分离、除去、和分析细胞的方法技术

本发明专利技术目的在于提供一种分离、除去、和分析细胞的方法。提供的前述分离、除去、和分析细胞的方法包括，将包含细胞的液体样品通过聚酰亚胺多孔膜过滤，针对未能通过聚酰亚胺多孔膜而被膜捕捉的细胞、或通过聚酰亚胺多孔膜的液体样品中的细胞，对选自由以下组成的组的一个以上的细胞的特性进行检查：细胞的数量或种类，细胞的外部或内部结构，细胞表面抗原的种类或量，细胞来源的分泌物质的种类或量、细胞附着性和细胞生存率。

Method for separating, removing, and analyzing cells

The present invention aims at providing a method for separating, removing, and analyzing cells. Provide the separation, removal, and analysis method of cell including, will contain the liquid sample cell through polyimide porous membrane filtration, the failed polyimide porous membrane by membrane capture cells, or by liquid samples of polyimide porous membrane of cells, composed of the following characteristics of selected groups of more than one cells were examined: the number or types of cells, cells of the external or internal structure, the type or amount of cell surface antigen, type or quantity, cell secreted cells adhesion and cell survival rate.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】分离、除去、和分析细胞的方法
本专利技术涉及，使用聚酰亚胺多孔膜，分离、除去、和分析细胞的方法。
技术介绍
细胞的特性细胞在体内一般作为三维群体存在，在经典的平面培养中，细胞以粘到容器的形式单层培养。由于培养环境的差异，细胞性质也显著不同的情况被报告许多。此外，对于在液体培养培养基中培养细胞的悬浮培养，存在适合于悬浮培养的细胞，也不适合于悬浮培养的的细胞。近年来，通过药物发现研究的加速和评价技术的改进，使用这些细胞的各种评价体系和试剂盒已经被开发出来。通过将物质产生量通过抗原抗体反应和酶反应的组合作为显色反应的ELISA试剂盒或由两个对象部位的接近度将发生能量转移的现象作为光进行测量的形式而被利用的FRET和BRET等，通过许多原理，新的高灵敏度，高强度和高选择性的方法已被开创(非专利文献1和2)。在这些筛选方法，将细胞转移现象作为原理的各种试剂盒与方法也被制定并实施。例如专利文献1中记载的，在汇合的培养细胞中制备孔部，并将所述孔部的填充现象作为伤口愈合速度而进行比较的方法，如在专利文献2中记载的，通过插入培养样(インサートカルチャー)的结构穿过一定大小的多个孔，由细胞的移动比较化合物趋化性的方法已被开发。特别是，在专利文献2中记载的方法已经以各种形式应用和实现。此外，如通过将细胞运动本身作为目标捕捉、并确定细胞布朗运动和原形质流动流动、追查原形质流动流动、进行评价的专利文献3或活用喷墨、在狭窄的区域中规则播种大量细胞、对该运动进行示踪调查的专利文献4这样的尝试也正在进行。当将使用细胞运行性能和转移现象用于药物开发等的评价，由以前的研究组在定量性和明确性方面所表示，由于能够澄清深感兴趣的细胞的特性，成为非常有吸引力的方法，但是，在另一方面，非常复杂的系统和复杂设备成为必要的情况和时间或处理中需要很多功夫的情况有许多，更简单、快速评价方法的建设已被期望。此外，从生物体来源的样品取决于或生物体的一部分或所有的状态、其中包含的细胞可以变化的情况存在。例如，基于细胞的状态变化，与某种病因关联、除去活化的白细胞的治疗法也被知晓。血液样品来源的血液成分除去疗法血液，以白细胞和红细胞作为起始，包含许多细胞种类。对于如自身免疫性疾病的细胞性疾病，活性过高自细胞导致过度反应的情况被知道，由药物导致的免疫反应的抑制或细胞本身的消除，被用作医疗实践而采用。例如，将珠或纤维填充为圆柱状，在其空间中使血液通过，由此将高附着性淋巴细胞和细胞除去，由此对风湿性疾病和克罗恩氏病或溃疡性结肠炎等进行治疗的方法已被知道(专利文献5、6、7和非专利文献3)。此外，验证对于呼吸系统疾病的有效性的研究被显示(非专利文献4)。此外，将抗体固定化至表面上的珠包装为柱形状，选择地获得呈递的相同抗原的细胞的方法也有报道(专利文献8)。这些载体使用纤维或珠(小珠)等，在结构上是线性的和球形的集合体，缺乏与生物体结构的相似性，并非具有在结构上取得细胞的特性，因此，提供许多机会，吸附附着性强的细胞是有必要的。长时间接触设备，诱导意想不到血栓形成和血细胞活化成为主要原因，因此，更简单快速和血液活化性能低的细胞除去方法已经被期望。因此，如果不仅血细胞，而且生物体来源的样品中细胞的特性能够被简单和快速地评估，则导致生物体的简单和快速的评估被涉及。聚酰亚胺多孔膜聚酰亚胺是在重复单元中包含酰亚胺键的高分子(聚合物)的总称，通常是指芳族化合物通过直接酰亚胺键连接的芳族聚酰亚胺。芳族聚酰亚胺具有芳族和芳族通过酰亚胺键的共轭结构，具有刚硬、牢固的分子结构，并且酰亚胺键具有强的分子间力，因此，具有非常高水平的热的、机械的、化学的性质。聚酰亚胺多孔膜过滤器在本专利技术前更多地用于滤器，低介电常数膜，燃料电池电解质膜，特别地以电池关系中心的用途。专利文献9-11中记载了，特别是在气体等物质透过性中是优异的，孔隙率高，两个表面的平滑性优异，相对强度高，孔隙率高，但是对于膜厚度方向的压缩应力耐力优良的具有大量大孔隙的聚酰亚胺多孔膜。这些都是经由酰胺酸制备聚酰亚胺多孔膜。现有技术文献专利文献【专利文献1】特许(特許)第3682772号【专利文献2】特许(特許)第4857292号【专利文献3】特许(特許)第4507060号【专利文献4】特许(特許)第5024823号【专利文献5】特许(特許)第2835923号【专利文献6】特许(特許)第3812909号【专利文献7】特许(特許)第4473324号【专利文献8】特许(特許)第4196592号【专利文献9】WO2010/038873【专利文献10】特开(特開)2011－219585【专利文献11】特开(特開)2011－219586【非专利文献】【非专利文献1】ORISTMCELL-BASEDASSAYSbrochure【非专利文献2】ASCB2014POSTER,AnAutomatable3-DimensionalCellInvasionAssayCompatiblewithHighContentAnalysis,Fronczaket.Al.【非专利文献3】Hagiwara等人,JournalofSurgicalResearch171,777-782(2011)【非专利文献4】ONORATI等人.AnnThoracSurg2011；92:111-21专利技术概述专利技术要解决的课题本专利技术目的是提供，分离、除去、和/或分析细胞的方法，细胞活化抑制物质的筛选方法，用于本专利技术方法的装置和试剂盒，和，聚多孔膜在本专利技术的的方法中的用途。使用于解决课题的手段本专利技术人努力以解决上述问题，结果是发现，通过使用聚酰亚胺多孔膜容易且迅速地分离、除去、并且分析细胞，从而完成本专利技术。本专利技术的方法也可用于对细胞特性无影响的物质的筛选。不存在限制，但是，本专利技术优选包括以下方式。[方式1]分离、除去、和/或分析细胞的方法，其包括，将包含细胞的液体样品通过聚酰亚胺多孔膜过滤，针对未能通过聚酰亚胺多孔膜而被膜捕捉的细胞、或通过聚酰亚胺多孔膜的液体样品中的细胞，对选自由以下组成的组的一个以上的细胞的特性进行检查：细胞的数量或种类，细胞的外部或内部结构，细胞表面抗原的种类或量，细胞来源的分泌物质的种类或量、细胞附着性和细胞生存率。[方式2]方式1中记载的方法，成为对象的细胞是活化的细胞。[方式3]方式2中记载的方法，活化细胞是活化白细胞。[方式4]方式1～3的任一项中记载的方法，包括在过滤工序前，将聚酰亚胺多孔膜的表面的全部或一部分预处理的工序。[方式5]方式4中记载的方法，聚酰亚胺多孔膜的表面处理使用选自由以下组成的组的一种以上试剂或处理方法来进行：抗凝血剂，胶原蛋白，聚-L-赖氨酸，UV，等离子体和结合亲水树脂的PDS。[方式6]方式1～5的任一项中记载的方法，包括向含有细胞的液体样品中添加细胞活化剂后，培养细胞，然后将所述液体样品通过聚酰亚胺多孔膜过滤。[方式7]一种用于筛选细胞活化抑制物质的方法，其包括(i)任选地向含有细胞的液体样品中添加细胞活化剂后，培养细胞，(ii)向(i)的液体样品中添加测试物质，(iii)将(ii)的液体样品通过聚酰亚胺多孔膜过滤，针对未能通过聚酰亚胺多孔膜而被膜捕捉的细胞、或通过聚酰亚胺多孔膜的液体样品中的细胞，对选自由以下组成的组的一个以本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离、除去、和/或分析细胞的方法，其包括，将包含细胞的液体样品通过聚酰亚胺多孔膜过滤，针对未能通过聚酰亚胺多孔膜而被膜捕捉的细胞、或通过聚酰亚胺多孔膜的液体样品中的细胞，对选自由以下组成的组的一个以上的细胞的特性进行检查：细胞的数量或种类，细胞的外部或内部结构，细胞表面抗原的种类或量，细胞来源的分泌物质的种类或量、细胞附着性和细胞生存率。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.01.26 JP 2015-012850;2015.01.26 JP 2015-012851.分离、除去、和/或分析细胞的方法，其包括，将包含细胞的液体样品通过聚酰亚胺多孔膜过滤，针对未能通过聚酰亚胺多孔膜而被膜捕捉的细胞、或通过聚酰亚胺多孔膜的液体样品中的细胞，对选自由以下组成的组的一个以上的细胞的特性进行检查：细胞的数量或种类，细胞的外部或内部结构，细胞表面抗原的种类或量，细胞来源的分泌物质的种类或量、细胞附着性和细胞生存率。2.权利要求1中记载的方法，成为对象的细胞是活化的细胞。3.权利要求2中记载的方法，活化的细胞是活化白细胞。4.权利要求1～3中任一项中记载的方法，包括在过滤工序前，将聚酰亚胺多孔膜的表面的全部或一部分预处理的工序。5.权利要求4中记载的方法，聚酰亚胺多孔膜的表面处理使用选自由以下组成的组的一种以上试剂或处理方法来进行：抗凝血剂，胶原蛋白，聚-L-赖氨酸，UV，等离子体和结合亲水树脂的PDS。6.权利要求1-5中任一项中记载的方法，包括向含有细胞的液体样品中添加细胞活化剂后，培养细胞，然后将所述液体样品通过聚酰亚胺多孔膜过滤。7.一种用于筛选细胞活化抑制物质的方法，其包括(i)任选地向含有细胞的液体样品中添加细胞活化剂后，培养细胞，(ii)向(i)的液体样品中添加测试物质，(iii)将(ii)的液体样品通过聚酰亚胺多孔膜过滤，针对未能通过聚酰亚胺多孔膜而被膜捕捉的细胞、或通过聚酰亚胺多孔膜的液体样品中的细胞，对选自由以下组成的组的一个以上的细胞的特性进行检查：细胞的种类或数量，细胞的外部或内部结构，细胞表面抗原的种类或量，细胞来源的分泌物质的种类或量、细胞附着性和细胞生存率，并且，(iv)如果未能通过聚酰亚胺多孔膜而被膜捕捉的细胞中、活化的细胞的比例和/或数目比(ii)的工序中没有加...

【专利技术属性】
技术研发人员：深水昭吉，金俊达，萩原昌彦，和田幸周，
申请(专利权)人：宇部兴产株式会社，国立大学法人筑波大学，
类型：发明
国别省市：日本,JP