用于纸基测定的测试条制造技术

本发明专利技术涉及一种用于纸基测定的测试条，所述测试条包括用于接收底物的底物添加区以及测试区，所述测试区包含捕捉剂，其中所述底物添加区位于所述测试区的上游。本发明专利技术5还涉及一种包括本发明专利技术的测试条的纸基酶测定以及使用本发明专利技术的测试条检测样品中分析物的存在的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于纸基测定的测试条对相关申请的交叉引用本申请要求2014年8月30日提交的新加坡申请号10201405360P的优先权，该新加坡申请的内容在此出于所有目的以引用的方式整体并入本文。
本专利技术涉及一种用于纸基测定的测试条。本专利技术进一步涉及一种使用所述测试条检测样品中的分析物的方法。
技术介绍
纸基测定，如浸条测试和侧流测试可供用作针对体液中的许多生理相关化合物的低成本的筛查装置。纸基测定利用测试条，所述测试条依赖于使用酶或生物/化学原理以使得能够检测分析物或与用于分析物检测的检测剂分子缀合的核苷酸或抗体。侧流测试中所用的测试条的重要限制是测试条的灵敏度，这是因为用于结果可视化的检测剂分子的检测限不佳。不佳的检测限体现为更大的样品要求。虽然这一限制可以经由使用酶-底物或辣根过氧化物酶(HRP)-四甲基联苯胺(TMB)扩增方法来克服，但是在启动底物添加步骤之前需要极少的等待时间。因而，这引入了人为误差的可能性。如果使用者过早启动添加步骤，那么可能出现假阴性。酶-底物扩增方法的另一个限制是酶底物接触测试区的速率，这直接影响向酶运送底物的速率并且因此影响测定灵敏度。因此需要提供一种克服了，或至少修正了上文所述的缺点中的一个或多个的测试条。
技术实现思路
在一个方面，提供了一种用于纸基测定的测试条，所述测试条包括用于接收底物的底物添加区；以及测试区，所述测试区包括捕捉剂，其中所述底物添加区位于所述测试区的上游。在一个方面，提供了一种纸基酶测定，所述测定包括如本文所述的测试条。在一个方面，提供了一种检测样品中分析物的存在的方法，所述方法包括以下步骤：a)使所述样品接触到如本文所述的测试条的所述测试区上；b)将底物分配到所述底物添加区上；以及c)检测来自所述测试区的发射信号以确认所述样品中存在或不存在所述分析物。在一个方面，提供了一种检测样品中分析物的存在的方法，所述方法包括以下步骤：a)使所述样品接触到如本文所述的测试条的所述检测剂区上；b)将底物分配到所述底物添加区上；以及c)检测来自所述测试区的发射信号以确认所述样品中存在或不存在所述分析物。定义如本文所用的术语“抗原结合蛋白”指的是能够结合抗原的抗体、抗体片段以及其它蛋白质构建体，如结构域。术语“抗体”在本文以最广义用以指具有免疫球蛋白样结构域的分子并且包括单克隆抗体、重组抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、双特异性抗体以及异源缀合抗体；单可变域、结构域抗体、抗原结合片段、免疫有效片段、单链Fv、双体抗体、TandabsTM等(关于可选的“抗体”形式的汇总，参见Holliger和Hudson,NatureBiotechnology,2005,第23卷,第9期,1126-1136)。短语“单可变域”指的是独立于不同的可变区或可变域、特异性结合抗原或表位的抗原结合蛋白可变域(例如VH、VHH、VL)。“结构域抗体”或“dAb”可以被认为与能够结合抗原的“单可变域”是相同的。单可变域可以是人类抗体可变域，而且还包括来自其它物种的单抗体可变域，如啮齿类动物、护士鲨以及骆驼科动物(Camelid)VHHdAb。骆驼科动物VHH是源自于包括骆驼、美洲驼、羊驼、单峰骆驼、以及原驼在内的物种的免疫球蛋白单可变域多肽，其产生天然缺少轻链的重链抗体。这样的VHH结构域可以根据本领域中可用的标准技术来人源化，并且这样的结构域被认为是“结构域抗体”。如本文所用的VH包括骆驼科动物VHH结构域。如本文所用的术语“结构域”指的是具有独立于蛋白质的其余部分的三级结构的折叠蛋白质结构。一般来说，结构域负责蛋白质的离散的功能特性，并且在很多情况下，可以被添加、去除或转移到其它蛋白质中而所述蛋白质的其余部分和/或所述结构域的功能不会丧失。“单可变域”是包含抗体可变域的特征性序列的折叠多肽结构域。因此它包括完整的抗体可变域和修饰的可变域，例如其中一个或多个环已经被不是抗体可变域特征的序列置换；或已经被截短或包含N末端或C末端延伸结构的抗体可变域；以及至少保留全长结构域的结合活性和特异性的可变域折叠片段。结构域可以独立于不同的可变区或可变域结合抗原或表位。抗原结合片段可以借助于将一个或多个CDR布置在非抗体蛋白质支架(如结构域)上来提供。所述结构域可以是结构域抗体或可以是作为选自由以下各项组成的组的支架的衍生物的结构域：CTLA-4、脂笼蛋白、SpA、亲和体、高亲合性多聚体(avimer)、GroEl、转铁蛋白、GroES、以及纤连蛋白/阿德奈汀(adnectin)，所述结构域已经经蛋白质工程化以获得与抗原，而不是天然配体的结合。抗原结合片段或免疫有效片段可以包含部分重链或轻链可变序列。片段具有至少5个、6个、8个或10个氨基酸的长度。或者，所述片段具有至少15个、至少20个、至少50个、至少75个、或至少100个氨基酸的长度。如整个本说明书中关于抗原结合蛋白所用的术语“特异性结合”意指所述抗原结合蛋白结合所关注的特定抗原而不结合或不显著结合其它蛋白质。然而，所述术语不排除以下事实，即抗原结合蛋白还可能具有与密切相关的分子的交叉反应性。本文所述的抗原结合蛋白结合抗原的亲和力可以是它们结合密切相关的分子的亲和力的至少2倍、5倍、10倍、50倍、100倍、或1000倍。如本文所用的术语“分析物”指的是所关注的化合物。一般将了解的是，分析物包括但不限于抗原、抗体、激素、药物、治疗剂、细胞蛋白质、核酸、心脏标志物、肿瘤标志物或癌症标志物、自身免疫性疾病标志物、或任何高分子。举例来说，抗原分析物可以是与感染因子相关的抗原，所述感染因子诸如病毒、细菌、真菌、或朊病毒。激素分析物的实例包括但不限于hCG、甲状腺素、TSH、胰高血糖素、胰岛素、松弛素、催乳素、促黄体激素、促黑激素、生长激素、促卵泡激素、胃泌素、缓激肽、血管加压素、以及其它释放因子；生理学上或病理学上关注的其它激素可以是分析物。作为癌症标志物或肿瘤标志物的分析物的实例包括但不限于前列腺特异性抗原(PSA)、癌胚抗原(CEA)、以及α-甲胎蛋白。然而，其它癌症标志物或肿瘤标志物可以是分析物。药物分析物的实例包括但不限于鸦片制剂。抗体分析物的实例包括但不限于免疫球蛋白，如IgG、IgM、IgA、IgE、以及IgD。治疗剂分析物的实例包括但不限于阿霉素。如本文所用的术语“样品”指的是生物样品或非生物样品。生物样品指的是从生物受试者获得的样品，包括体内或体外获得的生物组织或流体来源的样品。这些样品可以是但不限于血液、血浆、血清、颊涂片、羊水、胎儿期组织、汗液、鼻拭子或尿液、从包括人类的哺乳动物分离的器官、组织、部分、以及细胞。生物样品还可以包括生物样品(包括组织)的切片(例如器官或组织的剖面部分)。生物样品还可以包括来自生物样品的提取物，例如来自生物流体(例如血液或尿液)的抗原。非生物样品包括但不限于来自一些生态位，例如河流或湖泊的水；或实验室中使用的溶液。如本文所用的术语“施用器”指的是将化合物施用到测试条上的装置。施用器可以是膜，包括但不限于多孔膜，如滤膜。滤膜的实例包括但不限于来自WhatmanTM的Fusion5、玻璃纤维、对称和不对称的聚醚砜膜、CytoSepTM以及纤维素滤膜。如本文所用的术语“多孔膜”指的是具有孔隙的膜。多孔膜的实本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于纸基测定的测试条，所述测试条包括用于接收底物的底物添加区以及测试区，所述测试区包含捕捉剂，其中所述底物添加区位于所述测试区的上游。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.08.30 SG 10201405360P1.一种用于纸基测定的测试条，所述测试条包括用于接收底物的底物添加区以及测试区，所述测试区包含捕捉剂，其中所述底物添加区位于所述测试区的上游。2.根据权利要求1所述的测试条，其中所述底物添加区和所述测试区间隔分开配置。3.根据权利要求1所述的测试条，其中所述底物添加区和所述测试区相邻配置。4.根据权利要求1所述的测试条，其中所述底物添加区和所述测试区直接相邻配置。5.根据权利要求1至4中任一项所述的测试条，其中所述底物添加区和所述测试区之间未插入有任何其它区域。6.根据权利要求1至5中任一项所述的测试条，其中样品与检测剂预混合。7.根据权利要求1所述的测试条，其中所述底物添加区和所述测试区之间插入有检测剂区。8.根据权利要求7所述的测试条，其中检测剂被预干燥到所述检测剂区上。9.根据权利要求7所述的测试条，其中检测剂被预干燥到施用器上，并且其中所述施用器被施用到所述检测剂区上。10.根据权利要求1至5中任一项所述的测试条，其中检测剂被预干燥到所述测试区上。11.根据权利要求1至5中任一项所述的测试条，其中检测剂被预干燥到施用器上并且其中所述施用器被施用到所述测试区上。12.根据权利要求7至9中任一项所述的测试条，其中样品在所述检测剂区处与所述测试条接触。13.根据权利要求6、10或11中任一项所述的测试条，其中样品在所述测试区处与所述测试条接触。14.根据权利要求6或8至13中任一项所述的测试条，其中所述检测剂选自由以下各项组成的组：抗体、抗原、寡核苷酸以及肽，并且其中所述检测剂与酶缀合。15.根据权利要求14所述的测试条，其中所述酶是碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖脱氢酶以及辣根过氧化物酶。16.根据权利要求1至15中任一项所述的测试条，其中所述测试条是多孔膜。17.根据权利要求16所述的测试条，其中所述多孔膜选自由以下各项组成的组：硝化纤维素膜、聚偏二氟乙烯(PVDF)膜以及滤纸。18.根据权利要求17所述的测试条，其中所述膜是硝化纤维素膜。19.根据权利要求1至18中任一项所述的测试条，其中所述测试区被细分成两个或更多个区域，每一个区域包含相同的或不同的捕捉剂。20.根据权利要求19所述的测试条，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：应仪如，李荣耀，白健豪，
申请(专利权)人：新加坡科技研究局，
类型：发明
国别省市：新加坡,SG