手性毒性筛选方法技术

本发明专利技术涉及通过在体外或体内产生和筛选具有降低的毒性的化合物的立体定向的手性硫代磷酸酯变体文库来鉴定具有降低的毒性的立体定向的硫代磷酸酯寡核苷酸变体的方法。

Chiral toxicity screening method

Methods phosphorothioate oligonucleotides variants of the present invention relates to a stereotactic produced in vitro or in vivo and screening of compounds with reduced toxicity of chiral phosphorothioate variant library to identify stereotactic with reduced toxicity.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】手性毒性筛选方法
本专利技术涉及通过在体外或体内产生和筛选立体定向手性硫代磷酸酯变体文库中具有降低的毒性的化合物来鉴定具有降低的毒性的立体定向的硫代磷酸酯寡核苷酸变体的方法。
技术介绍
Koziolkiewicz等人(NAR1995,24；5000-5005)公开了15merDNA硫代磷酸酯寡核苷酸，其中硫代磷酸酯键是[全-Rp]构型或[全-Sp]构型，或非对映异构体的无规混合物。发现[all-Rp]与杂交体或[全-Sp]寡核苷酸相比，“更容易受到”RNA酶H依赖性降解，并被发现具有更高的双链体热稳定性。建议在实际应用中，[全Rp]寡核苷酸应在3’末端被[Sp]硫代磷酸酯保护。Stec等人(J.Am.Chem.Soc.1998,120；7156–7167)报道了5’-DMT-脱氧核糖核苷3’-O-(2-硫代-“螺”-4,4-五亚甲基-1,2,3-氧杂硫杂磷杂环戊烷)的新的单体，用于经由氧杂硫杂磷杂环戊烷方法进行PS-寡核苷酸的立体控制的合成。Karwowski等人(Bioorganic&Med.Chem.Letts.200111；1001-1003)使用氧杂硫杂磷杂环戊烷方法本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种降低反义寡核苷酸序列(母体寡核苷酸)的毒性的方法，包括以下步骤a.产生立体定向的寡核苷酸变体(子寡核苷酸)文库，其保留母体寡核苷酸的核心核碱基序列，b.筛选在步骤a中产生的文库在细胞中的体外或体内毒性，c.鉴定文库中存在的一种或多种立体定向的变体，其与母体寡核苷酸相比在细胞中具有降低的毒性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.16 EP 14198167.0;2015.08.25 EP 15182401.8;1.一种降低反义寡核苷酸序列(母体寡核苷酸)的毒性的方法，包括以下步骤a.产生立体定向的寡核苷酸变体(子寡核苷酸)文库，其保留母体寡核苷酸的核心核碱基序列，b.筛选在步骤a中产生的文库在细胞中的体外或体内毒性，c.鉴定文库中存在的一种或多种立体定向的变体，其与母体寡核苷酸相比在细胞中具有降低的毒性。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述母体寡核苷酸是反义间隙体寡核苷酸。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述立体定向的寡核苷酸变体文库的每个成员通过将至少一个立体定向的硫代磷酸酯核苷间键插入所述间隙体的间隙区域而产生。4.根据权利要求2或3所述的方法，其中所述立体定向的寡核苷酸变体文库的每个成员通过将至少一个立体定向的硫代磷酸酯核苷间键插入所述间隔体的一个或两个翼区而产生。5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述立体定向的寡核苷酸变体文库的每个成员包含至少2个，例如至少3个，例如至少4个立体定向的硫代磷酸酯键，其中剩余的键可以任选地是非立体定向的硫代磷酸酯键。6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中存在于立体定向的寡核苷酸变体文库的每个成员中的所有硫代磷酸酯键都是立体定向的硫代磷酸酯键。7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中立体定向的寡核苷酸变体或其间隙体区的文库的每个成员中存在的所有核苷间键都是立体定向的硫代磷酸酯键。8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中立体定向的寡核苷酸变体文库的每个成员保留存在于母体寡核苷酸中的修饰和未修饰的核苷的模式，例如反义间隙体寡核苷酸。9.根据权利要求1至8中任一...

【专利技术属性】
技术研发人员：N·阿尔贝克，M·古布勒，P·哈格多恩，H·F·汉森，T·科赫，A·穆伊桑，J·拉夫恩，C·罗森博姆，S·索英，
申请(专利权)人：罗氏创新中心哥本哈根有限公司，
类型：发明
国别省市：丹麦,DK