：从所述样品捕获可溶性错折叠蛋白质以形成捕获的可溶性错折叠蛋白质；使所述捕获的可溶性错折叠蛋白质与摩尔过量的对应于所述可溶性错折叠蛋白质的单体折叠蛋白质接触以形成孵育混合物，所述摩尔过量大于所述捕获的可溶性错折叠蛋白质中所包括的蛋白质单体的量；进行孵育循环两次或更多次以有效形成错折叠蛋白质的扩增部分，每个孵育循环包括：对所述孵育混合物进行孵育以在所述捕获的可溶性错折叠蛋白质的存在下有效引起所述单体折叠蛋白质的至少一部分的错折叠和/或聚集；物理地破坏所述孵育混合物以有效分解所存在的任何蛋白质聚集体的至少一部分；和通过检测所述可溶性错折叠蛋白质的至少一部分来确定所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的存在，所述可溶性错折叠蛋白质包括下列的一种或多种：可溶性错折叠单体和可溶性错折叠聚集体；所述捕获的可溶性错折叠蛋白质包括下列的一种或多种：捕获的可溶性错折叠单体和捕获的可溶性错折叠聚集体；并且所述错折叠蛋白质的扩增部分包括下列的一种或多种：所述可溶性错折叠单体的扩增部分、所述可溶性错折叠聚集体的扩增部分以及不溶性错折叠聚集体，前提条件是所述单体折叠蛋白质和所述可溶性错折叠蛋白质排除朊病毒蛋白质(PrP)及其同种型。70.根据权利要求69所述的方法，其还包括使所述可溶性错折叠蛋白质的指示剂与所述孵育混合物接触，所述可溶性错折叠蛋白质的指示剂的特征为在存在所述可溶性错折叠蛋白质时的指示状态以及在不存在所述可溶性错折叠蛋白质时的非指示状态；并且其中所述确定所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的存在包括检测所述可溶性错折叠蛋白质的所述指示剂的所述指示状态。71.根据权利要求69所述的方法，所述指示剂的所述指示状态和所述指示剂的所述非指示状态的特征为荧光的差异，所述确定所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的存在包括检测荧光的所述差异。72.根据权利要求69所述的方法，其包括使摩尔过量的所述可溶性错折叠蛋白质的所述指示剂与所述孵育混合物接触，所述摩尔过量大于所述孵育混合物中的所述单体蛋白质、所述可溶性折叠蛋白质和所述捕获的可溶性错折叠蛋白质中所包括的蛋白质单体的总摩尔量。73.根据权利要求69所述的方法，所述可溶性错折叠蛋白质的指示剂包括下列的一种或多种：硫磺素T、刚果红、m-I-均二苯代乙烯、柯胺G、PIB、BF-227、X-34、TZDM、FDDNP、MeO-X-04、IMPY、NIAD-4、发光共轭聚噻吩、荧光蛋白及其衍生物。74.根据权利要求69所述的方法，所述确定所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的存在包括确定所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的量。75.根据权利要求73所述的方法，其包括以下列中至少约一个或多个的敏感性来检测所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的量：80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％。76.根据权利要求73所述的方法，其包括检测所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的量，所述量小于下列中的约一个或多个：100nmol、10nmol、1nmol、100pmol、10pmol、1pmol、100fmol、10fmol、3fmol、1fmol、100attomol、10attomol和1attomol。77.根据权利要求73所述的方法，其包括以与所述样品中所含的单体折叠蛋白质的摩尔比率来检测所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的量，所述摩尔比率小于下列中的约一个或多个：1:100、1:10,000、1:100,000和1:1,000,000。78.根据权利要求69所述的方法，其包括以下列中至少约一个或多个的特异性来检测所述样品中的所述可溶性错折叠蛋白质：80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％。79.根据权利要求69所述的方法，其包括制备包含浓度为下列中一个或多个的所述单体折叠蛋白质的所述孵育混合物：介于约1nM和约2mM之间；介于约10nM和约200μM之间；介于约100nM和约20μM之间；介于约1μM和约10μM之间；和约2μM。80.根据权利要求69所述的方法，其包括制备包含缓冲组合物的所述孵育混合物，所述缓冲组合物包括Tris-HCL、PBS、MES、PIPES、MOPS、BES、TES和HEPES中的一个或多个，所述孵育混合物包含总浓度介于约1μm和约1M之间的所述缓冲组合物。81.根据权利要求79所述的方法，其包括制备包含总浓度介于约1μm和约500mM之间的盐组合物的所述孵育混合物。82.根据权利要求80所述的方法，所述盐组合物包含下列的一种或多种：NaCl和KCl。83.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：C·S·捷瑞，M·沙赫纳瓦兹，R·M·莱博维兹，B·K·沃尔拉特，
申请(专利权)人：德克萨斯大学系统董事会，安培里翁公司，C·S·捷瑞，M·沙赫纳瓦兹，R·M·莱博维兹，B·K·沃尔拉特，
类型：发明
国别省市：美国,US
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