利用骨髓类似结构的细胞培养方法、和用于骨损伤部位的治疗的聚酰亚胺多孔膜技术

本发明专利技术涉及骨髓细胞的培养方法，包括将骨髓细胞施加到聚酰亚胺多孔膜，培养。此外，本发明专利技术涉及用于骨损伤部位的治疗的聚酰亚胺多孔膜。

Cell culture method using bone marrow like structure, and polyimide porous membrane for treatment of bone lesion site

The present invention relates to a method for culturing bone marrow cells, including applying a bone marrow cell to a polyimide porous membrane. In addition, the present invention relates to polyimide porous membranes for the treatment of bone injury sites.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】利用骨髓类似结构的细胞培养方法、和用于骨损伤部位的治疗的聚酰亚胺多孔膜
本专利技术涉及使用包括在三维培养载体骨髓类似结构的细胞培养物。具体而言涉及使用骨髓类似结构的聚酰亚胺多孔膜细胞培养物。此外，本专利技术涉及一种用于骨损伤部位的治疗的柔性多孔片材。具体而言涉及用于骨损伤部位的治疗的聚酰亚胺多孔膜
技术介绍
细胞培养细胞存在作为体内一般三维群，在经典的平面培养是在细胞粘到容器的形式单层培养。在培养环境的差异是报告的细胞的性质非常不同批次。在培养环境骨髓相关细胞，强烈的倾向，从脚手架增长的影响，这样的情况经常报道使用三维培养载体，以促进细胞培养。在专利文献1中，通过使用非织造纤维基质形成纤维的三维网络中，造血干细胞或造血前体细胞通过增加/保持在体外的方法分离的未分化从体内它已被证明生物反应器。使用类似的非织造材料在非专利文献1中示出。此外，虽然造血干细胞的干细胞已知是易受丢失，非专利文献2中，以合成的多孔水凝胶，通过在其上培养造血干细胞，该细胞来源特异性的造血干细胞可见，能保持严厉。此外，更直接的情况下，如专利文献2所示，由接种骨髓干细胞的磷酸钙化合物构成的载体的表面，显示出有效的粘合性的情况下的细胞已经报道。从由三月培养形成小鼠骨髓空间支架，收集另外，在专利文献3中，大岛筑波等人，接种胶原处理过的聚乙烯夹细胞移植它到小鼠的背部通过，有报道可作为人造骨髓造血功能。然而，足以用于实际应用的方法尚未建立的今天。此外，在以前的专利技术的例子，其中可以清楚地看到的三维结构是紧密正比于功能和效率，尽管三维脚手架结构的重要性已被示出，它是被称为大的封闭概念“构象”和或骨髓类似组合物中，并且保持在多孔结构的大小控制的观点出发，从形态学和解剖学的观点来看，形态结构未从视点前进时，它类倪于。更有效和为建立高方法实用的，并建立呈现的一个新的观点，需要存在的骨髓细胞培养方法的。骨损伤与治愈骨折和骨治愈损害，包括骨缺损，考虑到患者的QOL，比老，通过固定用板和螺钉受影响的区域的方法已经尝试使用大量的仪器和装置的的手术技术。近年、骨病治愈材料和设备具有多种结构特征和功能特征，创建生物友好特征，其被用于医疗(非专利文献3、专利文献4)。此外，从再生医疗的观点和方法已经尝试以促进骨损伤，包括骨折和骨缺损治愈，例如，生物材料或生物可吸收的材料如胶原和磷灰石如间质干细胞它报告给复合培养的细胞补充到受影响的区域等的方法(专利文献5和6)。此外，是否干细胞可用于治疗功效的贡献是共存讨论了一些(非专利文献4)。这些方法，以及生物材料，包括生物材料和细胞，该材料包括细胞，并通过使用活体自我分解物质的组合，虽然一大特点，可以补充病变或缺陷，箱子和非常耗时的情况下这是不适合于响应于一个大的部分的损坏，丢失或复杂的形状时。在另一方面，在牙科领域，治疗的方式在表面上形成的膜，以留出空间创伤部的已进行(非专利文献5)。这是为了避免在创伤部上皮过早手术技术，而不是一个方法可以是适合于在骨再生一般用途。适应不同的创伤部，包括大量缺损部位和复杂形状部位，治疗装置简单而有效的骨损伤已经期望。聚酰亚胺多孔膜聚酰亚胺是在重复细胞群中包含酰亚胺键的高分子(聚合物)的总称，通常是指芳族化合物通过直接酰亚胺键连接的芳族聚酰亚胺。芳族聚酰亚胺具有芳族和芳族通过酰亚胺键的共轭结构，具有刚硬、牢固的分子结构，并且酰亚胺键具有强的分子间力，因此，具有非常高水平的热的、机械的、化学的性质。聚酰亚胺多孔膜过滤器在本专利技术前更多地用于滤器，低介电常数膜，燃料电池电解质膜，特别地以电池关系中心的用途。专利文献7-9中记载了，特别是在气体等物质透过性中是优异的，孔隙率高，两个表面的平滑性优异，相对强度高，孔隙率高，但是对于膜厚度方向的压缩应力耐力优良的具有大量大孔隙的聚酰亚胺多孔膜。每个这些是经由酰胺酸制备的聚酰亚胺多孔膜。现有技术文献专利文献【专利文献1】国际公开(国際公開)WO2000/046349【专利文献2】特许(特許)第4393908号【专利文献3】特许(特許)第3421741号【专利文献4】特许(特許)第3029266号【专利文献5】特许(特許)第4412537号【专利文献6】特许(特許)第4950269号【专利文献7】WO2010/038873【专利文献8】特开(特開)2011－219585【专利文献9】特开(特開)2011－219586【非专利文献】【非专利文献1】フナコシニュース2012年10月1日号【非专利文献2】A.Raic等人./Biomaterials35(2014)929-940【非专利文献3】F.G.Lyons等人./Biomaterials31(2010)9232-9243【非专利文献4】S.Wu等人./MaterialsScienceandEngineeringR80(2014)1-36【非专利文献5】株式会社ジーシージーシーメンブレンマニュアル专利技术概述专利技术要解决的课题本专利技术的目的在于提供一种更有效的和高度实用的骨髓细胞培养物的方法。本专利技术是与不同的创伤部表面兼容的，其目的在于提供一种治疗简单而有效的骨损伤的手段。用于解决课题的手段本专利技术人已经发现，具有该聚酰亚胺多孔膜的三维结构是一种有机薄膜时，近似形态骨髓结构。然后，通过培养使用聚酰亚胺多孔膜的骨髓细胞，我们发现，有可能生长的CD45阳性细胞。令人惊讶地，当使用聚酰亚胺多孔膜，根据聚酰亚胺多孔膜的三维结构培养的骨髓细胞中还发现，具有类似特性的分化骨髓细胞块发生。然后，通过使用分化诱导启动子，培养的细胞，我们发现，有可能分化成红细胞前体细胞的聚酰亚胺多孔膜。本专利技术人的聚酰亚胺多孔膜构象接近于形态骨髓结构被发现可用于骨损伤部位的治疗。不存在限制，但是，本专利技术优选包括以下几个方面。[方式1]骨髓细胞的培养方法，包括将骨髓细胞施加到聚酰亚胺多孔膜，进行培养。[方式2]方式1中记载的方法，骨髓细胞是骨髓基质细胞。[方式3]方式1中记载的方法，骨髓细胞是骨髓来源的血液细胞(血细胞)。[方式4]方式1～3的任一项中记载的方法，骨髓细胞是从哺乳动物的骨髓采取的细胞。[方式5]方式1～3的任一项中记载的方法，骨髓细胞是从哺乳动物骨髓采取的细胞的原代培养细胞。[方式6]方式1～5的任一项中记载的方法，进一步包括，通过培养将骨髓细胞分化成造血细胞(血细胞株细胞)。[方式7]方式1～6的任一项中记载的方法，进一步包括，将骨髓细胞施加至聚酰亚胺多孔膜后，添加分化诱导促进物质和培养，促进骨髓细胞向造血细胞(血细胞株细胞)的分化，使得其具有聚酰亚胺多孔膜的立体结构特异性。[方式8]方式6或7中记载的方法，包括回收使用权利要求6或7中记载的方法获得的造血细胞(血细胞株细胞)。[方式9]方式6-8的任一项中记载的方法，造血细胞(血细胞株细胞)是红细胞前体细胞或红细胞。[方式10]骨髓细胞的培养方法，其包括(1)将第一细胞群施加到聚酰亚胺多孔膜、培养的工序和，(2)将第二细胞群施加到工序(1)的培养后的聚酰亚胺多孔膜、培养的工序其中，所述第二细胞群是骨髓细胞。[方式11]方式10中记载的方法，第一细胞群选自由以下组成的组：动物细胞，昆虫细胞，植物细胞，酵母菌和细菌。[方式12]方式11中记载的方法，第一细胞群是哺乳动物来源的骨髓细胞。本文档来自技高网...

【技术保护点】
骨髓细胞的培养方法，包括将骨髓细胞施加到聚酰亚胺多孔膜，进行培养。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.01.26 JP 2015-012696;2015.01.26 JP 2015-012741.骨髓细胞的培养方法，包括将骨髓细胞施加到聚酰亚胺多孔膜，进行培养。2.权利要求1中记载的方法，骨髓细胞是骨髓基质细胞。3.权利要求1中记载的方法，骨髓细胞是骨髓来源的血液细胞(血细胞)。4.权利要求1-3的任一项中记载的方法，骨髓细胞是从哺乳动物的骨髓采取的细胞。5.权利要求1-3的任一项中记载的方法，骨髓细胞是从哺乳动物骨髓采取的细胞的原代培养细胞。6.权利要求1-5的任一项中记载的方法，进一步包括，通过培养将骨髓细胞分化成造血细胞(血细胞株细胞)。7.权利要求1-6的任一项中记载的方法，进一步包括，将骨髓细胞施加至聚酰亚胺多孔膜后，添加分化诱导促进物质和培养，促进骨髓细胞向造血细胞(血细胞株细胞)的分化，使得其具有聚酰亚胺多孔膜的立体结构特异性。8.造血细胞(血细胞株细胞)的制备方法，包括回收使用权利要求6或7中记载的方法获得的造血细胞(血细胞株细胞)。9.权利要求6-8的任一项中记载的方法，造血细胞(血细胞株细胞)是红细胞前体细胞或红细胞。10.骨髓细胞的培养方法，其包括(1)将第一细胞群施加到聚酰亚胺多孔膜、培养的工序和，(2)将第二细胞群施加到工序(1)的培养后的聚酰亚胺多孔膜、培养的工序其中，所述第二细胞群是骨髓细胞。11.权利要求10中记载的方法，第一细胞群选自由以下组成的组：动物细胞，昆虫细胞，植物细胞，酵母菌和细菌。12.权利要求11中记载的方法，第一细胞群是哺乳动物来源的骨髓细胞。13.权利要求10-12的任一项中记载的方法，进一步包括，通过工序(2)的培养使骨髓细胞分化成造血细胞(血细胞株细胞)。14.权利要求10-14的任一项中记载的方法，进一步包括，在工序(2)中将第二细胞群施加至聚酰亚胺多孔膜后，添加分化诱导促进物质和培养，促进是第二细胞群的骨髓细胞向造血细胞(血细胞株细胞)的分化，使得其具有聚酰亚胺多孔膜的立体结构特异性。15.造血细胞(血细胞株细胞)的制备方法，包括回收使用权利要求13或14中任一项中记载的方法获得的造血细胞(血细胞株细胞)。16.权利要求13-15任一项中记载的方法，造血细胞(血细胞株细胞)是红细胞前体细胞或红细胞。17.权利要求1-16任一项中记载的方法，聚酰亚胺多孔膜是，包含从四羧酸二酐和二胺获得的聚酰亚胺的聚酰亚胺多孔膜。18.权利要求17记载的方法，聚酰亚胺多孔膜是，使包含从四羧酸二酐和二胺得到的聚酰胺酸溶液和着色前体的聚酰胺酸溶液组合物成形后、在250℃以上进行热处理、由此得到的着色的聚酰亚胺多孔膜。19.权利要求17或18中记载的方法，前述聚酰亚胺多孔膜是具有两个不同的表层面和大空隙层的多层结构的聚酰亚胺多孔膜。20.权利要求1～19中任一项中记载的方法，将两个以上(两种以上)聚酰亚胺多孔膜，在细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：太田启介，平岛伸悟，萩原昌彦，清水基久，
申请(专利权)人：宇部兴产株式会社，学校法人久留米大学，
类型：发明
国别省市：日本,JP