The invention provides an application of a cell cycle blocker 6BAR in human lung cancer cells, belonging to the technical field of Biochemistry and molecular biology. Application of a cell cycle inhibitor 6BAR in human lung cancer cells as follows: (2) cells; cell culture; drug preparation; (3) (4) treated cells; (5) to detect the cell proliferation inhibition rate; (6) detection of cell cycle. The invention of the synthetic data to establish DNA synthesis and DNA synthesis can interfere with tumor cells in nucleoside analogues in need of purine and pyrimidine, purine and pyrimidine nucleotides inhibits tumor cell survival and reproduction on the basis of.
【技术实现步骤摘要】
一种细胞周期阻滞剂6BAR在人肺癌细胞中的应用
本专利技术涉及细胞分裂素N6-benzyladenosine(6BAR)作为一种细胞周期阻滞剂对肺癌细胞株抗肿瘤作用,属于生物化学与分子生物学
技术介绍
肺癌目前是全球范围内发病率及死亡率最高的恶性肿瘤。近20年来,由于大力推行戒烟,欧洲和美国等西方国家男性肺癌的发病率已开始下降,但女性肺癌的发病率却持续上升。我国是香烟生产和销售大国,不论男性还是女性,肺癌的发病率均呈持续上升趋势,尤以女性发病率上升更快。临床研究表明,原位癌治愈率接近100%,I期肺癌患者的5年生存率达60%~90%,而Ⅲb和Ⅳ患者的5年生存率仅5%~20%。临床上用于治疗肺癌的常规药物虽然对治疗起到重要作用,但却存在着明显的毒副作用。经大量实践证明,运用现代技术,从天然产物中获得的天然活性物质的活性成分能治疗肺癌,同时减轻放化疗的毒副作用。因此,寻找有效提高治疗效率,毒副作用小的天然药物来治疗肺癌是十分必要的。细胞分裂素CK(cytokinin)是二十世纪五十年代年被发现的一类植物激素,它在植物的生长发育中起决定性作用,天然存在的细胞分裂素是腺嘌呤的衍生物,是其嘌呤N6位置上的H被其它基团取代形成的。常见的天然存在的细胞分裂素有:玉米素(Zeatin,ZT)、玉米素核苷(Zeatinriboside,ZR)、二氢玉米素(dihydrozeatin,dHZT)、异戊烯基腺苷(isopentenyladenosine,i6A)。目前越来越多的研究发现,CK不仅调节植物的生长发育同时对动物细胞的增值和分化也起到很重要的影响。N6-be ...
【技术保护点】
一种细胞周期阻滞剂6BAR在人肺癌细胞中的应用,其特征在于,步骤如下:(1)细胞复苏:将装有冻存人肺癌细胞株A549的冻存管从‑80℃冰箱中取出,迅速放入37℃水浴锅中,轻微摇动,待液体融化;将冻存管中的人肺癌细胞株A549悬浮于含有10%灭活胎牛血清的无菌RPMI 1640培养液的离心管中,1000rpm,5min离心,离心结束后,弃上清,轻轻弹起细胞,再次入无菌RPMI 1640培养液与离心管中,把细胞悬浮起来,转移到培养瓶中左右轻轻摇动,使培养瓶中的细胞均匀分布,得到复苏的人肺癌细胞株A549;(2)细胞培养:将复苏的人肺癌细胞株A549置于浓度为5%CO2、相对湿度为90%、温度为37℃的培养箱中培养,10h后观察细胞,若已贴壁,将培养液全部吸出,再次加入等量的RPMI 1640培养液;待细胞长至培养瓶底面积的70%~80%传代1次;(3)药物配制:6BAR先用0.1%DMSO溶解,继续用无菌RPMI 1640培养基将用0.1%DMSO溶解好的6BAR稀释,使6BAR溶液的母液浓度达到1mM,继续用无菌RPMI 1640培养基将溶解好的6BAR溶液的母液稀释至浓度为1μM‑50 ...
【技术特征摘要】
1.一种细胞周期阻滞剂6BAR在人肺癌细胞中的应用,其特征在于,步骤如下:(1)细胞复苏:将装有冻存人肺癌细胞株A549的冻存管从-80℃冰箱中取出,迅速放入37℃水浴锅中,轻微摇动,待液体融化;将冻存管中的人肺癌细胞株A549悬浮于含有10%灭活胎牛血清的无菌RPMI1640培养液的离心管中,1000rpm,5min离心,离心结束后,弃上清,轻轻弹起细胞,再次入无菌RPMI1640培养液与离心管中,把细胞悬浮起来,转移到培养瓶中左右轻轻摇动,使培养瓶中的细胞均匀分布,得到复苏的人肺癌细胞株A549;(2)细胞培养:将复苏的人肺癌细胞株A549置于浓度为5%CO2、相对湿度为90%、温度为37℃的培养箱中培养,10h后观察细胞,若已贴壁,将培养液全部吸出,再次加入等量的RPMI1640培养液;待细胞长至培养瓶底面积的70%~80%传代1次;(3)药物配制:6BAR先用0.1%DMSO溶解,继续用无菌RPMI1640培养基将用0.1%DMSO溶解好的6BAR稀释,使6BAR溶液的母液浓度达到1mM,继续用无菌RPMI1640培养基将溶解好的6BAR溶液的母液稀释至浓度为1μM-500μM,过滤除菌,室温保存;(4)处理细胞:将处于对数生长期的细胞用胰酶消化,细胞计数后,稀释,稀释细胞密度为3×104~5×104个/ml,吹打混匀;将细胞接种于96孔板中,每孔取100μl人肺癌细胞株A549,12h后,待细胞贴壁后,设置7组实验,每组4个复孔,第1组:空白对照组;第2组:0....
【专利技术属性】
技术研发人员:王黎,程娇,崔昌浩,林凡琳,张瀚文,于冬丽,邓营营,
申请(专利权)人:大连理工大学,
类型:发明
国别省市:辽宁,21
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