一种食品中蛋白质定量检测用特征肽段的筛选方法技术

本发明专利技术公开了一种食品中蛋白质定量检测用特征肽段的筛选方法，属于蛋白质定量检测技术领域。所述筛选方法包括：(1)利用BLAST比对分析待测蛋白质理论酶解肽段对应的匹配得分与干扰数目；(2)经高效液相色谱串联质谱分析目标肽段的质谱响应值和碎片丰度；(3)利用拟合曲线计算目标肽段在酶解1～3小时的酶解比率；(4)计算目标肽段的回收率和精密度。本发明专利技术联合利用多种方法从特异性、质谱特性、酶解特性、准确性和稳定性等方面综合筛选适用于蛋白质准确定量的特征肽段；筛选出的特征肽段可满足高效液相色谱串联质谱法对食品基质中蛋白质的定量检测要求，实现灵敏度高，精密度好，重现性佳的蛋白质定量检测。

【技术实现步骤摘要】
一种食品中蛋白质定量检测用特征肽段的筛选方法
本专利技术涉及蛋白质定量检测
，具体涉及一种食品中蛋白质定量检测用特征肽段的筛选方法。
技术介绍
蛋白质的准确定量是生物、制药、食品等研究领域的重要内容，其传统的定量方法主要分为以凯氏定氮法、考马斯亮兰法为例的总蛋白质含量检测方法和以电泳法、酶联免疫吸附法为例的单一目标蛋白质含量检测方法。定量蛋白质组学是一种新型的蛋白质准确定量技术，基于基因组学与蛋白质组学的研究思路，以及传统电泳法与高效液相串联质谱法的技术手段，实现目标蛋白质组中多种蛋白质的准确定量。定量蛋白质组学的检测思路主要包括蛋白质提取、蛋白质纯化、蛋白质酶解、同位素标记、特征肽段筛选和特征肽段定量检测。如申请公布号为CN106442803A的专利文献公开了一种可实现牛血清白蛋白鉴定及绝对定量的试剂盒及测定方法，该试剂盒由标准物质和反应试剂两部分组成，标准物质包括：特征肽段及其内标肽段；反应试剂包括：碳酸氢铵、二硫苏糖醇、碘乙酰胺、胰蛋白酶、甲酸。通过将含牛血清白蛋白样品与反应试剂按一定的体积比混合，温育振荡后，使之发生酶解反应，再将标准物质和/或最终酶解产物分别注入高效液本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种食品中蛋白质定量检测用特征肽段的筛选方法，其特征在于，包括：(1)利用BLAST比对分析待测蛋白质理论酶解肽段对应的匹配得分与干扰数目，选择匹配得分≥20、干扰数目≤5的理论酶解肽段为候选肽段；(2)将待测蛋白质样品酶解得到肽段混合液，经高效液相色谱串联质谱分析所述的候选肽段的质谱响应值和碎片丰度，选择蛋白质组学软件评分为黄色和绿色的候选肽段为候选目标肽段；(3)测量待测蛋白质样品在不同酶解时间对应生成的所述候选目标肽段浓度，将其代入方程

【技术特征摘要】
1.一种食品中蛋白质定量检测用特征肽段的筛选方法，其特征在于，包括：(1)利用BLAST比对分析待测蛋白质理论酶解肽段对应的匹配得分与干扰数目，选择匹配得分≥20、干扰数目≤5的理论酶解肽段为候选肽段；(2)将待测蛋白质样品酶解得到肽段混合液，经高效液相色谱串联质谱分析所述的候选肽段的质谱响应值和碎片丰度，选择蛋白质组学软件评分为黄色和绿色的候选肽段为候选目标肽段；(3)测量待测蛋白质样品在不同酶解时间对应生成的所述候选目标肽段浓度，将其代入方程拟合得到所述候选目标肽段的酶解曲线方程，根据酶解曲线方程计算在酶解1～3小时对应所述候选目标肽段的酶解比率，选择酶解比率为100±10％的候选目标肽段为候选特征肽段；其中，c为对应酶解时间t时目标肽段的浓度；a为初始条件下的蛋白质浓度；a＝A，k＝(1+KM/A)以及m＝vmax/A；(4)待测蛋白质样品与加标物混合后得到加标样，分别测量加标样酶解生成的所述候选特征肽段浓度，计算所述候选特征肽段的回收率和精密度，回收率＝100±10％和精密度≤10％的候选特征肽...

【专利技术属性】
技术研发人员：任一平，蒋易蓉，
申请(专利权)人：杭州帕匹德科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33