一种A型赛尼卡谷病毒灭活疫苗及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种A型赛尼卡谷病毒灭活疫苗及其制备方法和应用。所述的A型赛尼卡谷病毒灭活疫苗中含有灭活后的猪A型赛尼卡谷病毒全病毒颗粒抗原以及佐剂，其中所述的猪A型赛尼卡谷病毒全病毒颗粒抗原是由猪A型赛尼卡病毒全长感染性cDNA克隆通过病毒拯救获得的，所述的感染性cDNA克隆的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术将灭活的猪A型赛尼卡谷病毒全病毒颗粒抗原与兽医药学上可接受的佐剂相配伍，特别是兽医学上可接受的多聚赖氨酸羟甲基纤维素聚肌胞配伍，可提高灭活全病毒疫苗的免疫原性和效果，一头份就可产生完全保护，保护持续期1年。相比亚单位、病毒样颗粒疫苗，生产成本低，相比减毒活疫苗更加安全。

A type inactivated inactivated Valley virus vaccine, preparation method and application thereof

The invention discloses a A type inactivated inactivated Valley virus vaccine, a preparation method and an application thereof. The type A Seneca Valley virus inactivated vaccine contains Inactivated Porcine type A whole virus particles Seneca Valley virus antigen and adjuvant, wherein the Seneca Valley virus type A in swine virus particle antigen was obtained by virus rescue by full-length porcine A Seneca virus infection cDNA cloning and nucleotide sequence of infectious cDNA clone of the SEQ as shown in ID NO.1. The invention of adjuvant Inactivated Porcine type A Seneca Valley virus whole virion antigen and veterinary pharmaceutical acceptable phase compatibility, especially poly lysine hydroxy methyl cellulose poly and veterinary medicine acceptable, can improve the immune inactivated whole virus vaccine immunogenicity and effect, a a head can produce complete protection, protection of the duration of 1 years. Compared to the subunit, the virus like pellet vaccine has low production cost and is safer than the attenuated live vaccine.

【技术实现步骤摘要】
一种A型赛尼卡谷病毒灭活疫苗及其制备方法和应用
本专利技术涉及一种A型赛尼卡谷病毒灭活疫苗及其制备方法和应用，还涉及一种猪A型赛尼卡病毒的全长感染性cDNA克隆以及由该全长感染性cDNA克隆拯救得到的猪A型赛尼卡病毒。本专利技术属于生物医药

技术介绍
A型赛尼卡谷病毒(SenecaValleyvirusA，SVA)是小RNA病毒科赛尼卡谷病毒属的唯一成员，能够引起母猪严重的水泡病和新生仔猪死亡，可能通过猪尿液传播。2014和2015年,美国、巴西母猪发生水疱病、仔猪死亡爆发流行，造成巨大经济损失。防控赛尼卡谷病毒的关键在于制备赛尼卡谷病毒灭活疫苗，传统赛尼卡谷病毒灭活疫苗的制备方法是通过采用猪A型赛尼卡谷病毒在猪睾丸二倍体细胞或猪肾传代细胞增殖，进而灭活后制得，但病毒在增殖过程中存在生长慢、滴度低等的问题，且这些细胞有内源性病毒污染，大大限制了大规模工业生产。对此，本专利技术提供了一种猪A型赛尼卡谷病毒的全长感染性克隆，克服了猪A型赛尼卡谷病毒在猪睾丸二倍体细胞或猪肾传代细胞上生长慢、滴度低等的问题,拯救获得的A型赛尼卡谷病毒在MRC-5、BHK-21细胞的连续传代，纯化了本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种A型赛尼卡谷病毒灭活疫苗，其特征在于含有灭活后的猪A型赛尼卡谷病毒全病毒颗粒抗原以及佐剂，其中所述的猪A型赛尼卡谷病毒全病毒颗粒抗原是由猪A型赛尼卡病毒全长感染性cDNA克隆通过病毒拯救获得的，所述的感染性cDNA克隆的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种A型赛尼卡谷病毒灭活疫苗，其特征在于含有灭活后的猪A型赛尼卡谷病毒全病毒颗粒抗原以及佐剂，其中所述的猪A型赛尼卡谷病毒全病毒颗粒抗原是由猪A型赛尼卡病毒全长感染性cDNA克隆通过病毒拯救获得的，所述的感染性cDNA克隆的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.如权利要求1所述的A型赛尼卡谷病毒灭活疫苗，其特征在于所述的佐剂为含有20-50g/L多聚赖氨酸羟甲基纤维素聚肌胞(PolyICLC)，0.1-0.5g/L的EDTA以及0.01-0.1g/L的吐温-20的磷酸缓冲液，调节pH值8.0，优选的，所述的佐剂为含有25g/L多聚赖氨酸羟甲基纤维素聚肌胞(PolyICLC)，0.2g/L的EDTA以及0.05g/L的吐温-20的50mM磷酸缓冲液，调节pH值8.0。3.一种制备权利要求1或2所述的A型赛尼卡谷病毒灭活疫苗的方法，其特征在于包括以下步骤：1)猪A型赛尼卡病毒全病毒颗粒抗原的制备(1)猪A型赛尼卡谷病毒的拯救构建含有猪A型赛尼卡谷病毒的全长感染性cDNA克隆的表达载体，其中所述cDNA克隆具有SEDIDNO.1所示的核苷酸序列；优选的，所述的表达载体是通过将SEDIDNO.1所示的核苷酸序列克隆入pSVL载体中构建得到的；(2)猪肾细胞系IBRS-2用含10v/v％胎牛血清的MEM基础培养基培养到70-90％铺满，将步骤(1)构建得到的表达载体转染IBRS-2，37℃，5％CO2孵育箱培养，培养48小时后的上清移到ST细胞上继续培养，观察细胞病变效应，在感染后出现明显细胞病变效应时收获病毒，即为拯救得到的猪A型赛尼卡谷病毒；(3)病毒的传代适应拯救得到的猪A型赛尼卡谷病毒经过ST细胞、MRC-5细胞的传代适应培养获得适应MRC-5细胞的猪A型赛尼卡谷病毒，然后接种BHK-21细胞进行传代适应培养，获得适应BHK-21细胞培养的猪A型赛尼卡谷病毒的病毒培养液；(4)澄清病毒培养液用8μm的聚丙烯预过滤器过滤，再经0.45μm和0.2μm的过滤器过滤澄清，测定病毒滴度；(5)超滤透析澄清的病毒液用100KD膜超滤透析；(6)纯化透析后的病毒液加入MgCl2，使其终浓度为2mM，按15U/ml加入核酸酶作用2小时，离心，进行不连续氯化铯密度梯度离心，然后进行连续氯化铯密度梯度离心，每步离心结束后，收集光栅区带，用含有10v/v％甘油、50mMHEPESpH8.0的200mMTris–HCl冷透析缓冲液透析；(7)灭活纯化的病毒用RPMI164...

【专利技术属性】
技术研发人员：董金杰，田波，吕宏亮，刘萍，陈苗苗，邓瑞雪，张涛，王会宝，王凡，刘西兰，景志忠，高世杰，王超英，张云德，殷宏，张永光，
申请(专利权)人：中农威特生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：甘肃,62