作为诊断性生物标志物的抗淋巴细胞的自身抗体制造技术

提供用于诊断或监护个体中的系统性红斑狼疮的方法、系统和药盒。在特定方面，在来自个体的包含白血细胞的血液样本中，定量在样本中的在T淋巴细胞表面上沉积的或与T淋巴细胞表面接触的自身抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】作为诊断性生物标志物的抗淋巴细胞的自身抗体关于联邦政府资助研究的声明本专利技术的作出得到由(ⅰ)国立卫生研究院授予的合同RO1AI077591，和(ⅱ)美国国防部授予的研究资助W81XWH-06-2-0038的政府支持。政府享有本专利技术的某些权利。相关申请的交叉引用本专利申请要求2014年8月8日提交的，标题为“应用抗淋巴细胞自身抗体作为系统性红斑狼疮指标的方法”的美国临时专利申请号62/035073的权益，通过引用将所述临时申请的公开内容以其全部合并入本文。
技术介绍
系统性红斑狼疮(SLE)，原型自身免疫性疾病，它的特征在于无数的免疫异常，包括过量的自身抗体产生、补体系统的激活、淋巴细胞功能障碍和淋巴细胞减少。当补体系统激活时，C3和C4的蛋白水解切割最终导致C3d和C4d片段的产生，这些片段包含高反应性硫酯部分并且可以共价结合到病原体、细胞或免疫复合物的表面。本专利技术人最近报道了患有SLE的患者的红细胞、网织红细胞、血小板和淋巴细胞表面上特异性地存在显著水平的C4d。最近的多中心研究证实细胞结合的补体激活产物(CB-CAPs)作为狼疮的诊断性生物标志物，并且附加的报道已经证明它们作为狼疮疾病活动性和分层的生物标志物的显著潜力。CB-CAPs除了它们作为狼疮生物标志物的作用，已经显示出赋予循环细胞例如红细胞和T淋巴细胞以功能异常，表明在狼疮发病机理中的作用。对由此产生CB-CAPs的细胞和分子事件的阐明，可以导致通过预防、破坏或中和CB-CAP产生的下游效应中的任何一种来识别潜在的治疗靶标。在CB-CAPs和狼疮发病机理之间最引起兴趣的潜在联系之一是长期存在但了解甚少的观察结果，即患有SLE的患者庇护循环抗淋巴细胞抗体。在20世纪70年代发现了患有SLE的患者中的抗淋巴细胞抗体(ALA)，特别是对T细胞特异性的抗淋巴细胞抗体。从那时起，已经进行了很多努力来表征这些ALA。然而，它们在疾病发病机理中的作用仍然不确定。先前已经描述了SLE中抗T细胞抗体的两种主要类型。首先，在4℃时与T细胞最佳结合的冷反应性IgM抗体已被报道在患有SLE的患者中常见。然而，由于在体外试验以及体内致病分子和细胞机理之间的热差异，这些抗体的体内意义是不清楚的。第二，狼疮中的温热反应性IgG抗T细胞抗体已经被报道。已经显示这些抗体对各种T细胞表面分子，包括CD3、CD4、CD45和IL-2R，具有多样化的特异性。这些IgM对IgG抗T细胞抗体在狼疮发病机理中的两种不同的作用已经被提出，两者都涉及细胞靶标的破坏。IgM在经典补体途径的激活中有效500倍，表明T细胞可能的溶解性攻击。然而，如果这些冷反应性IgM分子的结合仅发生在低温，将在体内消除这种可能性。此外，IgM抗T细胞抗体的存在未显示与SLE中的淋巴细胞减少相关。IgG是较低效的补体激活剂，然而它们的温热反应性使得这样的体内机理至少是可行的。抗T细胞IgG的其他潜在作用已经被提出，包括抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)以及T细胞信号传导和基因表达的调节。一些报道已经表明狼疮中的T淋巴细胞功能障碍可能是由循环IgM和IgG抗T细胞自身抗体引发的而不是由于内在缺陷，尽管这两种可能性不是相互排斥的。总而言之，这些现有报道表明抗T细胞抗体存在于一些患有SLE的患者中，并且它们在疾病发病机理中的潜在作用的阐明应该考虑同种型、结合和细胞毒性的热幅度以及抗原特异性。
技术实现思路
在某些方面，提供用于在与非系统性红斑狼疮炎性疾病或病况不同的个体中特异性地诊断或监护系统性红斑狼疮的方法和系统，该方法和系统包括在来自个体的包含白血细胞的血液样本中定量在样本中的在T淋巴细胞表面上沉积的或与T淋巴细胞表面接触的个体的自身抗体的水平。在某些方面，提供药盒，所述药盒包括：(a)特异性地识别结合至T淋巴细胞的自身抗体的荧光标记的抗体，其中所述抗体是抗IgG或抗IgM单克隆抗体；(b)可选地，与谱系特异性T淋巴细胞表面标志物反应的氟共轭单克隆抗体，以区分CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞；(c)可选地，一种或更多种生化试剂；以及，(d)可选地，所述药盒和所述组分(a)、(b)和(c)在系统性红斑狼疮的诊断中的应用的说明书。附图简述图1A-F说明C4d可以与SLE患者中的CD4对CD8T细胞有区别地结合。使用在研究访视当天获得的单个血液样本同时测量结合至携带CD3、CD4或CD8的T细胞的C4d的水平。显示了来自6个代表性SLE患者的流式细胞直方图，以说明在给定时间在同一患者中CD4dT和CD8T细胞上的类似的(组A和B)或不同的(组C-F)水平的C4d的存在。闭合直方图代表Ig同种型对照染色；开放直方图代表C4d特异性的染色。图2A-C说明C4d和Ig同时存在于SLE患者中T细胞的表面上，但不存在于患有其他疾病的患者或健康对照中。(A)从326名SLE患者制备的外周血CD3T细胞通过流式细胞术表征表面结合的Ig(T-Ig)和C4d(T-C4d)。指出了4个不同的SLE患者组，C4d-/Ig-(蓝色菱形符号)，C4d+/Ig+(红色正方形符号)，C4d+/Ig-(绿色三角形符号)和C4d-/Ig+(水绿色圆形符号)。(B)通过流式细胞术测量来自SLE患者(n＝326)、患有其他疾病的患者(n＝185)和健康对照(n＝48)的CD3T细胞上的T-Ig水平。红色水平线表示T-Ig阳性的经验确定的截止值。(C)使用在研究访视当天获得的单个血液样本，通过流式细胞术测量结合在T细胞上的C4d和Ig的水平。显示了10名SLE患者的代表性结果。图3A-B说明T-C4d和T-Ig的水平随时间波动，但通常与SLE患者中特异性T细胞子集的水平相关。(A)使用在不同的研究访视时获得的单个血液样本，通过流式细胞术测量结合在T细胞上的C4d(浅色柱)和Ig(暗色柱)的水平。(B)使用多色流式细胞分析测量SLE患者的CD4(浅色柱)和CD8(暗色柱)T细胞表面上存在的C4d和Ig。图4A-D说明血浆和免疫球蛋白将供体的TC4d标识(signature)转移至正常T细胞。从健康对照制备的PBMC未处理(组A；基线表型)，或与两个T-C4d+SLE患者的血浆(组B1和C1)或纯化的Ig(组B2和C2)温育。作为阴性对照，将细胞与健康对照的血浆(组D1)或者纯化的Ig(组D2)温育。图5A-B说明来自SLE患者的抗T细胞自身抗体可以在正常T细胞上产生供体的T-C4d标识。(A)从SLE患者(SLE102086、SLE101606和SLE102763，具有高的T-C4d水平)、SLE患者(SLE102771，具有低的T-C4d水平)和健康对照(HC2009和HC2034)的血浆中纯化IgG和IgM。纯化的Ig用于体外转移。(B)患者SLE102086、SLE101919和SLE128305的血浆清除IgG和IgM，或者使用从健康对照制备的大量白细胞预吸收以清除淋巴细胞反应性Ig。然后将Ig清除的或白细胞预吸收的血浆用于体外表型转移实验。图6A-B显示区分SLE和健康对照中的ROC比较。图6A显示与所测量的所有生物标志物的ROC比较。图6B显示用CB-CAP生物标志物(TC4d、EC4d、RC4d和BC4d)的子集区分SLE和健康本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在与非系统性红斑狼疮炎性疾病或病况不同的个体中特异性地诊断或监护系统性红斑狼疮的方法，所述方法包括在来自所述个体的包含白血细胞的血液样本中定量在所述样本中的在T淋巴细胞表面上沉积的或与T淋巴细胞表面接触的所述个体的自身抗体的水平。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.08.08 US 62/035,0731.一种在与非系统性红斑狼疮炎性疾病或病况不同的个体中特异性地诊断或监护系统性红斑狼疮的方法，所述方法包括在来自所述个体的包含白血细胞的血液样本中定量在所述样本中的在T淋巴细胞表面上沉积的或与T淋巴细胞表面接触的所述个体的自身抗体的水平。2.如权利要求1所述的方法，其中所述的在T淋巴细胞表面上沉积的或与T淋巴细胞表面接触的所述个体的自身抗体的水平被测量自从所述血液样本获得的外周血单核细胞群。3.如权利要求2所述的方法，其中所述样本中的所述T淋巴细胞由至少一种T淋巴细胞细胞类型代表，所述T淋巴细胞细胞类型选自由CD4+Th1淋巴细胞、CD4+Th2淋巴细胞和CD8+细胞毒性淋巴细胞组成的组。4.如权利要求1所述的方法，所述方法还包括附加地定量在所述样本中的在T淋巴细胞表面上沉积的或与T淋巴细胞表面接触的系统性红斑狼疮的诊断性生物标志物的水平，其中所述诊断性生物标志物选自由C4d、C3d、补体途径的C4组分和补体途径的C3组分组成的组。5.如权利要求4所述的方法，其中所述诊断性生物标志物是C4d。6.一种在与非系统性红斑狼疮炎性疾病或病况不同的个体中特异性地诊断或监护系统性红斑狼疮的方法，所述方法包括：(a)在来自所述个体的包含白血细胞的血液样本中，定量在所述样本中在T淋巴细胞表面上沉积的或与T淋巴细胞表面接触的所述个体的自身抗体的水平，以及，(b)将(a)中的所述水平与在对照T淋巴细胞表面上的沉积的或与对照T淋巴细胞表面接触的自身抗体的水平进行比较，其中(a)中所述样本的升高的自身抗体的水平识别为在所述个体中的系统性红斑狼疮。7.如权利要求6所述的方法，其中所述的在T淋巴细胞表面上沉积的或与T淋巴细胞表面接触的所述个体的自身抗体的水平被测量自从所述血液样本获得的外周血单核细胞群。8.如权利要求7所述的方法，其中所述样本中的所述T淋巴细胞由至少一种T淋巴细胞细胞类型代表，所述T淋巴细胞细胞类型选自由CD4+Th1淋巴细胞、CD4+Th2淋巴细胞和CD8+细胞毒性淋巴细胞组成的组。9.如权利要求7所述的方法，其中所述T淋巴细胞是CD4+Th1淋巴细胞。10.如权利要求7所述的方法，其中所述T淋巴细胞是CD4+Th2淋巴细胞。11.如权利要求7所述的方法，其中所述T淋巴细胞是CD8+细胞毒性淋巴细胞。12.如权利要求6所述的方法，所述方法还包括附加地定量在所述样本中的在T淋巴细胞表面上沉积的或与T淋巴细胞表面接触的系统性红斑狼疮的诊断性生物标志物的水平，其中所述诊断性生物标志物选自由C4d、C3d、补体途径的C4组分和补体途径的C3组分组成的组。13.如权利要求12所述的方法，其中所述诊断性生物标志物是C4d。14.一种在与非系统性红斑狼疮炎性疾病或病况不同的个体中特异性地诊断或监护系统性红斑狼疮的方法，所述方法包括：(a)获得所述个体的包含白血细胞血液样本；(b)从所述血液样本分离外周血单核细胞群；(c)用可检测试剂温育所述外周血单核细胞群，所述可检测试剂特异性地结合到已结合至在所述外周血单核细胞群中的T淋巴细胞的细胞表面的自身抗体，形成T淋巴细胞-自身抗体-可检测试剂复合物；(d)测量所述T淋巴细胞-自身抗体-可检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·M·埃亨，CC·刘，S·M·曼兹，
申请(专利权)人：阿勒格尼辛格研究所，
类型：发明
国别省市：美国,US