In vitro method for characterizing bile excretion of a chemical entity using a single hepatocyte culture. Including includes forming at least one canalicular liver cell culture; cell culture and make the first contact by chemical entities is sufficient to allow cultured liver cell uptake of chemical entities in the time; in case of failure of liver cell lysis at least one bile duct, and detected by at least one bile duct the release of the first chemical entity and / or its metabolites amount (if any); and the cleavage of liver cells and the first chemical entity detection released by liver cells and / or its metabolites amount.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】体外胆汁排泄测定法专利技术背景经常不期望通过肝脏中的首次通过代谢从动物的循环系统中除去治疗性化学实体。如果化学实体被肝细胞摄取并且经由胆小管在胆汁中排泄,则化学实体将永远不会达到其治疗靶标。对于肝细胞而言内源性的转运蛋白负责将底物移动过肝细胞的窦状膜,然后进入胆小管。胆小管是肝组织中的结构,其从肝细胞接收排泄的组分,并将胆汁转运到胆总管以从动物中除去。因此,底物的胆汁排泄是一种复杂的过程,其涉及穿过窦状膜的移位、经由细胞质的运动、和穿过小管膜的转运。母体药物或其代谢物的肝胆排泄经常在药物的总体清除中起重要作用的理解已经迫使制药行业探索更好的体外工具来预测这种清除途径。出于此原因,化学实体用作药物的合适性的重要决定因素是其受胆汁排泄的程度及其对其它化学实体的胆汁排泄的影响两者。本领域已经教导了化学实体的胆汁清除的两种一般类型的体外测定法。第一种测定类型是利用两种平行的肝细胞培养物的双培养测定形式。(BI,Yi-an等,“Useofcryopreservedhumanhepatocytesinsandwichculturetomeasurehepatobiliarytransport,”DrugMetabDispos.,Vol.34,No.9,pp.1658-65(2006);ANSEDE,JohnH.等,“AnInVitroAssaytoAssessTransporter-BasedCholestaticHepatotoxicityUsingSandwich-CulturedRatHepatocytes,”DrugmetabolismandDispositio ...
【技术保护点】
一种表征化学实体的胆汁排泄的体外方法,其包括:a)提供包含形成至少一个胆小管的肝细胞的细胞培养物;b)使所述细胞培养物与第一化学实体接触足以允许由所述培养物中的肝细胞摄取所述化学实体的时间;c)在不裂解所述肝细胞的情况下破坏所述至少一个胆小管,并且检测由所述至少一个胆小管释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量(如果有的话);并且d)裂解所述肝细胞,并检测由所述肝细胞释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.09.02 US 62/044,8131.一种表征化学实体的胆汁排泄的体外方法,其包括:a)提供包含形成至少一个胆小管的肝细胞的细胞培养物;b)使所述细胞培养物与第一化学实体接触足以允许由所述培养物中的肝细胞摄取所述化学实体的时间;c)在不裂解所述肝细胞的情况下破坏所述至少一个胆小管,并且检测由所述至少一个胆小管释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量(如果有的话);并且d)裂解所述肝细胞,并检测由所述肝细胞释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量。2.权利要求1的方法,其中所述细胞培养物是包含布置在固体基底的表面上的肝细胞和基质细胞的肝细胞-基质细胞共培养物。3.权利要求1的方法,其中在步骤c)中由所述至少一个胆小管释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量高于在步骤d)中由所述肝细胞释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量。4.权利要求1的方法,其中在步骤c)中由所述至少一个胆小管释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量低于在步骤d)中由所述肝细胞释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量。5.权利要求1的方法,其中使用LC-MS/MS检测步骤c)和/或d)中第一化学实体和/或其代谢物的量。6.权利要求1的方法,其中所述第一化学实体不包含标记物。7.权利要求1的方法,其中通过在包含拉春库林A(LatA)和/或不包含钙的培养基中温育所述培养物而在不裂解所述培养物中的肝细胞的情况下破坏所述至少一个胆小管。8.权利要求1的方法,其还包括在所述细胞培养物中对所述第一化学实体测定内在胆汁清除(CL胆汁)和/或胆汁排泄指数(BEI)。9.权利要求8的方法,其还包括将所述第一化学实体的CL胆汁和/或BEI与对照化学实体的CL胆汁和/或BEI比较,并且基于所述比较来表征所述第一化学实体的胆汁排泄。10.权利要求1的方法,其中在所述肝细胞中抑制至少一种肝细胞转运蛋白的活性。11.权利要求1的方法,其还包括在步骤b)中使所述细胞培养物与第二化学实体接触。12.权利要求11的方法,其还包括在步骤c)中检测由所述至少一个胆小管释放的所述第二化学实体和/或其代谢物的量。13.权利要求12的方法,其还包括在步骤d)中检测由所述肝细胞释放的所述第二化学实体和/或其代谢物的量。14.一种表征化学实体的胆汁排泄的体外方法,其包括:a)提供包含形成至少一个胆小管的肝细胞的第一细胞培养物,其中在所述第一细胞培养物的所述肝细胞中抑制至少一种肝细胞转运蛋白的活性;b)使所述第一细胞培养物与第一化学实体接触;c)在不裂解所述第一细胞培养物中的所述肝细胞的情况下破坏所述第一细胞培养物中的至少一个胆小管,并且检测由所述至少一个胆小管释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量(如果有的话);d)裂解所述第一细胞培养物中的肝细胞,并检测由所述肝细胞释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量;e)提供包含形成至少一个胆小管的肝细胞的第二细胞培养物,其中在所述第二细胞培养物的所述肝细胞中不抑制所述至少一种肝细胞转运蛋白的活性;f)使所述第二细胞培养物与所述第一化学实体接触;g)在不裂解所述第二细胞培养物中的所述肝细胞的情况下破坏所述第二细胞培养物中的至少一个胆小管,并且检测由所述至少一个胆小管释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量(如果有的话);并且h)裂解所述第二细胞培养物中的肝细胞,并检测由所述肝细胞释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量。15.权利要求14的方法,其中所述第一和第...
【专利技术属性】
技术研发人员:E·诺维克,C·曹,A·帕雷克,R·弗里德曼,M·L·亚尔穆什,E·普鲁德文斯基,
申请(专利权)人:休雷尔公司,
类型:发明
国别省市:美国,US
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