脂肪肝病的生物标志物和其使用方法技术

本文描述了NASH、NAFLD、以及纤维化的生物标志物和用于诊断(或帮助诊断)NAFLD、NASH和/或纤维化的方法。此外，本文描述了辨别NAFLD与NASH的方法；将纤维化的分期分类的方法；确定肝脏疾病的严重程度的方法；确定肝脏疾病或纤维化的严重程度的方法；以及监测NASH、NAFLD、和/或纤维化的进展/消退的方法。

Biomarkers for fatty liver disease and methods of use thereof

This article describes biomarkers of NASH, NAFLD, and fibrosis, and methods for the diagnosis (or diagnosis) of NAFLD, NASH, and / or fibrosis. In addition, this paper describes the method to distinguish between NAFLD and NASH; the classification method of fibrosis; method of determining the severity of liver disease; method of determining the severity of liver disease or fibrosis; and the monitoring of NASH, NAFLD, and / or fibrosis progression / regression method.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】脂肪肝病的生物标志物和其使用方法相关申请的交叉引用本申请要求2014年11月19日提交的美国临时专利申请号62/081,903和2015年4月1日提交的美国临时专利申请号62/141,494的权益，这些美国临时专利申请的全部内容在此以引用的方式并入本文。
本专利技术大体上涉及针对脂肪肝病的生物标志物和基于这些生物标志物的方法。
技术介绍
非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的发病率随着肥胖症的流行的同时而持续增加，所述非酒精性脂肪肝病涵盖了从单纯性良性肝性脂肪变性到非酒精性脂肪性肝炎(NASH)不等的整个组织学谱，特征在于脂质积聚、炎症、肝细胞气球样变、以及不同程度的纤维化。尽管对肥胖症相关肝脏疾病的认识越来越多，但是对NAFLD和NASH的发病机理知之甚少，并且不存在FDA批准的以NASH作为适应症的治疗。对NASH的诊断仍是复杂的并且由于需要进行侵入性肝活检而有显著的风险。因此，鉴定能够在患有或疑似患有肝脏疾病的患者中对NAFLD进行诊断和分期以实现预后目的(即有进展到更晚期的肝脏疾病阶段的风险)的基于血液的代谢物生物标志物的谱是一个显著的未得到满足的医疗需求。肝脏中的脂肪变化是由脂质在肝细胞内过量积聚所引起。脂肪肝是甘油三酯和其它脂肪在肝细胞中的积聚。脂肪肝病可以从单独的脂肪肝(单纯性脂肪肝、脂肪变性)到与肝脏炎症相关的脂肪肝(脂肪性肝炎)不等。尽管在肝脏中有脂肪是不正常的，但是它本身很可能几乎不造成危害或永久性损伤。一般认为脂肪变性是一种良性病况，很少会进展到慢性肝病。相反，脂肪性肝炎可能进展到肝纤维化和肝硬化，可能与肝细胞癌有关并且可能导致肝脏相关的发病和死亡。脂肪变性可以在饮酒(酒精相关脂肪肝)或不存在酒精(非酒精性脂肪肝病，NAFLD)的情况下发生。脂肪性肝炎可能与酒精诱发的肝损伤相关或可能与酒精无关。如果存在脂肪性肝炎，但是没有饮酒史，那么所述病况被称作非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。在不存在酒精的情况下，单纯性脂肪肝(NAFLD)和NASH的主要风险因素是肥胖症、糖尿病、以及高甘油三酯水平。在NASH中，脂肪在肝脏中积累并且最终导致瘢痕组织。这一类型的肝炎似乎与糖尿病、蛋白质营养不良、肥胖症、冠状动脉疾病、以及皮质类固醇药物的治疗相关。15％-50％患有NASH的患者存在肝脏中的纤维化或肝硬化。约30％的患有纤维化的患者在10年之后发展为肝硬化。在美国，脂肪肝病现在是肝功能检查升高的最常见的原因。它现在很可能是造成转氨酶轻度升高的主要原因。脂肪变性影响了一般群体的约25％-35％。在超过80％的肥胖患者中发现NAFLD。NASH影响了2％至5％的美国人并且已经在1.2％-9％的接受常规肝活检的患者中检测到。超过50％的接受减肥手术的患者患有NASH。所述疾病侵袭男性和女性；早期研究报道>70％的病例是发生在女性，但是最近的研究报道50％的患者是女性。脂肪肝发生在所有年龄组。在美国，NASH是青少年当中最常见的肝脏疾病并且是成人的慢性肝病的第三大最常见的原因(继丙型肝炎和酒精之后)。NASH和NAFLD这两者成为更常见的，这可能是因为有更大数目的美国人患有肥胖症。在过去的10年中，肥胖率已经在成人中加倍并且在儿童中增至三倍。肥胖症还导致糖尿病和高血胆固醇，这可能使患有NASH的人的健康进一步复杂化。糖尿病和高血胆固醇在美国人当中也成为更常见的。NASH通常是一种有很少症状或没有症状的隐性疾病。患者一般在早期阶段感觉良好并且只有在疾病变得更晚期或发生肝硬化时，才开始有症状，如疲劳、体重减轻、以及虚弱。NASH的进展可能需要数年，甚至是数十年。所述过程可以停止，并且在一些情况下，在没有特定治疗的情况下，自行逆转。或NASH可以缓慢恶化，从而导致瘢痕形成或“纤维化”在肝脏中出现并且积聚。随着纤维化恶化，发生肝硬化；肝脏变得有严重的瘢痕形成、变硬、并且不能发挥正常功能。并不是每一个患有NASH的人都会发生肝硬化，但是一旦存在严重的瘢痕形成或肝硬化，就很少有治疗能够阻止进展。患有肝硬化的人经历体液潴留、肌肉消瘦、肠道出血、以及肝脏衰竭。肝脏移植是伴有肝脏衰竭的晚期肝硬化的唯一治疗，并且移植越来越多地在患有NASH的人中进行。NASH在美国被列为肝硬化的主要原因之一，位列丙型肝炎和酒精性肝脏疾病之后。通常首先在被发现有被包括在常规血液检查组中的肝脏检查(如丙氨酸转氨酶(ALT)或天冬氨酸转氨酶(AST))升高的人中怀疑NASH。当进一步评价显示没有明显的导致肝脏疾病的原因(如药物、病毒性肝炎、或过量饮酒)时以及当肝脏的X射线或成像研究显示脂肪时，怀疑是NASH。证实NASH的诊断并且将它与单纯性脂肪肝区分的唯一手段是肝活检。肝活检需要将针穿过皮肤插入并且取出一小块肝脏。如果组织显示脂肪而没有炎症和损伤，那么诊断为单纯性脂肪肝或NAFLD。当组织的显微镜检查显示脂肪以及炎症和肝细胞损伤时，诊断为NASH。需要进行活检来确定瘢痕组织是否已经在肝脏中产生。目前，没有血液检查或扫描可以可靠地提供这一信息。因此，对侵入性较小的诊断方法(即不需要活检的方法)存在需要。
技术实现思路
在一个方面，本公开提供了诊断或帮助诊断受试者的肝脏疾病的方法，所述方法包括：分析来自所述受试者的生物样品以确定所述样品中针对肝脏疾病的一种或多种生物标志物的水平，其中所述一种或多种生物标志物选自表12、表2、表3、表4、表5、表7、表8、表10、表11、表14、表16和/或表18；以及将所述样品中所述一种或多种生物标志物的水平与所述一种或多种生物标志物的肝脏疾病阳性和/或肝脏疾病阴性参考水平相比较以诊断所述受试者是否患有肝脏疾病。在另一个方面，本公开提供了诊断或帮助诊断受试者的NASH的方法，所述方法包括：分析来自所述受试者的生物样品以确定所述样品中针对NASH的一种或多种生物标志物的水平，其中所述一种或多种生物标志物选自表7、表8、表10和/或表11；以及将所述样品中所述一种或多种生物标志物的水平与所述一种或多种生物标志物的NASH阳性和/或NASH阴性参考水平相比较以诊断所述受试者是否患有NASH。在另一个方面，本公开提供了诊断或帮助诊断受试者的NAFLD的方法，所述方法包括：分析来自所述受试者的生物样品以确定所述样品中针对NAFLD的一种或多种生物标志物的水平，其中所述一种或多种生物标志物选自表2、表3、表4、表5、表7、表8、表10、和/或表11；以及将所述样品中所述一种或多种生物标志物的水平与所述一种或多种生物标志物的NAFLD阳性和/或NAFLD阴性参考水平相比较以诊断所述受试者是否患有NAFLD。在这个方面的一个特征中，所述一种或多种生物标志物可以选自由以下各项组成的组：5-甲硫基腺苷(5-MTA)、甘氨酸、丝氨酸、亮氨酸、4-甲基-2-氧代戊酸盐、3-甲基-2-氧代戊酸盐、缬氨酸、3-甲基-2-氧代丁酸盐、2-羟基丁酸盐、脯氨酰脯氨酸、羊毛甾醇、牛磺-β-鼠胆酸盐、以及脱氧胆酸盐。在另一个方面，本公开提供了在受试者中辨别NASH与NAFLD的方法，所述方法包括分析来自所述受试者的生物样品以确定所述样品中针对NASH和/或NAFLD的一种或多种生物标志物的水平，其中所述一种或多种生物标志物选自表2、表3、表4、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诊断或帮助诊断受试者是否患有肝脏疾病的方法，所述方法包括：分析来自受试者的生物样品以确定所述样品中针对肝脏疾病的一种或多种生物标志物的水平，其中所述一种或多种生物标志物选自表12、表2、表3、表4、表5、表7、表8、表10、表11、表14、表16、和/或表18，以及将所述样品中所述一种或多种生物标志物的水平与所述一种或多种生物标志物的肝脏疾病阳性和/或肝脏疾病阴性参考水平相比较以诊断所述受试者是否患有肝脏疾病。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.11.19 US 62/081,903;2015.04.01 US 62/141,4941.一种诊断或帮助诊断受试者是否患有肝脏疾病的方法，所述方法包括：分析来自受试者的生物样品以确定所述样品中针对肝脏疾病的一种或多种生物标志物的水平，其中所述一种或多种生物标志物选自表12、表2、表3、表4、表5、表7、表8、表10、表11、表14、表16、和/或表18，以及将所述样品中所述一种或多种生物标志物的水平与所述一种或多种生物标志物的肝脏疾病阳性和/或肝脏疾病阴性参考水平相比较以诊断所述受试者是否患有肝脏疾病。2.如权利要求1所述的方法，其中所述肝脏疾病是NAFLD。3.如权利要求1所述的方法，其中所述肝脏疾病是NAFLD并且所述一种或多种生物标志物选自由以下各项组成的组：5-甲硫基腺苷(5-MTA)、甘氨酸、丝氨酸、亮氨酸、4-甲基-2-氧代戊酸盐、3-甲基-2-氧代戊酸盐、缬氨酸、3-甲基-2-氧代丁酸盐、2-羟基丁酸盐、脯氨酰脯氨酸、羊毛甾醇、牛磺-β-鼠胆酸盐、以及脱氧胆酸盐。4.如权利要求1所述的方法，其中所述肝脏疾病是NASH并且所述一种或多种生物标志物选自表7、表8、表10、和/或表11。5.如权利要求1所述的方法，其中所述肝脏疾病是纤维化并且所述一种或多种生物标志物选自表12、表10、表11、表14、表16、和/或表18。6.如权利要求1所述的方法，其中所述诊断包括辨别NASH与NAFLD。7.如权利要求1所述的方法，其中使用选自由以下各项组成的组的一种或多种技术分析所述样品：质谱、ELISA、以及抗体连接。8.如权利要求1所述的方法，其中所述方法包括使用包含选自表12、表2、表3、表4、表5、表7、表8、表10、表11、表14、表16、和/或表18的一种或多种生物标志物或测量结果的数学模型来分析所述受试者以及来自所述受试者的生物样品。9.一种确定患有肝纤维化的受试者的纤维化分期的方法，所述方法包括：分析来自受试者的生物样品以确定所述样品中针对肝脏疾病的一种或多种生物标志物的水平，其中所述一种或多种生物标志物选自表12、表2、表3、表4、表5、表7、表8、表10、表11、表14、表16、和/或表18，以及将所述样品中所述一种或多种生物标志物的水平与所述一种或多种生物标志物的高分期肝纤维化和/或低分期肝纤维化参考水平相比较以确定所述肝纤维化的分期。10.如权利要求9所述的方法，其中使用数学模型来确定患有肝纤维化的受试者的肝纤维化分期。11.一种监测受试者的肝脏疾病的进展/消退的方法，所述方法包括：分析来自受试者的第一生物样品以确定所述样品中针对肝脏疾病的一种或多种生物标志物的水平，其中所述一种或多种生物标志物选自表12、表2、表3、表4、表5、表7、表8、表10、表11、表14、表16、和/或表18，并且所述第一样品是在第一时间点从所述受试者获得的；分析来自受试者的第二生物样品以确定所述一种或多种生物标志物的水平，其中所述第二样品是在第二时间点从所述受试者获得的；以及将所述第一样品中所述一种或多种生物标志物的水平与所述第二样品中所述一种或多种生物标志物的水平相比较以监测所述受试者的肝脏疾病的进展/消退。12.如权利要求11所述的方法，其中所述方法还包括将所述第一样品中所述一种或多种生物标志物的水平、所述第二样品中所述一种或多种生物标志物的水平、和/或所述第一样品和所述第二样品中所述一种或多种生物标志物的水平的比较结果与所述一种或多种生物标志物的肝脏疾病阳性和/或肝脏疾病阴性参考水平相比较。13.如权利要求11所述的方法，其中所述方法包括使用包含选自表12、表2、表3、表4、表5、表7、表8、表10、表11、表14、表16、和/或表18的一种或多种生物标志物或测量结果的数学模型来分析所述受试者以及来自所述受试者的生物样品。14.一种在患有肝脏疾病的受试者中辨别不太严重的肝脏疾病与更严重的肝脏疾病的方法，所述方法包括：分析来自受试者的生物样品以确定所述样品中针对肝脏疾病的一种或多种生物标志物的水平，其中所述一种或多种生物标志物选自表12、表2、表3、表4、表5、表7、表8、表10、表11、表14、表16、和/或表18，以及将所述样品中所述一种或多种生物标志物的水平与所述一种或多种生物标志物的不太严重的肝脏疾病和/或更严重的肝脏疾病参考水平相比较以确定所述受试者的肝脏疾病的严重程度。15.如权利要求14所述的方法，其中使用数学模型在患有肝脏疾病的受试者中辨别不太严重的肝脏疾病与更严重的肝脏疾病。16.一种帮助在已经被诊断为患有肝脏疾病的受试者中辨别NASH与NAFLD的方法，所述方法包括：分析来自受试者的生物样品以确定所述样品中针对肝脏疾病的一种或多种生物标志物的水平，其中所述一种或多种生物标志物选自表2、表3、表4、表5、表7、表8、表10、和/或表11，以及将所述样品中所述一种或多种生物标志物的水平与所述一种或多种生物标...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·佩里肖恩，L·N·贝尔，J·伍尔夫，U·T·恩格扬，S·M·瓦特金斯，
申请(专利权)人：梅塔博隆股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US